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工业化废水处理反应器污泥总DNA提取方法


微 生物 学通报 
M ir bo o y c o il g  
t g o@ in.cc   on ba r a .n

OCT 2 . 0 8 3 (0 :1 5  ̄ 6 3  0 2 0 . 51 ) 6 9 1 6  
@ 20    nsiu eofM ir i l gy CA S 08byI tt t    c ob o o ,  

工 业化 废水 处 理 反 应 器 污 泥总 DN 提 取 方 法  A
张  苏 刘  春  杨景亮  郭建博 李再兴  
( 北科技 大学环 境科 学与 T程学 院  石家 庄 河 0 0 1) 5 0 8 



要 :根据 工业化废 水处理 反应 器 污泥特 性 , 常规 的溶 菌酶一DS酚/ 对 S . 氯仿 环境 样 品总 D NA提 

取 方 法进行 改 进,增 强样 品预 处理 ,强化 细胞 裂解 ,提 高杂质 去 除 效率 ,获 得 了一种 工 业化 污泥  总 D NA提 取 的通用 方 法,并采用 该方 法对 石 家庄若 干 实际运 行 的工业 化厌 氧 、 氧反应 器的 污泥  好

样 品进行 了总 D A提 取研 究 。结果表 明,该 方法对 所选 污泥样 品均有 效,具有 普适 性 。提 取 的污  N
泥总 D NA杂质含 量 少,纯度 高, 2 0 A2 0 1 左右 ;提取 效率 较 高,总 DN A 6/ 8 在 . 8 A产 率都在 07 /  . mgg   以上,最 大产 率 可达 0 5mgg .   /。所提取 的 污泥总 DN 可以 直接 作 为模板 进行 P R反应 , C 8 A C P R产  物 直接进 行 变性梯度 凝胶 电泳 ( G ) DG E ,能够得 到较好 的 DG GE 谱 图,表 明该 方法提取 的污泥 总 
D NA样 品 可 满足 后 续分析研 究的要 求 。   关键 词:工 业化 废 水处理 反应 器,厌 氧/ 氧 污泥,总 D 好 NA, 取 方法  提

A  e ho  orTo a   M t d f   t lDNA  t a to o   udg   m pl sf o   Ex r c i n  fSl e Sa e  r m Ful. c l   1s a e se a e   tw t r am e   o e co s t ntBi r a t r  

ZHANG    LI Ch n Su U  u   YANG i g Lin   GUO in—   LI iXi g Jn   a g Ja Bo   — n   Za
(co lf ni n na cec n  n ier g Hee U i ri   Si c n   c n lg, h izu n 5 0 8  S h o  E vr metl ine dE gn ei , bi nv syo ce e dT h oo y S Uah a g0 0 1) o o S a n   e tf n a e
Absr c :Ac o d n  o t e c a a t rsiso  l d e s m pe  r ta t c r i g t h   h r ce it   fsu g   a lsfom u1s ae wa t wae  r am e tb o e c  c f 1 c l  se t rte t n   i ra . 一 t r ,t   se ta  o a  o s he e s n ilt tlDNA  xr ci n m eh d f r mo te io m e tl s mp e  l s z m e S S p e o/ e ta t   t o   o   s  nvr n n a  a l s y o y   D . h n l o   c lr f rl m eh d wa   d fe  o i p o e sm pe p er am e t n e sf   e1l ssa d e h n e t ee f— ho o o i   t o . smo i d t m r v  a l i l  r te t n .it u iyc l y i n   n a c  h  f     i ce c   fi u i   e o a.Ob an a g n r lt tlDNA  x r cin m eh d f ri d sra  l g   a p e . in y o  mp rt r m v 1 y ti    e e a o a  e ta to   to    n u tilsud e s m ls o   Su h a m eh d wa   p le   rt t1DNA  xr c in o  l d es m pe   o  e e a u n n  u 1s ae a — c    t o   sa p id f  o a  o e ta t   fsu g  a l sf m s v r lr n i g f 1.c l  n   o r

a rbco eo i bo eco si  h iz u n , hn . h  eut idc td ta  emo ie   to   s eo i  ra rbc ira tr n S  ̄a h a g C ia T ersl  n ia   t h   df dmeh d wa    s e h t i
s i b ef ra l h   ld e s m p e n ti  t y s o n  h  aif n   e e ai Th   xr c e  oa  NA  u t l o   l t e su g   a lsi h ssud . h wi g t es t yig g n r lt a   s y. ee ta td t tl D
O  l su e s mp e   r   u e wih a o t 18 o   60 fal ldg   a l swe e p r . t  b u  .  fA2 /A 2 0 r t Them eh d wa  lo e ce t w ih   8   ai o.   t o   sas   m in ; c  a e a e ttlDN A  e d o   v r0.  /  n   a i u ye do   8   g g M o e v r alte e ta td t — v rg  o a  yil  fo e  7 mg g a d m x m m  i l  f0.5 m / . r o e . l h   x r ce  o   

tl NA a p e   o l e v   stmpltsdr c l o a p iy 1  DNA  y P a  D s m l sc ud s r e a e ae   ie t t  m lf   6Sr y b   CR. e P Th   CR  r d csc u d p o u t  o l  

b  e aae   l b   e au n   rde tg lee t p oei DGGE n  h   esp rtd wel y d n tr g ga in  e  lcr h rss(   i o )a d teDGGE b n   atrswee   a d p t n   r  e
ce re o g  o b   s d f rf rh ra ay i. 1 t e ef c si d c td t a h  oa  la  n u h t   eu e    u t e  n l ss A 1 h s  a t n ia e  h tt e t tlDNA x r ci n m eh d o   e ta to   t o   p o ie  n t i  t d   o l  e tte r q ie e t  fsu g   a p e  e e r h r m  u 1s ae wa twae   r vd d i  h ssu y c ud m e h  e u rm n so  ld e s m l sr s ac .fo f 1.c l  se tr

te t e t i r a t r. sn   o e ulr i l g  e h olg e . r am n   o e co s u i gm lc a   o o y tc n o i s b b  

基 金 项 目:河 北 省 自然 科 学 基 金 ( . 2 0 0 0 9 , o E 07 0 6 ) No E 0 8 0 64 N . 2 00 0 3  
通讯 作 者 :   :ic u 0 @mal t n h a d  l l hn2 u i . i g u . uC   ss e l

收 稿 日期 :2 0 —40 ;接 受 日期 : 2 0 .61  0 80 .3 0 80 —1

16  60

微 生物 学通 报 

20 , o. , o1  08 V 1 5N . 3 0

K e wo d :F ls ae w a twae  r am e tb o e co ,An eo i/e o i  l g ,To a  y r s ul c l  se tr te t n   ir a t r — a r b ca r b c sud e t lDN A,Ex r cin ta to   m eh d to  

污泥是 废水生 物处 理 中微 生物 的主要存 在形 式,   研究 污泥 中微生物 群落 结构 和动态 变化对 于探讨 和 

还 比较 少 。  

实 际运 行 的工业 化 废水 处理 反应 器 ,受处 理废 

改善 生物处 理性 能具有 重要 意义 。分子生 物学技 术  的迅速 发展 突破 了传 统分 离培 养技 术 的局 限 ,为微 
生物 群 落 研 究提 供 了更 为 直 接 和 可靠 的手 段 ,  
DG E、FS G IH、R P 等 分子 生物学 技术 被广 泛 的  A D 应 用于废水 处理污 泥样 品微生物 群落研 究【 。 l 研究   】 表 明,样 品总 D A 提取 以及所提取 总 D A 质量是  N N 影 响分 子生物 学技术 应用 于微生 物群 落研究 的关键  环 节之一 I7  6】 ,。

水 水 质 和运行 状 态 影 响,污 泥组 分 和结 构 复杂 ,杂  质成 分多,性状 差异 较大,对 总 DN A提取造 成一定 
困难 ,不 利于 后续 分子 生 物学技 术 手段 的应用 和研 

究 。故本 研 究 以常规 溶菌 酶一DS酚 / S 一 氯仿 提取 方法 
为基 础 ,建立 适宜 工业 化 废水处 理 反应器 污 泥特性  的总 D NA提取 方法 ,并选取 石家庄 市若 干实 际运行  的工业 化 厌 氧 、好 氧 反 应 器不 同性 状 的污 泥 样 品,  

开展 总 DN 提取研 究,同时通过 P R DG A C — GE分 析  考察 该方 法所提取 的总 D A 样 品对后续 分子生 物  N
学 技术应 用 的影 响 。  

在 污泥样 品总 DN 的提 取方法 中,污泥 分散 、 A  
细胞裂解 和杂质 去除是 决定 提取成败 和 D NA 质量  的核 心步 骤 。在常规 的提取方 法 中,污泥分散 通 常 

采用 玻璃珠 研磨 法 ;细胞 裂解 的方 法 主要包 括超 声  破碎法 、 反复冻 融法 、 璃珠研磨 法 、 沸法等 ;杂  玻 煮 质去 除多用 酚/ 仿抽提 法 9 目前常规 的环境样 品  氯 -。 ] 总 D NA 提取 方法 在土壤样 品 和实验室 小型反应 器  污泥 样品 中应用较 多 ¨ 引 。 ,针对 实 际运行 的工业 化 
废水 处理反 应器污泥 样 品总 D NA 提取 方法 的研究 

1 材料与方法 
11 污泥 样品  . 本研 究 中污泥 样 品取 自中 国石 家庄华 北制 药总 

厂 、威 尔康 制药公 司 、维 可 达制药 公 司等企业 和城 
市 污水 处理 厂实 际运行 的工 业化反 应器 及实 验室小  试 反应 器 。污 泥样 品性质 如表 1 所示 。  

1 试 剂和 仪 器  . 2 实验所用主要溶液包 括 :溶菌酶溶液( mgmL 、 5 / )    
6 D %S S、蛋 白酶 K(0 mgmL 、5 m l   C 、 1  / )   o/ Na 1 L  
C A / a 1 1  l   T , . mo/  C )苯 酚 : T B N C (0 mo/ C AB 07 l Na 1、 L   L  

B ou e r   ifg  i R型冷冻 离心机 、上海 天美有 限公 司  P mo U 6 0 型 紫 外 分 光 光 度 计 、 北 京 六 一 仪 器 厂  V2 0

DY 6 型 电泳 仪,美 国 A pid B oy t Y一C p l   iss ms公 司  e e
22 7 0型 P R仪 、 国 B oR d公 司 Ge c C 美 i. a l XR型凝  Do 胶 成像 系统等 。   1 . 污 泥总 D 3 NA提 取 方法 
()样 品 预 处 理   1

氯 仿 : 戊 醇 (52 :,v vv 、氯 仿 : 戊 醇 (41 异 2 : 1 // ) 4 异 2 :,  
vv ,异丙醇( 2 。 /) 一 0C预冷) 。   实 验所用 生化 、化 学试剂 均购 于赛 百盛生物 试 
剂 公 司。  

样品分 散 :取 污泥样 品 5mL   ,于 5 0mL离心 管 
中 。加 入 3 4粒 玻璃 珠(   ~ 半径 2 mm~    3 mm) ,研磨 

实 验 所 用 主 要 仪 器 包 括 :S R AL 公 司 O V L  
ht: o masi a .nws xb n t / u l m.cc / w tc   p/ j .



苏等:]业 化废 水处理 反应 器污泥 总 D _ NA提取 方法 

1 6  61

1   n 3 mi, 磨 时间 因污 泥絮体 特性 而异 ,颗  . mi~   n 研 5
粒化污 泥研磨 时 间最 长 。样品洗 涤 :8 0  / n离  00r mi 心 5 mi,加入 5 mL T   n     E缓 冲液( r   0   Ti 10 mmo L  s l, /
E T  0  D A 10mmo/ , H 80,振 荡 混 匀 2mi,以 上  l p  . L )   n

1   P R 产物 的变性 梯 度凝 胶 电泳 ( . 5 C DGGE 分析  )
污泥 样 品总 D NA 的 P R产 物采用 BoR d变  C i. a

性梯 度凝 胶 电泳 ( G ) DG E 仪进行 分析 。制备 8 %的聚 
丙烯 酰胺 凝胶 ,变性 剂浓 度范 围为 3 %~ 0 1 0 0 6 %(0 % 

样 品洗 涤步骤 重 复 2次 。  
()细 胞 裂 解  2

的变 性剂 为 7mol   l L尿素 和 4 %去离子 甲酰胺 混合    0
物) 。电泳条件 为 :6 。 , 0v 电压下 ,电泳 1  。 0c 6   2h  电泳 结果 经 E B染色 后用 B oR d 胶成 像系统 观察  i. a 凝 并用 Qu ni   n a tyO e软件 进行 分析 。 t  

经过 预处理 的污泥样 品, 入 5   gmL 的溶  加 0m / 菌 酶,终浓 度 为 5 mg ,在 恒 温 摇 床上 3 。     / mL 7c、 2 5 r n 条 件 下 ,振 荡 3  i;将 样 品分 装 于  2  / mi 0rn a 1  . mL 离 心 管 中 ,每 管 1 5  mL ;加 入 6 S S % D 

2 结 果及讨论 
21 工业 化 废 水处 理 反应 器 污泥 样 品总 DN 提  .   A 取策 略  实 际运行 的工 业化 废水 处理 反应 器污 泥与 实验 
室小试 反应 器污 泥组成 和性 状 的差异 , 总 DN 对 A的  提取造 成 了干扰 。本研 究 中应用 文献报 道[-7 1 1的实  5 ] 验 室小 型反应 器 污泥总 D NA 提取 方法提取 工业 化  废 水处 理反 应器 污泥总 DN A,均未 取得满 意 的提取  结 果 。因此 ,针 对工 业化 废 水处 理 反应 器污 泥样 品 

20p ( 0  L 终浓 度为 1 ,轻 轻颠倒 混 匀,6 。 %) 5C,温育  3 , 2  n上下轻 轻颠倒 几次 ;  后将 样 品取 出,   每 0mi h 3h   冷却至 室温 ,每管样 品重新 分装 于 2个 1   . mL离心  5
管 中,加 入 1  / 0 mgmL的蛋 白酶 K 6 p , 5C温育     L 5 。 1 ;每个 离心管 中加人 1 0g    l   C , 0p     h 0  L 5mo/ Na 18  L L
C TAB Na 1 (0 mo/  C / C 1  l L TAB, 07 .  mo/   C1, l Na ) L  

6 。 温 育 1  n  5C 0mi 。

()总 D 3 NA 的 纯 化 

加 入 等 体 积 的 苯 酚 :氯 仿 :异 戊 醇 (52 :, 2: 1 4  
w ’, 2 0  mi 离 心 5mi,取上清 液加入等体积  , 10 0r n ) /   n 的氯仿 : 异戊醇(41 V , 2 : / 上下颠倒混匀, 20   m n , 10 0r i  / 离心 5m n   i,重复此 步,直 到界 面无蛋 白。   ()总 D 4 NA收集  加 入 等 体 积 的异 丙 醇 ,于 一 0c 沉 淀 过 夜 。 2。  

特性 , 研究 对常规 “ 菌酶 一D 一 氯仿 抽提 ”方  本 溶 S S 酚/
法进 行 改进 ,通 过加 强 污泥 分散 效 果 、强化 细胞 裂 

解 和高 效去 除蛋 白质及 多糖 等 成分 等 策略 ,实现 工 
业 化反 应器 污泥样 品总 DN 的有效 提取 。 A   分 散 预处 理 :强 化 污泥 样 品 的研 磨 效果 ,使 污  泥更 好地 分散 ,特 别是 针 对 颗粒 化程 度 高 的污泥 样 

10 0r i 2 0 / n离心 2  n m 0mi,弃去上 清液 , 加 入 8 % 再 0 
乙 醇 10 0  洗 涤 DN 10 0r n离 心 5ri,重  A, 2 0   mi /   n a

品,可 以适 当延 长 研磨 时 间;对 于 污泥 样 品 内含 有  的杂质 成分 ,采用 T E缓 冲溶 液重 复洗涤 ,消 除杂质 
干扰 ,减小 对后 续 步骤 的影 响 I 。强化 细胞 裂解 : 1 引  

复 2次 , 盖挥发 掉残 留 乙醇 ;加入 1 0 g 开 0  L无 菌水  溶 解 。加入 1g   N sA 溶液 , 7 C温育 3   n    L R ae 3。 0mi。 用 紫外分 光光度 计测量 核 酸浓度 和纯度 。  

与常规 溶菌酶 一DS酚/ S 一 氯仿 法 相 比, 长 S 延 DS作用  时 间,并 且每 2   i 0r n上下 混匀 1 , S S与细胞  a 次 使 D
更充 分 的接触 ,增强 S DS细胞裂 解 的作用效 果 。杂 

1 总 DN 样 品 的 P R 扩增  . 4 A C 以污泥样 品 总 D NA 为模 板,以细 菌和古 菌 的 
1 S r N 基 因 通 用 引 物 进 行 P R 扩 增 。 引 物 序 列  6 R A C 为 :B F 3 ( 一 T C AC G S 3 85 AC C T GG AGG AG AG 3     C C 一  )
和 BS 3 ( ATT R5 4 5一 ACCGCGGC TGCTGGC 3)   ,GC  

质 去除 : 加入蛋 白酶 K,去 除和总 DN A结合 的蛋 白:   本方 法 中增加 C AB Na 1 除提取 产 物 中的多糖, T / C ,去  
使所 提取 的总 D NA 利 于分离 ;用 苯酚,氯仿,异戊  醇 纯化 , 一 步消除 蛋 白的干 扰 。 进  

夹 序 列 为 :5一 C C C G C CG GC C T   CG C GC GC C C C C G  

22 污泥 总 DNA 样 品纯度 及 产 率  . 本 研究 中,所 有 污 泥样 品所 提取 的总 D NA 纯  度 和浓度 采用 紫外一 可见 分光 光度 计检 测,其 中纯度 

C C C G C C G C G 3 ¨。P R 反应 条件 : C G C C C C C C 一  】 C   9。 4C预变性 3mi; 4C变 性 1 n 6 。   n9。   , 5C退火 4 , mi 5S  

以 A 6 A 8 作 为指标 ,测得 总 DN 样 品浓度 后计  2 /2 o 0 A
算产 率 。各 污 泥样 品 总 DNA 样 品 A2 / 2 6A8 0 o比值  和产 率 ( g 湿重 污泥 中的总 DNA 提取 量) 表 2 1   如  
所示 。 可 以看 到 ,本研 究提 取 方法 所得 总 DN 的  A A 6A 8 2/ 2 0 o比值 均在 18左右 , 明总 D . 说 NA 样 品 中 

7。 2c延 伸 4 ,每个 循环退 火温 度降低 05C 5S .。 ,直 至 
5 。 , 0个 循 环 :然 后 9 。 5C 2 4 C变 性 1mi; 5C 退 火    n 5。

4   , 2 C 延 伸 4  ,1 5S 7 。 5 S 5个 循环 ;7 。 最终 延伸  2C 8 i。P R反 应产物 用 1   n C a r %琼脂 糖凝 胶 电泳 检测 。  

ht:jun l i a .nws tc   t /o ras m.cc / wxb n p/ .

16  62

微 生物 学 通报 

20 , o 3, o1  0 8V 1 5 N . . 0

产 率  I( ) d口    

00   ;643 .3 74  5 7  

0 3 1    ̄8

O55 io 8  

026 .6 8  

:85 00 1 

033  -4≥ 8

杂质 含量低 , NA 纯 度较高 。 同时,所有污 泥样 品  D
的总 D NA 产率 都在 07 mgg以上 ,最大产 率可达  .   /

泥总 DN A样 品,说 明本 方法 对污泥 样品具 有很好 的 
普适性 。  

08  /, 明该 方法对 污泥样 品总 D A 的提取  . mgg 说 5 N 效 率较高 。  
以上 污泥样 品提取 总 D A 的纯度和产 率结果  N 说 明,对本研 究 中所选 不 同性质 的 工业化 废水 处理  反应器 污 泥样 品,该 提取 方法均 可 以得 到较好 的污 

所提取 污泥 样品总 DN 采 用琼脂糖 凝胶 电泳  A

检测 ,部分样 品 电泳 图谱如 图 1 示 。 所 可以看 到,污 
泥样 品 的总 DN A大小 均在 2 b左右 , 明显脱 尾  3k 无 和 R A干 扰现象 。从 电泳 结果 同样可 以看 到,本方  N
法对 不 同污泥样 品总 D NA 具 有 较 好 的 提 取 效 果 。  

图 1 部 分污泥样 品总 D   NA 琼 脂 糖 电 泳 图 
Fi g.1 Aga os   l I c r pho e i  f t t     r e ge   e t O e r s s o  o alDNA    o e s udg   a pl s of s m   l esm e 

注 :样 品 No 1 No5见 表 1 .~ .  
No e Th   a t : e s mpl sNo. ~ e  1 No. i ti   b e 1 5 ls n Ta l   

23 污 泥样 品总 DN 的 P R 扩增  . A C
有研 究结 果表 明 , 总 D A 提 取方 法对 微生物  N

M 

多样性研 究 中 P R D GE分析结果 有重要 影响[1 C .G 1。 9  为 了考察 污泥 总 D NA 提取 样 品对 后续分 子生物 学  技 术应用 的影 响, 研究 以所有 污泥总 DN 本 A样 品为  模 板,进行 了 P R扩 增反 应。 分 P R产物琼脂 糖  C 部 C 电泳 图谱 如 图 2所示 。可 以看 到,所有 污泥总 D   NA 样 品的 P R产物 大小均 在 2 0b 左 右,没有非 特异  C 0  p

性 条带 。研究 表明 , A纯 度是影 响 P R成 功 的关  DN C
键 [,因此 ,图 2所示 的 P R 产物结果进一 步说 明,   C   本提取方法所得 到的总 D A纯度高,不含 P R反应  N C
图 2 部 分 总 DNA 样 品 P CR 产 物 琼 脂 糖 电 泳 图 
Fi 2 g.   Aga o e e ee t 0 r s  g l lc r phOr ss f PCR pr uc s f e i o   od t o  

抑制物,可满足后续 的分子生物学技 术应用的要求 。   为进一 步考察 本提 取方法 在工业 化 废水处 理反 

s m et a  o  ot lDN A am pl s s e 

注 :样 品 No 1 No5见 表 1 .- .  
No e The s mp e   .  ̄ t:   a l sNo 1 No. i ti  bl    5 ls n Ta e 1

应器 污泥微生 物群 落研究 中应用 的可靠性 ,本研 究 
ht:jun l. a . / s tc  t /o rasi cc w wxb n p/ m. n

张  苏等 : 业化废 水处 理反 应器 污泥总 DN T A提 取方 法 

1 6  63
物 的 多 样性 .重庆 大学 学 报 , 0 5 2 ( ) 1 9 1 3 2 0 , 8 1:   — 2 . 1  
z n  ka t  K, r s heM e  1 Ev l a i   [1 Buz i iAP,Sa m o oI V a e c   B, ta . a u ton 5 
o   h  m ir bi l v r iy n n fte c o a di e st i  a  U ASB r c o  te tng ea t r r a i  
wa t wa e   r s e t r f om  n un l a h d pu p pl nt a   b e c e   l   a .Pr e s Bi — oc s   o  

对所 有污 泥总 DN A样 品的 P R产 物进行 DG E电  C G

泳分 析 , 分样 品( .、N . P R 产物 的 DG E 部 No2 o3 C ) G  图谱 如图 3所示 。 以看 到 , C 可 P R扩增 产物 中不 同的 
1S r A 片段在 DG 6  DN GE胶 中可 以较好 地分 离,得 

ch mity, 06 1:1 —1 . e sr 20 ,4 68 76 

到 的 D E图谱 可 以满足微生 物群 落分 析 的要 求 。 GG  
因此 , 以上 P R D E 实 验 结 果 可 以 看 出 ,本 研  从 C — GG 究 中 污 泥 总 D A 提 取 方 法 可 以应 用 于 污 泥 微 生 物  N

s nn t ge E,et 1 De e to  a    a . t ci n nd [】 Pia d 6  c r  C, Pon o e C,Pa t
e ume a i     c e i   n s i    r c   n r ton of ba t r a i   o l by die t DN A  xta ton e rci  

an  p ym eas  c i r aci n. Ap id a d En ion  d ol r e ha n e to ple n vr -

me t l ir b o o y   9 , 8 9 : 71 - 7 2 n a  c o i lg ,1 2 5 ( ) 2   2 2 . M 9   7  
t   apJ ta1 SSCP c m p rs n  o a io   【】 S a h J 7  t c   ,Bahe S,Cl p   P,e  .PCR—
of   S DN A s q en e  1  r 6 e u c  di r iy n oi ve s t  i  s l  DN A ob a ne   ti d

群落 分析 和研 究 中,不会 对后续 分 子生 物学 技 术手 
段 的应 用造 成影响 。  

usng dif r ntiolton a d p ii ai n m eho .FEM S  i   fe e  s a i   n   urfc to   t ds

M irboo yEc lg , 0 , 6 2 ) 3 —1 1 co ilg  oo y 2 01 3 ( 3:1 9 5 .  
2   3  

[] 郑 雪松 , 道 棠 ,杨  虹 .不 同破 壁 方 法 对 活性 污 泥 总  8  李

D A 提 取 效 果 的 影 响 .上 海 交 通 大 学 学 报 ,2 0 ,5 N 04 :  
81 5-81 . 8 

图 3 污 泥样品 2 、3 的 DGGE 图 谱 
Fi   D GG E  o ie  fs u g.3 pr fl so  l dges m pl    d 3  a e2 an    

【】 苏 俊 峰 ,马  放 ,侯 9 

宁 , .活 性 污 泥 总 D 等 NA不 同提 

注 :样 品 N . o 2和 No3见 表 l .  
Noe Thesm pe   . 和 No 3i  be l t:  a lsNo2 . nTa l  

取 方 法 的 比较 .生 态 环 境 , 07 1 ()4 — 9 2 0 , 6 1: 7 4 .   N [0 魏 志琴 ,曾 秀敏 ,宋 培 勇 .土壤 微 生 物 D A 提 取 方 法  1】 研 究 进 展 .遵 义 师 范 学 院 学 报 , 06 84: 3 5 . 2 0 , ()5— 7  

3 结论   
()通 过加 强 污泥 分 散效 果 、强 化细 胞 裂解 和  1 高效去 除杂质等 策略 ,获得改 进 的污泥 总 D NA提取  方法 ,该方 法对 本研 究所 选取 的工业 化废 水 处理 反  应器污泥 样 品均 有效 ,具有较 好 的普适性 。   ()该方 法所提 取 的所 有污 泥样 品总 DN 2 A纯度  高,含杂 质量少 , 2 / 2 比值 均在 1 A6 A8 0 0 . 8左右 ;同时 ,  

姜 淑 梅 ,张  龙 ,戴 世 鲲 ,等 . 种 简 单 有 效 的 使 用 于  一 P R 操作 的 放 线 菌 DN 提 取 方 法 .生 物 技 术 ,20 , C A 07  
1 ( )4 - 3 8 1: 0 4 .  

[2 陈  岭 ,明镇 寰 .消 化 池 中 氨 氧化 细 菌 a o 基 因的 检  1] mA

测 及 其 多 样 性 研 究 .浙 江 大 学 学 报 ,20 ,3 () 0 4 15:  
55 -56   5 0.

[3  向 少 能 ,陈  琳 ,何 晓 丽 ,等 .水 体 微 生 物 多 样 性  1]

P R D GE 分 析 方 法 的 比较 .重 庆 T 学 院 学报 ,2 0 , C .G 07  
21 7 : —7   f   74 7.

提取效 率较 高,所有污 泥 样品 的总 DN 产 率都 在  A
07mgg以上 ,最 大 产 率 可 达 08  /。 .   / .5 mgg 

宫 P R DG E 【4 邢 德 峰 ,任南 琪 , 曼 丽 . C — G 技术 解 析 生 物 制  1]
氢 反 应 器 微 生 物 多 样 性 . 环 境 科 学 ,2 0 ,2 () 0 5 62:  
1 -1 7. 72 7  

()该 方法所 提取 的所 有污泥样 品 总 DN 3 A可 以  直接进行 P R扩增 反应 以及 D E分析 ,可以满 足  C GG 后 续分子 生物 学技 术 的应 用 和污泥 微生 物群 落研究 
的 要 求 

[5 饶 志 明,赵 有 玺 ,李  辉 ,等 .太 湖 流 域 上 壤 微 生物 基  1]

因组 D NA 分 离纯 化 及 其 质 粒 文 库 的初 步 构 建 .应 用 与  环 境 生物 学 报 ,0 4 1 ()7 4 7 7 2 0 , 06: 7 — 7 .  

参 考 文 献 
邢 薇 ,左剑 恶 ,孙 寓 姣 .利 用 F S 和 D E 对  甲 IH GG  

[ 6  王  峰 ,傅 以 钢,夏 四清 . C — GG 技 术 在 城 市 污水  1] P RD E

化 学 生 物 絮 凝 处 理 中 的 特 点 .环 境 科 学 ,2 0 ,2 () 04 56:  
7 -79. 4  

烷 颗 粒 污 泥 中 微 生 物 种 群 的 研 究 .环 境 科 学 ,20 , 06  
27r 1 22 —2 72. 11 : 68 2  

【7 熊 开 容 ,张智 明,张 l】

敏 .活 性 污 泥 总 D NA 提 取 方 法 

刘 新 春 ,吴 成 强 ,张  昱 ,等 . C — G 法 用 于 活 性  P R DG E 污 泥 系 统 中 微 生 物 群 落 结 构 变 化 的 解 析 .生 态 学 报 ,  
2 0 , 54 : 4 - 4 . 05 2 ()2 2 2 8  
Co lns li  G.M ir il o muniy tu t r   n  me h no  c ob a c m t sr c u e a d ta —
ge c a t v t   u i   t r — p ps c o ii   na r i   i  ni   c i iy d r ng s a t u   y hr ph lc a e ob c d — g t r r a i g y he i  i d t i l wa t wa er . FEM S ese  te tn  s nt tc n us r a  se t s  

的研 究.生 物 技 术 , 0 5 1 ( )4 — 5 20 ,54: 3 4 .  
t i  N iry DJ a kalLL.DN A  x r ci n e ta to   [8 G uhreJ ,M ora t   W ,Bl c l  1] fom  o a e fs d m e tba t ra f rt   ol m e a ec i  r c r lr e  e i n  c e i o  hep y r s  han

ra t n J u n lo  co ilgc lMeh d , 0 0 4 : e ci . o r a f Mir boo ia  to s 2 0 , 3  o
1   —7.

rslne E,Ka a J ta1 m p c  fDN A  x— r  ,e   I a to   e   [9 J la RL,Ch tta   1 】 u l  ta to   me h   o   ba tra  c rcin t od n ce i l om m u t  c niy omposton ii   m e s r d by d naurn   a i n  e  lc r ph e i .S i  a u e     e t i g gr d e tg lee tO Or ss o l

Mi r b o o y E o o y 2 0 , ( ) 1 9 7 . c o i l g   c lg 。 0 3 4 6 : 5 -1 0 

叶 姜 瑜 ,罗 ㈣ 源 ,吉 芳 英 ,等 .污水 生 物 处 理 功 能 微 牛 

Bilg   n   ic e sr, 0 4 3 ( 0 : 6 7 61 . oo ya dB o h mity 2 0 , 6 1 ) 1 0 一l 4 

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