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【精选】人教版高中生物选修1专题5 课题3《血红蛋白的提取和分离》word导学案-生物知识点总结


专题 5 课题 3 血红蛋白的提取和分离 一、基础知识 (一)凝胶色谱法 1、凝胶色谱法也称做 ,是根据 分离蛋白质的有效方法。 2、凝胶实际上是一些微小的 球体,这些小球体大多数是由 构成的,如葡聚糖或 琼脂糖。 3、在小球体内部有许多贯穿的通道,相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同,相对 分子质量 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程 ,移动速度 ;而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在 移动,路程 ,移动速度 。相对分子质 量不同的蛋白质分子因此得以分离。 (二)缓冲溶液 1、缓冲溶液的作用是 2、缓冲溶液通常由 溶解于水中配制而成的。 3、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的 pH 下进行的,为了 ,必须保持体外 的 pH 与体内的 。 。 (三)电泳 1、电泳是指 。 2、许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有可解离的基团,在一定的 pH 下,这些基团会带 上 。在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。电泳利用了待分离样 品中各分子 的差异以及分子本身的 、 的不同,使带电分子产生不同的 ,从 而实现样品中各种分子的分离。 3、两种常用的电泳方法是 和 ,在凝胶中加入 SDS,电泳速率完全取决 于 ,因此,在测定蛋白质分子量时通常使用 。 二、实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步: 、 、 和 。 (一)样品处理 1、红细胞的洗涤:洗涤红细胞的目的是 ,采集的血样要及时 分 离红细胞,分离时采用 离心(500r/min),然后用胶头吸管吸出上层透明的 , 将下层暗红色的 倒入烧杯,再加入 (质量分数为 ),缓慢搅拌 min, 离 心,如此重复洗涤三次,直至 ,表明红细胞已洗涤干净。 2、血红蛋白的释放:在 和 作用下,红细胞破裂释放出血红蛋白。 3、分离血红蛋白溶液:将搅拌好的混合溶液离心(2000r/min) 后,试管中的溶液分为 4 层。第 一层为无色透明的 ,第 2 层为白色薄层固体,是 ,第 3 层是红色透明液体, 这是 ,第 4 层是 的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤,除去脂溶性沉淀层, 于分液漏斗中静置片刻后,分出下层的 。 (二)粗分离:透析 取 1mL 的血红蛋白溶液装入 中,将透析袋放入盛有 300mL 的物质的量的浓度为 20mmol/L 的 (PH7.0)中,透析 12h。透析可以去除样品中 的杂质,或用于更换样品的 缓冲液。 (三)纯化:凝胶色谱操作 1 、制作凝胶色谱柱 2、装填凝胶色谱柱 高中数学、数学课件、数学教案、数学试卷、高中数学试题。 ①装填前将色谱柱 固定在支架上。因为干的凝胶和用缓冲液平衡好的凝胶的体 ,所以装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需要的凝胶量。 ②装填时凝胶要 缓慢倒入色谱柱内,装填时要轻轻敲动色谱柱,使凝胶装填 ,色 谱柱内不得有 存在,一旦发现,必须重装。 ③装填完后, 连接缓冲液洗脱瓶,在约 50cm 高的操作压下,用 300mL 物质的量浓度为 20mmol/L 的 (PH7.0)充分洗涤平衡凝胶 12h,使凝胶 。 3、样品的加入和洗脱 ①准备:打开色谱柱下端的流出口,使柱内凝胶面上的的缓冲液与凝胶面 ,关闭出口。 ②加样:用吸管小心地将 1mL 透析后的样品加到色谱柱的顶端,注意 。加样后打开 下端出口,直到样品 后,关闭下端出口。 ③洗脱:小心加入物质的量的浓度为 20mmol/L 的 (PH7.0)到适当高度,连接缓冲 液洗脱瓶,打开下端出口进行洗脱。待 接近色谱柱 时,用试管收集。 (四)纯


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