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MS培养基的配制


MS 培养基的配制
1、配制几种母液
(1)配制 MS 大量元素母液
一般将大量元素分别配制成 100 倍的母液,使用时再分别稀释 100 倍。 分别称取 名称 NH4NO3 KNO3 MgSO4·7H2O 重量 165g 190g 37g 名称 KH2PO4 CaCl2·2H2O 重量 17g 44g

各自配成 1L 的母液。

各自倒入 1L 试剂瓶中,存放于冰箱中。

(2)配制 MS 微量元素母液
一般将微量元素配制成 100 倍母液。 依次称取(注:溶好一个后,再加下一个) 名称 KI H3BO3 MnSO4·H2O ZnSO4·7H2O 重量 0.083g 0.62g 1.69g 0.86g 名称 Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 重量 0.025g 0.0025g 0.0025g

配成 1L 母液,倒入 1L 试剂瓶中,存放于冰箱中。 注:CuSO4·5H2O 和 CoCl2·6H2O 由于称取量很小,如果天平精确度没有达到万分之一, 可先配成调整液。 分别称取 CuSO4·5H2O 0.05g,CoCl2·6H2O 0.05g 各自配成 100ml 的调整液,然后取 5ml 就还有 0.0025g 的量。

(3)配制 MS 有机母液
一般配制成 100 倍 MS 有机母液。 依次称取(注:溶好一个后,再加下一个) 名称 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇(VB6) 重量 10g 0.05g 0.05g 名称 甘氨酸 重量 0.2g

盐酸硫胺素(VB1) 0.01g

配成 1L 母液,倒入 1L 试剂瓶中,存放于冰箱中。

(4)配制 MS 铁盐母液
一般配制成 100 倍 MS 铁盐母液。 依次称取 EDTA 二钠 3.73g,FeSO4·7H2O 2.78g(注:溶好一个后,再加下一个) 配成 1L 母液,倒入 1L 试剂瓶中,存放于冰箱中。 所以 MS 母液有 5 种大量元素母液, 加上 MS 微量元素母液、 有机母液和 MS 铁盐母液, MS 共 8 种母液。

(5)激素母液的配制
各种生长素和细胞分裂素要单独配制,不能混合在一起,生长素类一般要先用少量 95% 的酒精或 1 当量的 NaOH 溶解,细胞分裂素一般要先用 1 当量的盐酸溶解,然后再加蒸馏水 定容。一般取 100mg 配成 100ml 母液。

2、配制培养基
以配置 1L MS 培养基为例,按顺序进行如下操作: (1) 先在烧杯中放入一些蒸馏水。 (2) 分别取上面八种母液 10ml 倒入。 (3) 一般称取 30g 蔗糖倒入,搅拌溶解。 (4) 加蒸馏水用量筒定溶至 1L。 (5) 按设计好的方案添加各种激素,由于激素的用量很小,而且激素对组培植物的生长 至关重要。所以有条件的话最好用微量可调移液器吸取,减少误差。 (6) 用精密试纸或酸度计调整 PH 至 5.7-5.8。 (有条件的话使用酸度计, 比较精确) 可 配 1 当量的 HCL 和 1 当量的 NaOH 用来调溶液 PH 值。 1 当量 HCL 配制:用量筒量取 8.3ml 配成 100ml 溶液。 1 当量 NaOH 配制:称取 NaOH 4g 配成 100ml 溶液。 (7) 称取 5g 左右琼脂粉(质量好的琼脂粉),倒入上面配好的溶液中,放在电炉上加热至 沸腾,直到琼脂粉熔化。 (8) 稍微冷却后,分装入培养容器中。无盖的培养容器要用封口膜或牛皮纸封口,用橡 皮筋或绳子扎紧。 (9) 放入消毒灭菌锅灭菌,灭菌 20 分钟左右。 (10) 灭菌后从灭菌锅中取出培养基,平放在实验台上令其冷却凝固。


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