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Agilent 6100系列四极杆LCMS系统 概念指南


Agilent 6100 系列 四极杆 LC/MS 系统

概念指南

Agilent Technologies

注意
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本书内容如有改变,恕不另行通 知。安捷伦科技公司对本材料,及 由此引出的任何商务和特种用途不 承担责任。安捷伦科技公司对本手 册中可能有的错误或与装置、性能 及材料使用有关内容而带来的意外 伤害和问题不负任何责任。如果安 捷伦与用户对本书中的警告术语有 不同的书面协议,这些术语与本书 中的警告术语冲突,则以协议中的 警告术语为准。

安全注意事项

小心
小心提示表示危险提醒您在操 作过程中注意,如果执行不当, 将影响产品或丢失重要数据。 不要忽视小心提示。

手册部件号
G1960-97072

版本
第 3 版, 2010 年 4 月 中国印刷
Agilent Technologies, Inc. 5301 Stevens Creek Blvd. Santa Clara, CA 95051

技术许可
本书对硬件和 / 或软件的介绍已获得特 许,未经许可,不得使用或复制。

警告
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软件版本
在有新文件替换之前,本指南适用于 B.04.02 SP1 版或更高版本的 Agilent 6100 系列 四极杆 LC/MS 系统安捷伦化学工 作站软件。 如果您对本指南有任何建议,请发送电 子邮件至 feedback_lcms@agilent.com。

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

内容提要...
《概念指南》简要介绍了 Agilent 6100 系列 四极杆 LC/MS 系统的 信息,以帮助您了解硬件和软件的工作原理。 如果您对本指南有任何建议,请发送电子邮件至 feedback_lcms@agilent.com。

1

概述
了解硬件在 Agilent 6100 系列 四极杆 LC/MS 系统中的工作原理, 并获取化学工作站软件的简要介绍。

2

仪器准备
了解准备 LC 和色谱柱用于分析以及准备调谐 MS 需要的概念。

3

数据采集
学习建立方法和运行样本。

4

数据分析
了解用于化学工作站软件定性和定量数据分析所需的概念。

5

报告
学习预定义的结果报告和建立自定义报告。

6

性能认证
了解化学工作站软件操作验证/性能认证 (OQ/PV) 以及系统认证的 概念。

7

维护和故障排除
了解化学工作站软件中有助于您维护系统和诊断并解决问题的 工具。

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

3

4

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

目录
1 硬件和软件概述 9 安捷伦四极杆 LC/MS 系统的工作原理 10 概述 10 详细信息 11 可以采集的数据类型 15 全扫描与选择离子监测 (SIM) 15 碎片离子的生成:低碰撞诱导解离和高碰撞诱导解离 16 正离子和负离子 18 多信号采集 19 离子源 21 电喷雾电离 (ESI) 21 大气压化学电离 (APCI) 26 大气压光电离 (APPI) 27 多模式电离 (MMI) 28 化学工作站软件简介 29 概述 29 远程查看数据 31 2 仪器准备 33 LC 系统的准备 34 用途 34 操作步骤总结 34 设置 LC 模块的参数 36 色谱柱老化与平衡 37 监测流量和压力的稳定性 38

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5

目录

MS 的准备 – 调谐 39 概述 39 调谐方法 40 调谐时间 – 检查调谐 40 自动调谐 42 手动调谐 43 调谐报告 45 增益校正 46 3 数据采集 49 使用方法 50 “方法和运行控制”视图 50 调用、编辑、保存和打印方法 52 编辑方法的更多信息 53 运行样品 56 运行单个样品 57 运行序列 58 流动注射分析 61 监测分析 64 在线信号图 64 快速方法概览 65 工作日志 65 仪器关闭 67 4 数据分析 69 “数据分析”视图 70 调用和处理色谱图 72 调用信号 73 从色谱图显示中删除信号 77 更改色谱图的显示方式 77

6

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目录

使用光谱 79 显示光谱 80 峰纯度 81 执行定量分析 82 积分峰 82 校正 84 数据浏览和序列数据再处理 86 导航表 86 批处理浏览 86 5 报告 89 使用预定义报告 90 生成报告 90 报告类型 91 定义自定义报告 92 过程总结 92 报告模板示例 92 “报告版面设计”视图 93 6 性能认证 95 认证 (OQ/PV) 视图 96 仪器验证 97 设置和运行仪器验证 98 可用的 OQ/PV 测试 100 验证日志 101 系统验证 102 概述 102 设置和运行系统验证 103

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7

目录

7

维护和故障排除 105 “诊断”视图 106 概述 106 仪器面板 107 工作日志 109 维护 110 早期维护预警 110 维护日志 111 维护过程 111 放空和抽真空 MS 112 诊断和解决问题 113 症状和原因 113 MS 诊断测试 114 解决问题 114

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Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统 概念指南

1 硬件和软件概述
安捷伦四极杆 LC/MS 系统的工作原理 10 概述 10 详细信息 11 可以采集的数据类型 15 全扫描与选择离子监测 (SIM) 15 碎片离子的生成:低碰撞诱导解离和高碰撞诱导解离 16 正离子和负离子 18 多信号采集 19 离子源 21 电喷雾电离 (ESI) 21 大气压化学电离 (APCI) 26 大气压光电离 (APPI) 27 多模式电离 (MMI) 28 化学工作站软件简介 29 概述 29 远程查看数据 31

本章概述了构成 Agilent 6100 系列 四极杆 LC/MS 系统的硬件和 软件。该系列包含三种模型 – 6120B、 6130B 和 6150B。

Agilent Technologies

9

1

硬件和软件概述 安捷伦四极杆 LC/MS 系统的工作原理

安捷伦四极杆 LC/MS 系统的工作原理
概述
质谱 (MS) 是基于对真空中离子移动的分析,产生的质谱图提供有 关分子量、结构、定性、定量和样品纯度等有价值的信息。 MS 对 定性和定量分析添加了特性。 四极杆质量分析器有时被称为 四极杆质量过滤器或四极杆。 图 1 显示了Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统的图解。大气压 力下样品的电离发生在左侧显示的离子源中。 Agilent 6100 系列 四极杆 LC/MS 系统与很多安捷伦大气压电离 (API) 源兼容。
HPLC 进样口 四极杆质量 分析器 离子光学元件 检测器

雾化器

毛细管

离子源

粗真空

分流 涡轮泵

图1 API – 大气压电离

安捷伦四极杆 LC/MS 系统结构图

常用的大气压进样接口将离子从离子源引入质谱仪的真空系统, 各种离子光学元件将离子聚焦并引导通过一系列真空级,直到离 子到达四极杆质量分析器并将他们分离,最后到达检测器,作为 信号记录下来。

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硬件和软件概述 详细信息

1

详细信息
图 2 和图 3 显示了Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统中离子路 径的更详细图解。 API 源生成离子后,系统离子传输和聚焦区域 中的离子光学元件将引导离子向四极杆和检测器移动。在传输过 程中,离子将从压力为大气压 (760 toor) 的离子源位置移动到真 空状态下 (10-6 toor) 的四极杆和检测器位置。

真空级: HPLC 进样口 雾化器 毛细管

1

2

3

4

锥孔体 八极杆 5X10-6 torr 检测器 3 torr

解离区 (CID) 透镜 离子源 四极杆 离子传输和聚焦区域

图2

Agilent 6130 和 6150 四极杆 LC/MS 系统的离子路径

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1

硬件和软件概述 详细信息

真空级: HPLC 进 样口 雾化器 毛细管

1

2

3

4

锥孔体 八极杆 6X10-6 torr 检测器 2 torr

解离区 (CID) 透镜 离子源 四极杆 离子传输和聚焦区域

图3

Agilent 6120 四极杆 LC/MS 系统的离子路径

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统中的离子传输和离子聚焦区 域密封在真空中,真空系统的功能是抽空离子聚焦和离子传输区 域,并保持四极杆质量分析器处于低压状态。 因为雾化器与进样口毛细管成一合适的角度,所以大部分溶剂都 从雾化室放空了,根本不会到达毛细管。只有离子、干燥气体和 少量溶剂能通过毛细管传输。

通过自动调谐仪器,可以自动 设置离子路径中大部分元件的 电压。请参见第 39 页的“MS 的准备 – 调谐”。

以下对离子光学元件的讨论是根据质谱仪离子路径和真空状态进 行组织的。

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硬件和软件概述 详细信息

离子传输和解离 (第一真空级)
API 源中产生的离子被静电吸引通过干燥气体,然后通过加热进 样毛细管,进入第一级真空。靠近毛细管出口处是一个带小孔的 金属锥孔体。较重的离子动量也较大,会通过锥孔体的小孔。大 多数较轻的干燥气体 (氮气)分子被锥孔体转向,然后被粗泵抽 出。通过锥孔体的离子移动到真空系统的第二级。 大气压电离技术都是相对“软电离”技术。主要生成: ? 分子离子 M+ 或 M? 质子化的分子 [M + H]+ ? 简单加合物离子 [M + Na]+ ? 丢失简单分子的离子,比如 [M + H -H2O]+ 表示丢失水分子 CID – 碰撞诱导解离 这些类型的离子可提供分子量信息,但您通常需要补充性结构信 息。要取得结构信息,可以解离第一级中的分析物离子。要解离 分析物离子,需要为这些离子提供额外的能量,然后在碰撞诱导 解离 (CID) 的过程中让它们与中性分子碰撞。在大气进样毛细管 的末端施加电压,为碰撞增加能量并生成更多解离。有关详细信 息,请参见第 16 页的“碎片离子的生成:低碰撞诱导解离和高碰 撞诱导解离”。

离子传输 (第二和第三真空级)
八极杆离子向导是带公共开 放轴的一组平行小金属杆, 离子能通过此轴。

Agilent 6130 和 6150 四极杆 LC/MS 系统

在第二级真空中,离 子立即被八极杆离子向导聚焦通过两个真空级,离子能够通过离 子聚焦阶段是因为离子从大气压状态通过进样毛细管进入真空而 获得的动量。应用到八极杆的射频电压会将超过特定质量范围的 离子排斥到杆组的开放中心。离子离开此离子向导后,经过两个 聚焦透镜进入真空系统的第四级。

系列四极杆

系统概念指南

1

硬件和软件概述 详细信息

Agilent 6120 四极杆 LC/MS 系统 在第二真空级,离子在锥孔 体 1 和锥孔体 2 之间传输。然后,离子进入第三真空级,并在该 级通过八极杆离子向导。离子离开此离子向导后,经过两个聚焦 透镜进入真空系统的第四级。

离子分离和检测 (第四真空级)
在第四真空级中,四极杆质量分析器根据质荷比分离离子。然后, 电子倍增器检测这些离子。 m/z – 质荷比 四极杆质量分析器 (图 4)包含四个平行的杆,在这四个杆上施 加有特定直流 (DC) 和射频 (RF) 电压,分析物离子被导入四极杆 的中心。应用到杆上的电压生成电磁场。这些电磁场确定了哪些 质荷比的离子能在给定时间通过过滤器。通过的离子聚焦在检测 器上。

到检测器

从离 子源

图4

四极杆质量分析器

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硬件和软件概述 可以采集的数据类型

1

可以采集的数据类型
全扫描与选择离子监测 (SIM)
您可以在“方法和运行控制” 视图中建立全扫描或 SIM 分 析,如第 3 章所述。
如图 5 所示,四极杆质量分析器能在两种模式下进行操作。要最 有效地使用分析,挑选适当的模式非常重要。下面的讨论将帮助 您进行选择。

全扫描

1 次扫描

质量范围 丰度

m/z

时间 SIM 1 次扫描

m/z
不连续的质量

m/z

时间

丰度

m/z

图5

四极杆质量分析器能在全扫描与选择离子监测 (SIM) 模式 下进行操作。

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1

硬件和软件概述 碎片离子的生成:低碰撞诱导解离和高碰撞诱导解离

全扫描模式
在全扫描模式中,将分析一定范围的 m/z 值,例如, m/z 200 到 1000。四极杆按顺序逐个过滤质量,整个扫描通常大约需要 1 秒 钟。 (准确时间取决于质量范围和扫描速度。 MS 固件通过增加 ) DC 和 RF 电压逐步调整四极杆,这样可按顺序过滤整个质谱内相 应的 m/z 值。 全扫描分析很有用,因为该分析显示了离子源中存在的、给定质 量范围内的所有离子。因为全扫描分析提供了在选定质量范围的 检测限之上出现的所有电离化合物的全貌,所以该分析经常用于 样品特性、结构解析和杂质分析。它还是开发 SIM 数据采集方法 的起点 (接下来讨论) 。

选择离子监测 (SIM) 模式
为获得最佳的灵敏度,四极杆将在 SIM 模式下进行操作。在 SIM 模式中,四极杆只分析具有几个指定 m/z 值的信号。所需的 RF/DC 电压设置为一次只过滤一个质量。四极杆只逐步处理分析 员选择的值,而不是逐步处理给定质量范围内的所有 m/z 值。因 为四极杆有更多的时间采集选定的m/z 值,所以系统能检测较低 级别的样本。 SIM 模式明显比全扫描模式更灵敏,但只提供较少离子的信息。 全扫描模式通常用于定性分析或预先不知道分析物质量时的定量 分析。 SIM 模式用于对目标化合物进行定量分析和监测。

碎片离子的生成:低碰撞诱导解离和高碰撞诱导解离
建立数据采集方法时,您可使 用碰撞诱导解离设置来控制解 离量。您可以在“方法和运行 控制”视图中建立方法,如 第 3 章所述。
碎片离子 (也称为产物离子)通过分解前级离子而形成。在 Agilent 6100 系列 四极杆 LC/MS 系统 上,解离区域位于毛细管 出口和锥孔体之间,那里的气压大约为 2 到 3 torr。根据该区域 的解离电压决定通过的前级离子未解离或解离。 当向该区域施加较低电压时,离子保持不变地通过。即使这些离 子与该区域的气体分子发生碰撞,通常也没有足够能量进行解离。 (请参见图 6。 )

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硬件和软件概述 碎片离子的生成:低碰撞诱导解离和高碰撞诱导解离

1

CH3 350000 300000 250000 200000 150000 100000 50000 0 100 200 300 H2N O O S NH N N CH3

279.1

[M + H]

+

281.0 280.0

301.0

[M + Na]

+

m/z

图6

磺胺甲嘧啶的质谱 – 低碰撞诱导解离
m/z156 m/z186
O
186.0

124.1

CH3 N NH N CH3

80000

O S
279.1

m/z108
H2N

60000

156.1

[M + H]

+

m/z213 m/z124

40000

108.2

301.0

[M + Na]
323.0

+

107.1

125.1

0 100 200 300

157.1

187.0

280.1

20000

213.2

m/z

图7

磺胺甲嘧啶的质谱 – 高碰撞诱导解离

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1

硬件和软件概述 正离子和负离子 如果增加电压,离子拥有更多的平动能。然后,如果离子与气体 分子发生碰撞,碰撞将平动能转化为分子振动,分子振动可导致 离子解离。这称为碰撞诱导解离 (CID)。图 7 显示了一个示例。 即使在大气压下生成离子的位置没有发生碰撞诱导解离,按惯例 还是称这种解离为“源内 CID”。通过分子解离得的离子用于结构测 定或确认是否存在特殊化学离子种类。 通过使用中间解离电压,可以在同一个质谱图里同时生成分子离 子和碎片离子。 FIA – 流动注射分析 理想的解离电压取决于化合物的结构和分析的需求。对于目标化 合物分析,较好的方法是预先确定化合物对碰撞诱导解离设置的 响应。达到这个目的最快方法是使用流动注射分析 (FIA) 系列。 使用 FIA 系列,您可以在同一次分析中多次注入化合物,并在不 同的时间窗口里改变碰撞诱导解离设置。您可以从结果数据评判 最佳碰撞诱导解离设置。有关 FIA 的详细信息,请参见第 61 页的 “流动注射分析”。

正离子和负离子
您在“方法和运行控制”视图 中设置方法时也设置了离子极 性,如第 3 章所述。
大气压电离技术能生成正离子和负离子。对于任何指定的分析, 主要的离子类型取决于分析物的化学结构和 (尤其对于电喷雾电 离)溶液的 pH 值。虽然离子源中可能存在一种或两种离子类型, 离子传输和聚焦区域中离子光学元件的极性决定了检测到的离子 类型。 正离子和负离子分析要求不同的离子光学元件设置。软件控制的 自动调谐过程会对正离子和负离子的设置进行优化,并将这些设 置保存在一个调谐文件中。数据采集过程中,软件会访问这个调 谐文件取得适当的设置。

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硬件和软件概述 多信号采集

1

多信号采集
您可以在“方法和运行控制” 视图中为多信号采集建立条 件,如第 3 章所述。
使用 Agilent 6120、 6130 和 6150 LC/MS 模型,您可以在单个分 析中采集多种类型的数据。在单个分析运行中,您可以选择交互 切换正负电离,交互切换高碰撞诱导解离和低碰撞诱导解离设置, 以及交互切换全扫描和 SIM 模式。因为最佳 MS 条件随化合物的 不同而不同,所以多信号功能使您可以在单次运行中以更高的灵 敏度分析更多的化合物。

极性切换
使用 Agilent 6120、 6130 和 6150 LC/MS 模型,您可以交替切 换扫描对正离子的分析和对负离子的分析。为快速切换极性,这 些模型合并了用于 API 源的快速切换电源、透镜系统、四极杆和 检测器。在色谱时间标度上切换极性的功能在分析完全未知样品 时非常有用,因为它能避免为了检测两种离子而两次分析样本的 需求。

交互切换高/低碰撞诱导解离
使用 Agilent 6120、 6130 和 6150 LC/MS 模型,您还可以在高解 离电压和低解离电压之间交替切换扫描。使用此功能,您可以以 低碰撞诱导解离设置采集扫描取得分子量信息,而以高碰撞诱导 解离设置取得结构化信息。

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1

硬件和软件概述 多信号采集

交互切换 SIM/全扫描
许多分析需要使用 SIM 模式来监测和/或定量低浓度目标化合物。 有时还需要使用扫描分析来识别其他样品组分。使用 Agilent 6120、 6130 和 6150 LC/MS 模型,您可以在 SIM 和全扫描模式之间交互 切换,这样就可以在单个分析中达到这两个目标。

总而言之
6120、 6130 和 6150 LC/MS 模型可在单次分析中,在逐个扫描的 基础上完成经过四种不同用户选择采集模式的循环。例如,您可 以设置单次运行执行以下操作: ? 以低碰撞诱导解离电压进行正离子扫描 ? 以高碰撞诱导解离电压进行正离子扫描 ? 以低碰撞诱导解离电压进行负离子扫描 ? 以高碰撞诱导解离电压进行负离子扫描 如果混合化合物中的有些化合物在正离子模式下响应较好而有些 在负离子模式下响应较好,或者如果既需要分子离子又需要碎片 离子,那么这样的分析是很理想的。 一个周期所需的时间根据选择的模式个数、扫描范围和切换所需 的内扫描延迟的不同而有所不同。为与窄色谱峰相分离,确保总 周期时间短到仪器足以在峰中进行充足的检测非常重要。

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硬件和软件概述 离子源

1

离子源
Agilent 6100 系列 四极杆 LC/MS 系统使用以下可互换的大气压电 离 (API) 源进行操作: ? ESI (电喷雾电离) ? 使用安捷伦射流技术的 ESI (仅限 6150) ? APCI (大气压化学电离) ? APPI (大气压光电离) ? MMI (多模式电离)

注意

6100 系列 LC/MS 系统上使用的源是 B 类源。6100 系列 LC/MS 系统 与先前安捷伦 LC/MS 模型上使用的 A 类源不兼容。

电喷雾电离 (ESI)
您在“方法和运行控制”视图 中设置方法时也可控制雾化室 参数 (雾化器压力、干燥气体 流速和温度以及毛细管电压) , 如第 3 章所述。
在分析物到达质谱仪之前,电喷雾电离部分依靠化学成分在溶液 中生成分析物离子。如图 8 所示,在大气压力下,存在强静电场 和加热的干燥气体时,将 LC 洗脱液喷雾 (雾化)进雾化室。静 电场出现在雾化器和毛细管之间,雾化器在安捷伦设计中是接地, 而毛细管是高电压。 喷雾与毛细管成一合适的角度。这个安捷伦专利设计可以减少液 滴的背景噪声,提高灵敏度并较长时间保持毛细管清洁。

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1

硬件和软件概述 电喷雾电离 (ESI)
HPLC 进样口

雾化器

毛细管

溶剂 喷雾

加热的干燥气体

图8

电喷雾离子源

电喷雾电离 (ESI) 包括四个步骤: 1 离子的形成 2 雾化 3 去溶剂化 4 离子蒸发

离子的形成
大气压电离 – 电喷雾中的离子形成不止一个机理。如果分析物、 溶剂和缓冲液的化学成分正确,则离子可以在雾化之前在溶液中 生成。这将带来高分析物离子浓度和良好的大气压电离 – 电喷雾 灵敏度。

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硬件和软件概述 电喷雾电离 (ESI) ESI 不是总需要预制的离子。未在溶液中电离的一些化合物仍可 以分析。雾化、去溶剂化和离子蒸发的过程,可以在喷雾液滴的 表面产生强电荷。这会引起液滴表面处分析物分子的电离。

1

雾化
雾化 (气雾剂生成)在以下步骤中使用样品溶液: a 样品溶液通过称为雾化器的接地针进入雾化室。 b 对于高流速电喷雾,雾化气体通过罩在针外面的一根管子集 中进入雾化室中。 c 雾化气体生成的强剪切力和雾化室中强电压 (2-6 kV) 的共同 作用,可以将样品溶液抽出并分成液滴。 d 随着液滴的分散,静电场会将一种极性的离子优先迁移到液 滴表面。 e 结果,样品被充电并同时分散成带电液滴的精细喷雾,因此 得名电喷雾。 因为产生喷雾时并未加热样品溶液,所以 ESI 不对大部分分析物 进行热分解。

去溶剂化和离子蒸发
在对离子进行质量分析之前,必须除去溶剂以生成裸离子。 中性分子和加热的干燥气 (通常为氮气)的对流会蒸发溶剂,减 小液滴直径,并促使主要的表面电荷更加集中。 (请参见图 9) 。
蒸发 排出的分析物离子
+

+-+ + +- - + +- -+ + - + ++
图9

++ + +-- -+ + - -- + + ++ +

+ ++- + + + -- --- + +++ + + +--+ +-- + +

离子从溶液的脱附

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1

硬件和软件概述 电喷雾电离 (ESI) 库伦排斥力 – 同种电荷带电离 子种类间的排斥力。 当库伦排斥力等于液滴的表面张力时,液滴将爆炸并产生更小的 带电液滴,可进一步蒸发。这个过程在液滴上反复发生,以至形 成带有高表面电荷密度的液滴。当电荷密度达到约 108 V/cm3 时, 将发生离子蒸发 (裸离子直接从液滴表面脱离) 。这些离子被吸 引并通过毛细管进样口进入离子光学元件和质量分析器。

溶液化学成分的重要性
对溶剂和缓冲液的选择是使用电喷雾进行成功的电离的关键。如 甲醇等溶剂有较低的热容量、表面张力和电容率,可促进雾化和 去溶剂化。要获得电喷雾模式的最佳结果: ? 根据所需的离子极性和样本的 pH 值调整溶剂的 pH 值。 ? 要加强离子脱附,可使用汽化温度低且表面张力低的溶剂。 ? 选择在气相反应 (例如,质子传递或离子对反应)中不 会中和 离子的溶剂。 ? 要降低离子源中盐的积聚,可选择更易挥发的缓冲液。

多电荷离子
电喷雾尤其适用于分析大生物分子 (例如,蛋白质、肽和低聚核 苷酸) ,不过也能分析较小的分子 (例如药品和环境污染物) 。 大分子通常获得多电荷离子。由于多电荷离子,即使典型的四极杆 LC/MS 仪器的质量范围 (更准确的说,是质荷比)约为 3000 m/z, 您也可以使用电喷雾来分析有 150,000 u 这么大的分子。例如: 100,000 u / 10 z = 1,000 m/z

可选的 Agilent LC/MSD
Deconvolution & Bioanalysis 软件

大分子获得多电荷时,可使用称为解卷积的数学过程来确定分析 物实际的分子量。

可执行完成解卷积的计算。

安捷伦射流技术
安捷伦射流技术在 Agilent 6150 四极杆 LC/MS 系统上受支持。 安捷伦射流技术通过校准雾化器喷雾和产生更显著的信号,可更 好地去除分析物中的溶剂。向进样口组件中加入共线、同心、过 热的氮气鞘气 (图 10) ,会大大改善电喷雾柱的离子干燥,并 导致质谱仪信噪比增加,从而允许三重四极杆的检测限超过。目 前正在申请安捷伦射流技术的专利。

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硬件和软件概述 电喷雾电离 (ESI)

1

图 10

使用安捷伦射流技术的电喷雾离子源

安捷伦射流热梯度聚焦技术包含过热的氮气鞘气,该气体以共线、 同心的方式引入到气动电喷雾中。来自过热氮气鞘气的热能集中 用于雾化器喷雾,以达到尽可能高效地去除溶剂和离子生成。增 强的分子离子去溶剂化可产生更多的离子,这些离子进入到进样 毛细管中 (如图 10 中所示) ,同时导致信噪比增加。安捷伦射流 技术的参数为过热氮气鞘气的温度、流速和喷嘴电压。 6460A 中的毛细管为电阻毛细管,可改善离子传输,并允许几乎 瞬时的极性切换。该毛细管与安捷伦单四级杆产品的快速极性切 换版本中所用毛细管相同。

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1

硬件和软件概述 大气压化学电离 (APCI)

大气压化学电离 (APCI)
APCI 是气相化学电离过程。 APCI 技术通过雾化针传送 LC 洗脱 液,产生精细喷雾。喷雾通过加热陶瓷管,洗脱液滴可在陶瓷管 中完全汽化 (图 11) 。 然后,所产生的气体/蒸汽混合物通过电晕放电针,其中溶剂蒸汽 被电离以产生试剂气体离子。这些离子通过化学电离过程依次电 离样品分子。然后样品离子被引入毛细管中。
HPLC 进样口 雾化器 (喷雾器)

汽化室 (加热器) 干燥气体

++ + + + +
电晕 放电针

+
毛细管

图 11

大气压化学电离 (APCI) 源

APCI 要求分析物处于气相才能发生电离。要汽化溶剂和分析物, APCI 源通常在 400 到 500 °C 的汽化室温度下进行操作。 APCI 适用于各种分子极性。 APCI 很少产生多电荷离子,因此通 常用于小于 1,500 u 的分子。由于该分子量限制和对高温汽化的使 用,相对于电喷雾, APCI 较不适于分析热稳定差的大生物分子。 APCI 非常适于电离极性较低的化合物,这些化合物通常由正相色 谱进行分析。

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硬件和软件概述 大气压光电离 (APPI)

1

大气压光电离 (APPI)
使用 APPI 技术, LC 洗脱液可通过雾化针产生精细喷雾。喷雾通 过加热陶瓷管,洗脱液滴可在陶瓷管中完全汽化。所产生的气体/ 蒸汽混合物通过氪灯的光子束电离样本分子 (图 12) 。然后样品 离子被引入毛细管中。 APPI 和 APCI 相似,只是 APPI 用灯替代电晕针用于电离。APPI 通常还使用附加的溶剂或流动相改良剂 (称为“掺杂剂”)来帮助 光电离过程。 APPI 适用于许多通常由 APCI 分析的相同化合物。已证实 APPI 对非极性化合物的分析尤其有价值。
HPLC 进样口 雾化器 (喷雾器)

汽化室 (加热器) 干燥气体



++ + +

+ +

+
毛细管

紫外灯

图 12

大气压光电离 (APPI) 源

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1

硬件和软件概述 多模式电离 (MMI)

多模式电离 (MMI)
多模式源是能在三种不同模式 (APCI、 ESI 或同时 APCI/ESI) 下操作的离子源。多模式源包含两个电力相分离的优化区域,一 个区域用于 ESI,另一个用于 APCI。在同时 APCI/ESI 时,两个 电离模式中得到的离子都进入毛细管,并由质谱仪同时进行分析。

HPLC 进样口

雾化器

ESI 区域

APCI 区域
热容器 毛细管

电晕 放电针

干燥气体

图 13

多模式源

多模式电离 (MMI) 对筛选以下样品很有用处:未知样品,或者样 品为混合化合物并且一些化合物由 ESI 响应而另一些由 APCI 响 应。在这些情况下,多模式源能避免为了得到完整分析而两次分 析样本的需求。 与 APCI 和 APPI 源中监测汽化室温度不同,多模式源中监测实际 的蒸汽温度。结果,汽化室通常设置为 200 到 250 °C 之间。

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硬件和软件概述 化学工作站软件简介

1

化学工作站软件简介
概述
Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统的化学工作站软件按视图组 织。您可以通过每种视图执行一组特定的任务。菜单和工具栏随 每个视图而更改。

图 14

您可以使用这些按钮在六个化学工作站视图之间切换。

以下总结了化学工作站视图及其功能:

有关“方法和运行控制”视图 的详细信息,请参见第 3 章。

方法和运行控制
? 设置方法 ? 更改 Agilent 1100 系列 LC 模块或 Agilent 1200 系列 LC 模 块的设定值,包括芯片箱 ? 更改Agilent 6100 系列的设定值 ? 更改安捷伦 API 源的设定值 ? 分析单一样品 ? 分析自动序列 ? 分析 FIA 系列 ? 按需实时查看数据

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1

硬件和软件概述 概述

有关“数据分析”视图的详细 信息,请参见第 4 章。

数据分析
? 查看从 MS 和 UV 检测器收集的色谱和光谱 ? 积分色谱峰 ? 执行定量分析 ? 检查峰纯度 ? 解卷积多电荷离子光谱 ? 生成报告 ? 再处理序列中的数据

有关“报告版面设计”视图的 详细信息,请参见第 5 章。 有关“认证”视图的详细信 息,请参见第 6 章。 有关“诊断”视图的详细信 息,请参见第 7 章。

报告版面设计
? 设计自定义的报告模板

认证 (OQ/PV)
? 验证系统性能

诊断
? 了解仪器问题的可能原因 ? 运行测试以诊断仪器问题 ? 需要执行系统维护时接收通知 ? 抽真空并放空系统

有关“MSD Tune”视图的详细 信息,请参见第 2 章。

MSD Tune
? 优化并校正 MS

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硬件和软件概述 远程查看数据

1

远程查看数据
有两种设置计算机的方式,从而您可以远程查看化学工作站数据。 一种方式是安装数据分析,数据分析是化学工作站软件在远程计 算机上的唯一版本。此安装提供与您在控制Agilent 6100 系列 LC/MS 系统 的化学工作站上相同的数据分析功能。如果您需要详 细的数据分析的全部功能,这种方式很理想。

您可以在 LC/MS 化学工作站安 装 CD 上找到化学工作站数据浏 览器软件。

另一种方法是,将 Analytical Studio Reviewer 安装在远程计算机 上。利用 Analytical Studio Reviewer 可轻松查看化学工作站 LC 和 LC/MS 数据文件,但是功能却不同于完整的化学工作站数据分 析。 Analytical Studio Reviewer 软件对于合成化学家和其他将 LC/MS 系统用于“一步步”分析的人来说很理想。

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1

硬件和软件概述 远程查看数据

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Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统 概念指南

2 仪器准备
LC 系统的准备 34 用途 34 操作步骤总结 34 设置 LC 模块的参数 36 色谱柱老化与平衡 37 监测流量和压力的稳定性 38 MS 的准备 – 调谐 39 概述 39 调谐方法 40 调谐时间 – 检查调谐 40 自动调谐 42 手动调谐 43 调谐报告 45 增益校正 46

本章中,您会了解有助于准备仪器进行分析的概念。本章假设已 安装了硬件和软件,配置了仪器并进行了性能验证。如果以上未 完成,请参见Agilent 6100 系列单四极杆 LC/MS 系统安装指南。

Agilent Technologies

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2

仪器准备 LC 系统的准备

LC 系统的准备
用途
要实现良好的灵敏度,开始 LC/MS 分析前正确准备 LC 和色谱柱 非常重要。 要实现最佳信噪比,整个 LC 系统必须没有盐 (如非挥发性缓冲 液)和不需要的有机化合物的污染。一些对 UV 检测器没有影响 的污染物会导致 MS 出现问题。这些污染物可能会引起离子抑制 和/或高背景,而这些问题都会严重降低灵敏度。 要使基线平滑且噪音小, LC 流必须也非常稳定。

操作步骤总结
准确的 LC 准备步骤取决于先前使用 LC 的方法和要执行的分析类 型。下面提供了一些规则:

典型准备
在开始分析前, LC 路径应该无污染,且流量应该非常稳定。通 常,您可以通过执行以下操作来实现这些目标: 1 吹扫泵以去除气泡。吹扫计划使用的每个通道。 有关吹扫泵的说明,请在在线帮助中搜索关键字“吹扫”,滚动 主题列表,直到您看到以“吹扫”作为开头的条目。 2 老化色谱柱以除去不纯物或残留样品。 有关详细信息,请参见第 37 页的“色谱柱老化与平衡”。 3 在流动相初始组成时使色谱柱达到平衡。 有关详细信息,请参见第 37 页的“色谱柱老化与平衡”。 4 确保系统流量和压力稳定。 有关详细信息,请参见第 38 页的“监测流量和压力的稳定性”。

34

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仪器准备 操作步骤总结

2

更全面的准备
在日常工作中采用上述四个步骤即可,但如果出现以下情况之一, 则可能需要进行更全面的 LC/色谱柱冲洗: ? 您没有将此 LC 用于 MS。 ? 色谱柱为新色谱柱。 ? 更改为不同的流动相组成。 ? LC 用来分析不洁样品。 ? 下一次分析需要最高灵敏度。 更彻底的 LC 清洗协议在 Agilent 6100 单四极杆系统安装指南 中 介绍。请参见系统认证一章中有关老化 LC 的一节。 冲洗 LC 时,请别忘记冲洗计划使用的所有通道。并且,应通过将 用来冲洗系统的相同溶剂分成若干次注射来冲洗进样器。

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2

仪器准备 设置 LC 模块的参数

设置 LC 模块的参数
在“方法和运行控制”视图中设置 LC 模块。在系统示意图中,单击 要设置参数的每个模块。

图 15

系统示意图 (您的可能不同)

要访问任何系统模块的帮助,请单击模块子菜单上的帮助。要访 问给定对话框的帮助,请单击对话框中内的帮助按钮。

设置模块控制参数
下列步骤以泵模块为例。 1 在“仪器”菜单上单击更多泵 > 控制 HPLC 泵打开“泵控制”对 话框。 2 设置所需的控制参数,然后单击确定。 替代方法 从泵子菜单中选择所需的控制参数,如待机。

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仪器准备 色谱柱老化与平衡

2

设置模块设定值参数
下列步骤以二元泵模块为例。 1 在“仪器”菜单中单击设置仪器方法,打开“设置方法”对话框。 2 单击二元泵选项卡。 3 设置所需的设定值,然后单击确定。

访问其他仪器参数
1 单击以打开仪器菜单。 2 单击所需的命令,例如选择进样源、色谱柱或仪器配置。

色谱柱老化与平衡
有几种设置参数的方法可老化和平衡色谱柱。

老化
色谱柱老化可消除色谱柱中先前分离的化合物或不纯物,尤其是 使用单成分的溶剂分析 (等度分析)后。 有多种方法可在分析样品前老化色谱柱。一种方法是将要使用的 有机溶剂 (100% 的溶剂 B)用泵注入色谱柱并保持一段时间。另 一种方法是分析要使用的梯度,然后在分析最后一种组分时延长 时间,直到不会再出现峰洗脱。 如果色谱柱是新色谱柱, “老化”可以包括进样一些样品或高级别 的标样,直到峰面积和保留时间稳定。

平衡
进行梯度分析之后,色谱柱平衡将使色谱柱特性返回到其初始状 态。要在分析样品前平衡色谱柱,可使初始组分的溶剂从色谱柱 通过,并保持一段时间。

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2

仪器准备 监测流量和压力的稳定性

色谱柱老化与平衡
通过化学工作站软件,可以使用以下三种方法之一老化和平衡色 谱柱。 ? 交互式 将泵设置为分析末期的溶剂组成,并将流速设置为高于常规的 流速。然后可立即将这些设定值应用于泵。抽取了大约三倍色 谱柱体积的溶剂后,将泵的溶剂成份和流速设置为分析开始时 的值。如果使用此程序将不存储数据文件。 如果使用此程序,可以在老化和平衡色谱柱时调谐 MS。调谐 MS 时, MS 流选择阀会自动将 LC 排出物分流到废液。有关调 谐的信息,请参见第 39 页的“MS 的准备 – 调谐”。

如第 3 章所述,在“方法和 运行控制”视图中设置方法 和序列。

? 通过交互式运行中的方法 设置一种分析方法,然后运行空白样品。运行将使用方法停止 时间。还可以使用此方法中的后运行时间平衡色谱柱。 如果使用此程序将存储数据文件。 ? 通过序列 设置一种分析方法,然后将空白样品设置为序列中的第一个分 析。方法包括后运行时间以平衡色谱柱。 如果使用此程序将存储数据文件。

监测流量和压力的稳定性
LC 溶剂流量和系统反压必须稳定才能确保基线平稳且 API-MS 的 结果最佳。监控流量和压力稳定性的最佳时间是平衡色谱柱之后、 开始分析之前。

第 3 章提供了有关在线信号 (也称在线图)的详细信息。

可以使用化学工作站软件测量稳定性。要测量稳定性,可设置等 度方法,溶剂组成与要用于分析的初始组成相同。在分析过程中, 监测在线信号的流量和压力。

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仪器准备 MS 的准备 – 调谐

2

MS 的准备 – 调谐
概述
对与调谐相关的所有任务使用 “MSD 调谐”视图。
调谐是调整 MS 参数以生成高质量的准确质谱的过程。在调谐过 程中,会优化 MS 以: ? 使灵敏度达到最高 ? 保持可接受的分辨率 ? 确保准确的质量分配

调整的参数
Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统有两组可以调整的参数。其 中一组参数与离子的形成相关。这些参数控制雾化室 (例如,电 喷雾或 APCI)和碰撞诱导解离。另一组参数与离子的传输、过滤 和检测相关。这些参数控制锥孔体、八极杆、透镜、四极杆质量 过滤器以及高能量打拿极 (HED) 电子倍增器 (检测器) 。 调谐主要是找到控制离子传输、过滤和检测的参数的正确设置。 将调谐液引入 MS 并生成离子,即可完成这一工作。使用这些离 子时,可以调整调谐参数,从而达到灵敏度、分辨率和质量分配 的目标。在一些例外情况下,将不调整控制离子形成的参数。这 些参数将被设为有利于生成调谐液溶剂离子的固定值。

调谐文件和报告
调谐的结果会生成调谐文件 (实际上是一个目录) ,其中包含正 负电离的参数设置。数据采集使用调谐文件时,将自动调用适合 数据采集方法指定的离子极性的设置。 自动调谐,自动调谐程序,同时还生成一个报告。请参见第 45 页。

在数据采集过程中使用调谐文件
在数据采集的过程中,与离子形成关联的参数由数据采集方法 控制。与离子传输关联的参数由指定给数据采集方法的调谐文 件控制。

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2

仪器准备 调谐方法

调谐方法
在“MSD 调谐”视图中通过 “调谐”菜单访问此功能。
化学工作站软件提供下列两种方法来调谐 MS: ? 自动调谐是一种在整个质量范围内对 MS 进行调谐以获得良好 性能的自动调谐程序。它在通过调谐传输系统 (CDS) 引进的标 准校正混合物中使用已知化合物。这就是您在多数情况下使用 的调谐方法。 ? 手动调谐使您可以通过一次调整一个参数来调谐 MS,直到获 得所需的性能。手动调谐更多地用于以下情况:需要最大灵敏 度、分析针对受限的质量范围或需要调谐化合物 (标准调谐液 除外) 。 此外,检查调谐程序允许您确定是否需要调谐。 将在下一节中对检查调谐、自动调谐和手动调谐进行详细介绍。

注意

正常的操作不需要经常进行调谐。 LC/MS 在调谐之后非常稳定。 通常只需一个月、最快一周后再进行调谐。如果您怀疑存在调谐 问题,请在重新调谐之前,使用检验调谐程序确认 MS 是否未经 调整。

小心

启动真空后请等待至少四个小时,然后再调谐或操作您的 Agilent 6100 系列 LC/MS 系统。四极杆质量过滤器中的陶瓷部件 可以从空气中吸收湿气。调谐或采集数据太快可能会导致放 电。此外,分析器至少需要九个小时才能达到热平衡。在 MS 达到热平衡之前创建调谐文件或采集数据可能会导致不正确的 质量分配和其他不准确的情况出现。

调谐时间 – 检查调谐
“检查调谐”允许您在不执行完整快速调谐的情况下快速确定 MS 是否已正确调谐。它会对调谐质量执行一次峰状图扫描,并将峰 宽和质量轴与目标值进行比较。如果通过“检查调谐”获得的值在 可接受范围之内,则调谐报告会指示检查调谐通过。 (请参见 第 41 页上的图 16。 如果值超出可接受的范围,则“检查调谐” ) 会建议您调整峰宽或校正质心轴。

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仪器准备 调谐时间 – 检查调谐

2

第三个参数,即“增益”,可以添加到由“检查调谐”检查的参数中。 添加后, “检查调谐”会将当前增益值与最近自动调谐的增益值进 行比较。有关增益的讨论,请参见第 46 页。

所有的质量都通过了 质心轴和峰宽的测试

图 16

“检验调谐”报告

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2

仪器准备 自动调谐

自动调谐
自动调谐是一种在整个质量范围内对 MS 进行调谐以获得良好性 能的程序。

自动调谐文件
调谐文件 ATUNES.TUN 用作自动调谐的起点。 自动调谐的结果将保存到当前自动调谐文件中。这将加速自动调 谐,因为每个自动调谐均始于最近良好的调谐参数。然而,这意 味着将丢失先前的调谐值。有时,您可能要在使用自动调谐之前, 将自动调谐文件以其他文件名进行保存。 一个自动调谐文件包含正电离自动调谐和负电离自动调谐的结果。

自动调谐极性与扫描速度
要运行自动调谐,有以下六种选择: ? 双极性 ? 正极性 ? 负极性 ? 双极性快速扫描 ? 正极性快速扫描 ? 负极性快速扫描 “双极性”模式可以执行正电离和负电离的自动调谐。 “正极性”和 “负极性”模式仅执行指定极性的自动调谐。

42

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仪器准备 手动调谐

2

自动调谐时的增益检查
“增益检查”仅在进行正极性自动调谐或双极性自动调谐的正极性 部分时发生。有关“增益检查”的详细信息,请参见第 46 页的“增 益校正”。

雾化室参数
自动调谐可以调整影响离子传输的参数。自动调谐不调整影响离 子形成的雾化室参数。将这些参数设置为缺省值有利于生成调谐 液的离子。 由于雾化室之间可能存在细微的差别,因此对于特定的雾化室, 缺省参数可能不是最佳设置。例如,雾化器调整和 LC/MS 系统组 件正常老化所引起的变化也可能导致缺省值不是系统的最佳设置。 因此,可以考虑手动设置雾化室参数。通常仅当仪器无法自动调 谐或自动调谐的结果表明系统性能显著降低时,才有必要进行此 操作。请注意,其他因素也可能会降低系统性能。

手动调谐
自动调谐程序将在整个质量范围内调整 MS 以获得良好性能,此 调谐程序对于大多数应用程序而言已经足够了。但是,有时手动 调谐 MS 是非常有益的。这包括: ? 当您要牺牲部分分辨率获取最大灵敏度时 ? 当您要专门对极低限度的质量范围 (< 150 u)进行调谐时 ? 当您要使用化合物 (标准调谐液除外)进行调谐时。

小心

调谐液传输系统 (CDS) 是特别为安捷伦调谐液在乙腈:水为 90:10 的溶剂混合液中的精确传输而设计的。其他溶剂和混合液可能 具有不同的流速,对于调谐而言,这可能不是最佳的。此外, CDS 内的 O 形密封垫是乙烯 - 丙烯。它们可被脂肪族烃、芳烃 或卤代烃损坏。请勿在 CDS 中使用这些类型的溶剂。我们建议 您通过 LC 传输非标准调谐液。

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2

仪器准备 手动调谐

手动调谐提示
电离模式 电喷雾、 APCI/APPI 和多模式 ES+APCI 不 需要单独的调谐。调 谐包括调整控制离子传输的参数。那些离子是怎样生成的没有关 系。在电喷雾模式下创建的调谐文件通常将为 APCI/APPI 样品提 供良好的结果。反之亦然。 正负电离需要单独的调谐。有时,必须对 MS 进行两次调谐,一 次使用正离子,另一次使用负离子。这两次调谐可以存储在相同 的调谐文件名下。可以分别对正离子和负离子的设置进行更新。 在整个质量范围内始终都需要调谐。只有在所有目标离子都小于 约 150 u 时才例外。对减小的质量范围进行正确的手动调谐可以 改善传输,并可以对这些质量非常低的离子进行检测。

极性

质量范围

手动调谐的步骤
在线帮助包括对手动调谐的逐步说明。这些说明假定使用其中一 种标准调谐液,并在整个质量范围内进行调谐,但是使用的标准 调谐液可以改为非标准调谐液,而质量范围可以改为较窄的质量 范围。 要访问手动调谐说明: 1 打开在线帮助。 2 单击展开“如何使用化学工作站”。 3 单击展开“基本任务”。 4 单击展开“方法和运行控制”。 5 单击展开“MSD 调谐”。 6 单击链接“手动调谐 LC/MSD 或 CE/MSD”。 7 向下滚动,直到您看到“步骤”。

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仪器准备 调谐报告

2

调谐报告
在每次自动调谐结束时,系统都会打印调谐报告。还可以通过“文 件”菜单手动打印调谐报告。

图 17

调谐报告 (第 1 页,共 4 页)

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2

仪器准备 增益校正

增益校正
增益校正以一种简化方法开发和可移植性的方式设置电子倍增器 电压。自动调谐过程中自动执行增益校正。还可以在手动调谐过 程中检查并调整增益校正。

什么是增益?
HED 电子倍增器会收到通过离子撞击倍增器生成的输入电流, 并会增强该电流以及生成相应比例的输出电流。

增益 = 输出电流/输入电流
增益由电子倍增器电压 (EMV) 控制。 EMV 越高,增益越高。 EMV 和增益之间是对数线性关系。这种线性关系适用于所有倍增 器。由于该直线斜率为常数,因此要设置增益,软件只需调整截 距。增益校正过程仅调整特定仪器的截距值。特定仪器的增益曲 线系数将存储在 MS 中。

增益校正曲线
通过获取根据倍增器范围内严谨的倍增器设置产生的离子电流读 数,可以生成增益校正曲线。将为正负两极单独生成增益校正曲 线,因为在这两种模式下产生的离子电流在某种程度上会有所不 同。增益为 1 时则将倍增器值设为 1e6。即,一个撞击检测器输 入端的电子将在输出端生成 1e6 个电子。可以同时在正负两极或 在当前极上生成增益检查。

增益与方法可移植性
使用增益将启用仪器之间的方法分布。原则上,在两个不同的仪 器上使用同一增益应该产生相同的信号响应,从而便于方法的开 发和仪器的可移植性。由于 EMV 和增益之间是对数线性关系, 因此增益 2.0 的丰度应该是增益 1.0 的丰度的两倍。

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仪器准备 增益校正

2

增益并非总是越大越好
一般来说,最好在最低增益状态下 (仍可产生足够的丰度)运行 检测器。高增益将增加噪声和信号,并且经常会导致较低的信噪 比。提高增益可以提高 EMV,这将缩短电子倍增器的使用寿命。 无论将增益设置为多高,EMV 的最大值均为 3000 eV,70 或高于 70 的增益得出的均为 3000 eV 的设置。 随着电子倍增器的老化,其效率也会随之降低。对于给定的离子 电流输入,倍增器产生的输出电流 (丰度)将越来越小。很难将 由老化的电子倍增器造成的低丰度与弱离子生成或传输 (低离子 电流输入)造成的低丰度区分开。即使电子倍增器实际是在其先 前的增益状态下正常运行,也可以尝试通过提高增益 (从而提高 EMV)来补偿弱离子生成或传输。提高的增益将提高丰度,但可 能会降低信噪比并将缩短电子倍增器的使用寿命。

检查增益校正
在“MSD 调谐”视图中通过 “调谐”菜单访问此功能。
增益校正检查期间,会采用离子电流的读数,并根据电流极性的 当前增益校正曲线检查离子电流的读数。如果该读数在可接受的 限制范围内,则不会对该极性的曲线进行更改。如果该读数超出 限制范围,会生成新的增益曲线。增益 1 将被设置为乘积因子 1e6。即,一个撞击检测器输入端的电子将在输出端生成 1e6 个电 子。如果该乘积因子的设置超过 2600 伏 (表明降低电子倍增器 性能或仪器性能) ,会警告您需要进行系统维护。

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2

仪器准备 增益校正

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Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统 概念指南

3 数据采集
使用方法 50 “方法和运行控制”视图 50 调用、编辑、保存和打印方法 52 编辑方法的更多信息 53 运行样品 56 运行单个样品 57 运行序列 58 流动注射分析 61 监测分析 64 在线信号图 64 快速方法概览 65 工作日志 65 仪器关闭 67

本章中,您会了解有助于运行样品以及采集数据的概念。本章假 设已安装了硬件和软件,配置了仪器并进行了性能验证。如果以 上未完成,请参见Agilent 6100 系列单四极杆 LC/MS 系统安装 指南。

Agilent Technologies

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3

数据采集 使用方法

使用方法
“方法和运行控制”视图
您从“方法和运行控制”视图中设置方法并运行分析 (如图 18 所示) 。 在数据采集过程中,化学工作站方法控制着仪器。准备方法的最 简便的方式是调用一个相似的方法 (或调用 DEF_LC.M) ,用新名 称将其保存,进行修改 (或编辑) ,再重新保存它。然后您可以 用该方法通过序列运行单个样品或多个样品。 您也可以为流动注射分析 (FIA) 设置方法,其中您可在单个运行 中进行多次进样。

50

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

数据采集 “方法和运行控制”视图

3

工具组选择: 序列或单个样品

方法

序列

顶部工具栏 状态栏

运行控制 MS, FIA 文件列表 系统视图 数据 分析

视图选择

在线图谱 命令行 磁盘 空间

图 18

本视图中,您可设置方法、建立仪器设置并进样样品。

状态和运行工具栏: 主要选项卡

右键单击“方法”图标可查看以下命令: “运行时选项表”、 “方法信息”、 “编辑完整方法”、 “方法审计跟 踪”、 “打印方法”和“帮助”。

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

51

3

数据采集 调用、编辑、保存和打印方法

调用、编辑、保存和打印方法
当您需要使用方法时,有几种方式访问必需的功能: ? 方法菜单允许您调用、编辑、保存和打印方法。 ? 使用“运行控制栏”中的“方法”图标。 右键单击该图标可访问子菜单。 ? 使用工具栏或“方法”下拉列表。 当您要查看方法的所有工具 (或交互式运行单个样品)时, 先单击单个样品工具组图标 (如图 19 所示) 。
序列
单个样品

图 19

工具组选择

调用 方法

保存 当前 方法

从最近方法列表中 选择方法

编辑整个 方法

图 20

单击单个样品工具组图标时,您可以访问使用方法的工具。 ? 使用“方法和运行控制”视图左侧的“化学工作站资源管理器” 窗格。 单击底部的方法选项卡显示方法文件。 双击要调用的方法。 在空白区域单击鼠标右键以查看子菜单,其中包含“调用方法” 等选项。

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Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

数据采集 编辑方法的更多信息

3

编辑方法的更多信息
编辑方法有多种方式。如果您需要为新分析创建新方法,则最好 浏览一个方法然后编辑整个方法,如下所述。如果您仅要对现有 方法做很少更改,最简便的方法是仅编辑需要更改的设置,如 第 54 页的“编辑方法的一部分” 所述。

编辑整个方法
可以从方法菜单或运行控制栏中的编辑完整方法图标 或状态 栏中的方法图标编辑整个方法。如果选择编辑整个方法,会先后 显示相应的对话框。第一个对话框 (图 21)用于选择方法中要查 看和编辑的部分。如果编辑方法时需要其详细信息,在每个对话 框中单击帮助按钮。

图 21

您可查看并修改的方法的部分

运行时选项表 (列于图 21 的最后一项)控制您运行分析时软件 执行方法的哪些部分。如图 22 所示,一个完整的方法可同时包含 数据采集和数据分析。

注意

请确保编辑后保存方法。

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53

3

数据采集 编辑方法的更多信息

在开始序列中的分析前 运行命令或宏

为优良实验室规范 (GLP) 保存 受校验和保护的寄存器文件 在分析后运行命令或宏 (如运行一个 Excel 宏) 保存分析条件的 完整记录

图 22

运行时选项表

编辑方法的一部分
如果仅需要更改数据采集方法中的很少设置,可以编辑该方法的一 个子集。您可以通过系统视图 (图 23)或仪器菜单完成此操作。

图 23

您可以右键单击系统视图中的模块来访问允许您更改 设置的子菜单。

注意

请确保更改仪器设置后保存方法。

要访问 MSD 参数,请参见下表。

54

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数据采集 编辑方法的更多信息 表1 设置 的任务
单击 MS 图标,然后选择以下 菜单项: 设置 MSD 信号 设置 MSD 信号 雾化室 雾化室 数据曲线 或从仪器 菜单中选择以下项 设置 MSD 信号 设置 MSD 信号 MSD 的更多设置 > 雾化室 MSD 的更多设置 > 雾化室 MSD 的更多设置 > 数据曲线

3

如果您要: 设置扫描范围或 SIM 离子 设置仪器极性 设置干燥气体流量或温度或 雾化器压力 设置毛细管电压 运行时选择要保存的 MSD 参数

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3

数据采集 运行样品

运行样品
LC/MS 化学工作站提供三种方式来运行样品: ? 交互式运行单个样品并创建单个数据文件。 ? 通过序列运行单个或多个样品,并为每个样品创建数据文件。 FIA = 流动注射分析 ? 通过 FIA,在单个数据文件中运行多次进样。 您可以使用相同方法运行序列中的单个样品或多个样品。

显示 “ 单个样品 ” 工具组

显示 “ 序列 ” 工具组

FIA 图标

图 24

要运行样品,先单击相应的图标。

对于 FIA,您必须修改方法才能在同一运行中启用多次进样。

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数据采集 运行单个样品

3

运行单个样品
在设置并保存方法后,便可以交互式运行单个样品,如下所示。 先单击图标以显示单个样品工具组。

单个样品

单击以输入样品信息

单击以启动运行

图 25

输入样品信息并启动运行的方式。

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3

数据采集 运行序列

运行序列
要运行无人参与的自动序列中的样品,先单击该图标显示以序列 工具组。单击左边的“序列”图标,可访问“序列”工具组和显示样品 盘的进样视图。
序列

图 26

序列工具组选择图标。

调用、编辑、保存和打印序列
需要调用、编辑、保存和打印序列时,有几种方式可访问必需的 功能: ? 从序列菜单中选择。

图 27

序列菜单允许您调用、编辑、保存和打印序列。

58

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数据采集 运行序列 ? 使用工具栏或序列下拉列表。

3

调用 序列

保存 序列

从最近序列列表中 选择序列

图 28

使用序列的工具 ? 使用“方法和运行控制”文件列表。如果需要,先单击底部的序 列选项卡。您可在空白区域单击鼠标右键以查看菜单,或双击 一个序列对其调用。 ? 单击进样视图以访问菜单。

编辑序列的更多信息
当您编辑序列时,以下对话框是可用的: ? 序列参数 – 您输入信息,例如,数据文件路径、要运行的方法 的部分和关闭系统的后序列命令/宏。 ? 序列表 – 包括样品列表和所有校正信息 ? 序列输出 – 控制报告 (样品结果和序列总结)的打印 ? 导入序列 – 您可通过它从文本 (.txt) 文件或分隔文件 (如 Microsoft Excel 中创建的逗号分隔值 (.csv) 文件)中导入 样品表

注意

编辑完序列后,确保保存该序列。

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3

数据采集 运行序列

启动序列
设置并保存序列及其使用的所有方法后,您就可以运行该序列。 如图 29 所示,该软件提供了多种方法来启动序列。

在“序列表”和“部 分序列”对话框中单 击“运行序列”按钮

单击以启动序列

单击以启动序列

图 29

启动序列的多种方法。

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数据采集 流动注射分析

3

流动注射分析
流动注射分析 (FIA) 是多个样品在同一运行中的进样,且在无色 谱柱的情况下执行。当您要优化诸如以下的 MS 参数时 FIA 非常 有用: ? 干燥气体流量和温度 (取决于流动相、流速以及电离模式) 。 ? 雾化器压力 (取决于流动相、流速以及电离模式) 。 ? 解离电压 (取决于化合物的结构) 。 FIA 在快速检查化合物灵敏度和线性,或在无分离的情况下随时 执行分析时也是非常有用的。

在方法中设置 FIA
您可以通过方法菜单或“FIA”图标将 FIA 添加到方法中 (请参见 图 30) 。

FIA 图标

单击以启用 FIA 或设置 FIA 系列

图 30

在方法中启用 FIA 的两种方式

优化单个样品的设置 “编辑 FIA 系列”对话框具有自动填充功 能,因此您可以自动建立 FIA 表。您最多可选择两个 MSD 参数, 然后自动增加其设置。此功能可使您轻松设置 FIA 来优化设置, 如图 31 中的示例所示。如果您以后决定添加设定值,可以使用插 入行/添加行功能。

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3

数据采集 流动注射分析

注意

一些参数 (如气体温度)要花费一些时间才能达到设定值。在 这些情况下,可在每个设定值执行多次进样并允许进样间的时 间更长。

先选中复选框 自动建立 FIA 表

图 31

FIA 是优化 MS 参数的便捷方式。本示例显示了解离电 压的测试。

62

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数据采集 流动注射分析

3

如果需要进样多个样品来检查灵敏度或线性,您 也可以使用“编辑 FIA 系列”对话框中的自动填充功能。这种情况 下,使 MS 参数保持常数仅增加样品瓶号。或者,您可以用插入 行/添加行功能来添加样品。图 32 显示了 FIA 线性检查的一个 示例。

进样多个样品

手动或自动添加行

图 32

对于纯样品, FIA 系列可用于检查灵敏度或线性。本示 例显示了一个线性检查。

运行多个 FIA 方法
如果您有多个化合物要测试或您需要执行更复杂的方法开发,则 可以运行一连串的 FIA 方法,类似于序列。您可通过运行控制菜 单访问该功能。

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3

数据采集 监测分析

监测分析
在线信号图
分析过程中,您可以查看在线信号,如图 33 所示。 (选择查看 > 在线信号。 ) 您可以单击信号显示左下方带箭头的小框,将在线图谱显 示为一个独立的窗口。如果您想让窗口变大以能够查看更 多的信号,此功能很有用。 对于在线图谱,您可以选择要显示哪些信号,且您可以调整 x 和 y 轴的刻度。

图 33

在线图谱

64

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数据采集 快速方法概览

3

快速方法概览
您可以在在线图谱的正右方获取方法参数的快速概览。您可以选 择要查看哪种类型的设置,包括 LC、 MS 和数据分析设置。您可 以单击每个参数来显示可更改该参数的对话框。

图 34

快速方法概览,显示 LC 设置

工作日志
在“方法和运行控制”视图中以下几个日志很重要:您可以通过“查 看”菜单或“日志”图标查看日志,如图 35 所示。

当前日志
当前日志存储所有错误、系统和事件消息,对于常规信息和故障 排除很有帮助。它记录了诸如化学工作站开启和关闭、序列和方 法的调用、序列和方法的运行等事件。 日志文件保存为 INSTRx.LOG 形式 (其中 x 是仪器编号) ,位于 CHEM32 的仪器文件夹中的临时文件夹下 (例如 C:\CHEM32\1\TEMP) 。

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3

数据采集 工作日志

运行日志
RUN.LOG 存储与特定样品分析有关的所有消息。它位于数据文件 文件夹中。您可以用它来检查样品是否被正确处理。

序列日志
序列日志显示了序列运行时发生的情况。您可以用它排除无人执 守的操作中发生的故障。 日志文件的名称为 sequencename.LOG (其中 sequencename 为化 学工作站序列的名称) 。该软件会在序列每次运行时生成一个日志 文件,通常在仪器文件夹中的 DATA 文件夹中 (例如, C:\CHEM32\1\DATA) 。

当前日 志图标

序列日 志图标

图 35

用图标打开日志的方法。

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数据采集 仪器关闭

3

仪器关闭
分析结束后,如果您计划当天不再分析更多样品,则执行以下操 作非常重要: 不使用缓冲液,用流动相冲洗系统。 将系统置于待机模式。 有关详细信息,请参见 Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统快速

入门指南 中的“基本操作”一节。

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3

数据采集 仪器关闭

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4 数据分析
“数据分析”视图 70 调用和处理色谱图 72 调用信号 73 从色谱图显示中删除信号 77 更改色谱图的显示方式 77 使用光谱 79 显示光谱 80 峰纯度 81 执行定量分析 82 积分峰 82 校正 84 数据浏览和序列数据再处理 86 导航表 86 批处理浏览 86

在本章中,您将了解有助您分析数据的概念。有关与数据分析相 关的概念的详细信息,请参见以下两本手册: ? 安捷伦化学工作站:了解您的化学工作站 ? 安捷伦 LC 3D 系统化学工作站:了解光谱软件 有关与任务相关的深入信息以及有关对话框和工具栏的特定信息, 请参见在线帮助。有关工具栏上所有按钮的说明,请于在线帮助 中双击用户界面参考,然后双击工具栏。

Agilent Technologies

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4

数据分析 “数据分析”视图

“数据分析”视图
数据分析视图 (如图 36 所示)提供了用于定量和定性数据分析 的所有工具。在此视图中,您可以: 评估色谱图和光谱 查看来自 MS 和 UV 检测器的信号,并对其进行比较 对峰进行积分并执行定量分析 检查峰纯度 执行解卷积 (使用可选的安捷伦 LC/MSD 解卷积和生物分析 软件) 通过预定义的报告模板生成报告 对序列中的数据进行再处理

70

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数据分析 “数据分析”视图

4

标题栏

导航工具栏

顶部工具栏 光标工具

图形工具

文件列表 (化学工作站 资源管理器) 导航表 工具组选择 信号视图选择 DAD 信号

LC/MS 信号

视图选择 命令行

图 36

“数据分析”视图提供用于定性和定量分析的菜单和工具。

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4

数据分析 调用和处理色谱图

调用和处理色谱图
在化学工作站软件中,色谱图 被称为“信号”
化学工作站软件可在同一数据文件中存储多个信号。信号的示例 是 MS 色谱图和 UV 色谱图。 对于许多分析而言,能够比较不同检测器或不同仪器设置所产生 的结果,或比较不同样品的结果是很重要的。通过化学工作站软 件,您能够调用并比较同一数据文件中或不同数据文件间的信号。 例如,在同一数据文件中,您可以两种不同碰撞诱导解离设置或 离子极性同时调用并评估 UV 和 MS 数据或 MS 数据。您可以调用 多个样品中的数据文件,以比较保留时间和峰高。 TIC – 总离子流图 EIC – 提取离子色谱图 BPC – 基峰色谱图 适用于 MS 数据的特定色谱图包括: 总离子流图 (TIC) — 包括每个时间点上的所有离子的色谱图 提取离子色谱图 (EIC) — 选定 m/z 值或某范围内值的色谱图 基峰色谱图 (BPC) — 代表数据文件中每个光谱的最大峰丰度的 色谱图 总离子流图和基峰色谱图可用于查找样品中的所有色谱峰。由于 其专属性,提取离子色谱图是定量分析的理想选择。您还可以使 用提取离子色谱图检查色谱峰的纯度。当色谱峰由一个以上的组 分组成时, EIC 经常无法对齐。

72

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数据分析 调用信号

4

调用信号
调用信号的方式
您可以通过下列方式调用色谱图 (信号) : 从文件菜单中选择。

指定积分 查看文件信息

选择要调用的信号 (按住 CTRL 键并单击可选择多个信号) 选择要显示的仪器曲线

图 37

通过“调用信号”对话框,您可以选择要调用的数据文件和信号。

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4

数据分析 调用信号 使用顶部工具栏。

调用 信号

调用信号并与 当前信号重叠

图 38

调用信号的工具。

使用化学工作站资源管理器中的“数据文件”列表。 (如果需要,先单击底部的数据选项卡。 )

批处理

序列 单次运行

图 39

您可以用鼠标右键单击样品瓶以查看菜单,也可以双击样 品瓶以调用多个数据文件。

74

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数据分析 调用信号

4

更新选择
为数据文件调用信号之后,可以改进您的选择,如图 40 和图 41 所示。

单击 “+” 可展开 双击信号可 对其查看 单击重叠信号 可查看多个数据 文件中的信号

图 40

可以通过双击某个信号 (左侧)而查看特定信号,也可 以通过右键单击以在右侧显示菜单。

图 41

可以通过从信号列表中选择来查看特定信号。

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4

数据分析 调用信号

有关信号的更多信息
除了从单个数据文件调用信号,文件菜单还允许您从多个文件调 用信号,并显示提取离子色谱图和扣除背景的色谱图。

从一个数据文件调用信号 重叠信号 — 可以来自不同数据文件) 显示提取离子色谱图 重叠基峰色谱图 从数据文件中的每一点扣除背景光谱 (有关 BSB, 请参见在线帮助)

图 42

文件菜单提供调用色谱图以及执行背景扣除的方式。

在化学工作站软件中,“重 叠”表示同时调用一个以上 的信号。

在文件菜单中,重叠信号允许您比较来自不同样品或进样的信号, 因此您能够仔细检查细微差异。请注意,虽然术语“重叠”可能意 味着在同一窗口中将信号显示在其他信号的顶部,但是实际上您 可以使用可从“信号”工具组、 “纯度”工具组或“图形”工具组访问的 按钮来控制显示。这些按钮分别是:
显示重叠 (在“图形”工具组中,此 按钮可在重叠和独立状态间 切换。 ) 显示独立

76

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数据分析 从色谱图显示中删除信号

4

从色谱图显示中删除信号
如果同时显示的信号过多,则各显示会变得太小或难以查看。 此时可以通过下列方式之一从显示屏幕中删除信号: 选择视图 > 窗口功能 > 删除窗口。 使用“信号”工具组和“纯度”工具组中允许您从色谱图显示 中删除信号的工具。

更改色谱图的显示方式
分析数据时,能对数据显示进行控制是很有用的。例如,您可能 想在独立的窗口中显示各色谱图,或在单个窗口中重叠显示这些 色谱图。如果您想查看同一分析中的 UV 和 MS 色谱图,独立窗口 通常是最佳选择。如果您需要比较两种复杂样品间的细微差异, 重叠窗口也许更合适。 能够进行缩放、添加标注、对齐色谱图 (例如, UV 和 MS 色谱 图)以及控制是否显示保留时间和积分基线也是很有用的。

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77

4

数据分析 更改色谱图的显示方式 色谱图可以进行以下自定义: 从图形菜单中选择。

定义色谱图的显示方式

放大和缩小

添加和编辑标注

图 43

图形菜单提供了更改显示色谱图方式的方法。

使用如下所述的工具组。 “图形”工具组 图形工具提供了更改信号显示的方法。可以添加标 注,以及更改是否显示化合物名称、保留时间、基线、标题 和轴。可以打印窗口然后将窗口复制到剪贴板。 显示“图形”工具组的图标位于“数据分析”窗口的中部附近。 “信号”工具组 通过信号工具,您可以更改色谱图的显示。您 可以更改独立显示为重叠显示、对齐 x 轴和 y 轴、按满量程 还是按相同量程显示信号、平滑色谱图、扣除色谱图 (例 如,扣除空白运行)以及对色谱图执行其他操作。

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数据分析 使用光谱

4

使用光谱
借助化学工作站软件,您可以显示 UV 和质谱。

在化学工作站软件中,背景光 谱称为“参比光谱”。

通过 MS 数据,色谱图中的每一点都有一个关联的质谱。可以显 示单光谱、平均光谱和扣除背景的光谱。对于 LC/MS 数据,通常 从每个分析物光谱中扣除背景光谱。扣除背景光谱时,便删除了 可归于流动相和其他背景的离子。 对于 UV 信号,根据存储模式不同,可能仅有峰顶点或峰中的光 谱。仅当您设置方法的 UV 检测器部分时将保存设置为全部的情 况下,色谱图中的每个点才都会有一个光谱。

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79

4

数据分析 显示光谱

显示光谱
您可以用下列不同的方式显示光谱: 从光谱菜单中选择。

选择光谱 选择用于扣除的背景光谱 (还必须在 “光谱选项”中启用了背景扣除)

对照 MS 和 / 或 UV 检查峰纯度 指定离子识别

设置光谱显示的选项,并指定执行背景 扣除的方式 (MS 参比)

图 44

光谱菜单提供了选择和显示光谱的方法。

使用如下所述的工具组。 “光谱”工具组 光谱工具帮助您快速显示和评估光谱。可 以选择光谱 (包括背景光谱) ,放大和缩小,将光谱保存到 库,搜索光谱库,设置光谱选项,选择用于纯度分析的色谱 图峰,以及执行其他与光谱相关的任务。 “计算”工具组 通过计算工具,您可以对光谱进行加、减和乘操作。 您可以通过此处显示的图标访问这些操作,该图标属于“光 谱”工具组。

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数据分析 峰纯度

4

峰纯度
对于许多分析,了解色谱峰是表示单一组分还是多个组分是很重 要的。通过化学工作站软件,您可以使用 UV 和/或 MS 数据评 估峰。 要开始评估,请选择光谱 > 选择峰纯度。有关峰纯度的详细概念, 请参见安捷伦 LC 3D 系统化学工作站:了解光谱软件。

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4

数据分析 执行定量分析

执行定量分析
ESTD – 外标校正 ISTD – 内标校正 定量分析是确定样品中每种组分含量的过程。通过将样品中分析 物的峰面积或峰高与标准已知浓度的峰面积或峰高进行比较,来 执行定量分析。对于每种标样和样品,可以添加恒量的内标,可 用于修正进样量和检测器灵敏度等的细微差异。 对于定量分析,最好对数据采集使用 SIM 模式,原因是该模式在 整个峰中生成更多数据点,这提供了最佳精度和准确度。执行定 量分析时,通常以对样品进行区间循环校正的浓度来分析标样。 然后可使用化学工作站软件为每种分析物生成校正曲线,并确定 样品中每种分析物的含量。

校正曲线是 y 轴上的峰面积 或峰高与 x 轴上的浓度之比 的图形。

积分峰
积分 – 计算峰面积的过程 确认离子用于确定用于定量分 析的离子属于分析物而非属于 干扰的离子 测定峰面积是定量分析的基本组成部分。为避免干扰,可使用提 取离子色谱图(EIC) 而非总离子流图的峰面积。可以使用分子离子 的 EIC 进行定量分析,使用一个或多个碎片离子的 EIC 进行确 认。后者称为“确认离子”,必须为这些离子配置合适的比率,才 能确认是否存在分析物。 在化学工作站软件中, “信号细节”指定了哪些提取离子信号用于 定量分析以及哪些 (如果有)用于确认离子。可以在校正菜单中 访问“信号细节”,并且可以保存方法中的“信号细节”。 为确保对峰的积分正确,需要建立相应的积分参数。浓度最低的 标样通常代表了积分的最大挑战,因此最好使用该标样来改进积 分设置。然后您可以将这些积分参数和方法一起保存,并将其应 用到较高级别的标样和样品中。

82

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数据分析 积分峰 按下列不同的方式设置积分参数并执行峰积分: 从积分菜单中选择。

4

执行积分 使用事件表建立积分事件 显示表格式积分结果

建立手动积分事件

在方法中使用手动积分事件

图 45

积分菜单

使用“积分”工具组。 积分工具帮助您执行积分和生成报告。可以定义 积分事件,执行自动和手动积分,绘制基线,放大和缩小,指定 报告类型,以及查看和打印报告。

注意

完成后,请务必将积分设置和方法一起保存。

有关积分概念的更多信息,请参见安捷伦化学工作站:了解您的 化学工作站。

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83

4

数据分析 校正

校正
校正曲线是 y 轴上的峰面积 或峰高与 x 轴上的浓度之比 的图形。 执行校正时,可将标样的峰积分插入到校正表中。这些区域响应 用于生成校正曲线。 在化学工作站软件中,每一种浓度的标样都称为一个“级别”。当 对最低浓度的标样进行积分后,可将其添加到校正表中作为级别 1。然后,添加次低浓度的标样作为级别 2,依此类推,直到添加 了所有标样。 提示:如果已将“信号细节” (请参见校正菜单)保存为方法的一 部分,则可以自动调用每种标样的提去离子色谱图并对其积分。 (请参见图 46。 )

图 46

突出显示的功能可较快的向校正曲线添加级别。

84

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数据分析 校正 化学工作站软件中提供了下列用于访问校正工具和命令的方式: 从校正菜单中选择。

4

建立新校正表 将级别添加到校正表 建立诸如曲线拟合的常规设置, ISTD/ESTD 设置校正表的详细选项

定义用于校正的信号 (例如 EIC)

图 47

校正菜单

使用“校正”工具组。 校正工具提供了完成校正任务和生成报告的快 速方法。可以创建新校正表、将级别和峰添加到表、使用当前色 谱图重新校正,以及执行其他校正任务。还可以指定报告类型, 以及查看和打印报告。

注意

完成后,请务必将校正表和方法一起保存。

有关校正概念的更多信息,请参见安捷伦化学工作站:了解您的 化学工作站。

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4

数据分析 数据浏览和序列数据再处理

数据浏览和序列数据再处理
化学工作站软件提供了两种快速浏览多个数据文件的方法。导航 表和批处理浏览,如下所述。

导航表
导航表显示了给定文件夹中的数据文件,并提供了在样品中导航 的便捷方式。可以使用导航表进行数据浏览或再处理序列。

选择数据浏览的 方法 单击“+”可了解样品的 详细信息 (信号等)

数据浏览工具

序列数据再处理工具

单击可获取有关导 航表的帮助

图 48

导航表,显示有序列运行的列

批处理浏览
批处理 – 用户从序列 (使用单 一用户定义的方法处理)中选 择的一系列数据文件 通过批处理浏览可以快速浏览序列或从序列中选择的分析物。可 以将批处理浏览用于定量分析也可用于定性分析。只要运行序列, 就会生成一个批处理文件 (扩展名为 .b) ,并保存于数据文件所 在的同一文件夹中。此批处理文件包含批处理浏览中数据文件的 索引。

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数据分析 批处理浏览

4

可通过批处理菜单调用批处理 (图 49) 。调用批处理时,可以选 择用于批处理的方法并分别选择所需的数据文件。
调用批处理文件,然后选择要包括在批处理 浏览中的方法和数据文件 预览并输出批处理的结果报告

对样品排序

查看与批处理相关的所有操作的日志

图 49

批处理菜单

调用批处理时, “批处理浏览”工具栏、批处理表和化合物列表会 自动显示。要获取帮助,请单击工具栏上的问号。
单击可获取帮助

化合物表 批处理表

图 50

“批处理浏览”工具栏、批处理表和化合物列表

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87

4

数据分析 批处理浏览

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5 报告
使用预定义报告 90 生成报告 90 报告类型 91 定义自定义报告 92 过程总结 92 报告模板示例 92 “报告版面设计”视图 93

您将在本章中了解能帮助您生成结果报告的概念。 与报告相关的更多概念,请参见以下两本手册: ? 安捷伦化学工作站:了解您的化学工作站 ? 安捷伦 LC 3D 系统化学工作站:了解光谱软件 对于任务相关的详细信息以及有关对话框和工具栏的特定信息, 请参见在线帮助。有关工具栏上所有按钮的说明,请于在线帮助 中双击用户界面参考,然后双击工具栏。

Agilent Technologies

89

5

报告 使用预定义报告

使用预定义报告
提供所分析样品的定性或定量信息的报告。您可以打印报告,在 计算机屏幕上显示报告或者将报告保存成文件。化学工作站软件 包括许多预定义的报告类型,您还可以为自定义报告生成新类型。

生成报告
在“数据分析”视图中生成报告的方法
从报告菜单中选择。

设定报告类型、 目标等。 编辑系统性能报告的参数 指定进行谱库检索的方式

图 51

报告菜单提供打印报告和设置报告属性的方法。

使用“积分”工具组或“校正”工具组中的报告工 具。可通过单击右侧按钮中的一个来访问这 些工具组。

指定报告

计算和预览 报告

计算和打印 报告

图 52

使用报告的工具

90

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报告 报告类型

5

系统适用性报告
使用报告菜单中的系统适用性,可以在分析前和分析过程中检查 系统性能。使用该报告类型,您可以设置保留时间的上限和下限、 峰高、峰宽、理论塔板数、分离度、谱库匹配、峰纯度以及校正 峰的其他属性。选择一种性能报告类型后,当任何参数超出指标 时,报告会将其指出。

注意

完成以后,请务必将报告参数与方法一同保存。

报告类型
化学工作站软件提供多种报告类型。以下两本手册中描述了大部 分报告类型: ? 安捷伦化学工作站:了解您的化学工作站 ? 安捷伦 LC 3D 系统化学工作站:了解光谱软件 有两种报告类型是 LC/MS 专用的,因此上述手册中没有讨论。 LC/MS — 包括: 数据文件中的表头信息 总离子流图 (可选) 每个积分峰表格形式和图形方式的光谱 解卷积结果 (使用可选的 Agilent LC/MSD Deconvolution & Bioanalysis 软件可得到) 。 LC/MS 定性分析 — 包括: 数据文件中的表头信息 总离子流图 (可选) 提取每个积分峰的离子色谱图和光谱。

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91

5

报告 定义自定义报告

定义自定义报告
化学工作站软件提供设置自定义报告格式的功能,可包括文本、 色谱图、表和公司徽标等自定义元素。文本可以是用户定义的文 本或者是存储在化学工作站中的信息,例如样品名称、操作员和 数据文件名。

过程总结
创建和使用自定义报告的全过程如下: 1 使用“报告格式”视图创建自定义报告格式,如第 93 页所述。 2 将自定义格式保存为报告模板。 3 通过调用数据文件并生成报告来测试报告模板。 4 将报告模板添加到可用报告类型列表。 5 将新报告类型添加到方法中并保存此方法。 有关详情,请参见在线帮助中化学工作站教程里的报告格式教程。

报告模板示例
化学工作站软件包括示例报告格式。它们位于 chem32\repstyle 文 件夹中。有关这些格式的说明,请参见 Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统快速入门指南。

92

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报告 “报告版面设计”视图

5

“报告版面设计”视图
“报告版面设计”视图 (如图 53 所示)提供了创建自定义报告模板 所必需的所有菜单和工具。
标题栏 报告格式工具 计算方法 报告模板 顶部工具栏

新区域菜单 报告区域

插入三角形
(单击蓝色三角形以激活 新区域 菜单 (三角形变 为红色)

方法列表 (化学工作站 资源管理器)

视图选择 命令行

图 53

“报告版面设计”视图提供了设置自定义报告的图形界面。 “文件”菜单 (如图 54 所示)提供了初始化、打开和保存报告模板 的功能。您还可以从顶部工具栏访问此功能。 (请参见图 53。 ) 添加新区域后,可以使用图 53 中显示的报告格式工具来添加文 本、色谱图和表。

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5

报告 “报告版面设计”视图

准备新报告格式 保存新报告格式 调用数据以测试新报告格式

预览带有调用数据的新报告格式 将新模板添加到可用报告类型

图 54

“报告版面设计”视图中的文件菜单

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Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统 概念指南

6 性能认证
认证 (OQ/PV) 视图 96 仪器验证 97 设置和运行仪器验证 98 可用的 OQ/PV 测试 100 验证日志 101 系统验证 102 概述 102 设置和运行系统验证 103

本章中,您将了解能帮助您验证系统中硬件和软件性能的概念。 化学工作站软件包括帮助您验证系统是否正常工作的测试和分析 方法。本章介绍了该功能。

Agilent Technologies

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6

性能认证 认证 (OQ/PV) 视图

认证 (OQ/PV) 视图
如果所配置的仪器 (例如 LC 的 Agilent 1100/1200 系列模块)支 持此功能,则化学工作站会包含一个附加视图,用于执行仪器认 证和诊断任务。有关详细信息,请参见在线帮助系统。

认证工具栏

任务选择菜单

图 55

利用“认证”视图,您可以验证系统性能。

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性能认证 仪器验证

6

仪器验证
仪器验证测试用于测试 LC/MS 系统的性能。要验证完整的 LC 系 统,您必须执行一系列测试。特定测试取决于您配置的 LC 模块。 测试可能包括: 进样器的交叉污染、线性和重现性 泵的梯度性能 柱温箱的温度准确度和精度 UV 检测器的噪音、漂移、线性和波长准确度 MS 检测器的线性 其他所需测试。 可以使用化学工作站来定义要运行哪些测试,以及每个测试的验 收标准。可以从安捷伦或实验室获得相应的标准,并使用软件指 定的样品瓶装载自动进样器。然后,化学工作站运行测试,计算 和打印报告,该报告将实际结果与指定的验收标准进行比较。每 个报告都包括一个通过/失败标识。

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6

性能认证 设置和运行仪器验证

设置和运行仪器验证
可以通过下列方式设置和运行仪器验证: 选择文件 > 新建或文件 > 打开以显示如图 57 所示的对话框。 (直到您使用文件 > 新建设置了第一个仪器验证,使用文件 > 打开才有可以打开的文件。 ) 使用图 56 中所示的验证工具栏。
切换日志的显示 验证 当前 序列

新建

打开 保存 编辑

运行

视图 报告

打印 报告

图 56

处理仪器验证的工具

设置新的仪器验证,打开现有仪器验证,或者编辑当前的仪器验 证后,都会显示图 57 中所示的“编辑仪器认证”对话框。

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性能认证 设置和运行仪器验证

6

可用测试

运行验证

选定的测试

设置参数 (为选定的测试)

图 57

使用“编辑仪器认证”对话框,您可以确定特定测试 及测试顺序。

图 57 中的设置按钮很重要。单击预定测试,然后单击设置,将显 示特定于该测试的对话框。在该对话框中,您可以: 设置测试的特定条件 (例如,测试哪一个检测器或通道流量) 建立测试的接受限值 单击帮助按钮可获取: 测试的常规信息 特定测试条件,例如所需标准和流动相。

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6

性能认证 可用的 OQ/PV 测试

可用的 OQ/PV 测试
化学工作站软件包含多种验证测试。部分测试为: 流量准确度和精度 进样精确度和交叉污染 线性响应 “选项”菜单 (如图 58 所示)确定了在给定时刻能使用的一组特定 测试。

显示验证日志

确定哪些测试 可用于选择

图 58

这些选项控制了您能选择用于仪器验证的测试类型。

在线帮助包括可用测试的完整列表,每个测试都有说明。要访问 这些信息: 1 打开在线帮助。 2 在左侧树视图的“目录”选项卡中,双击用户界面参比。 3 双击菜单结构。 4 双击认证 (OQ/PV)。 5 单击选项。 6 在右侧窗口中,单击增强型测试成套功能、毛细管测试成套功 能或制备测试成套功能的链接。 7 单击这些测试中的任一个可查看详细信息。

100

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性能认证 验证日志

6

验证日志
验证日志记录了与仪器验证相关的所有事件。日志中包含了一张 表,该表列出了所有事件以及事件发生的日期和时间。仪器验证 菜单为您提供了向日志中添加注释的机会。 可以从“认证”工具栏或者“选项”菜单打开验证日志,如图 56 和 图 58 中所示。

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101

6

性能认证 系统验证

系统验证
概述
系统验证测试使您可以验证您的化学工作站软件的操作是否正确 并且一致。您可以通过使用特定的方法重新处理数据文件,并将 结果与预定义的标准相比较来进行此验证。验证测试对于保证积 分及定量结果的完整性至关重要。您可以使用标准的安捷伦验证 测试,或使用其他方法和数据文件定义您自己的测试方法。安捷 伦验证测试是一个受保护文件,您无法从化学工作站软件之外更 改或删除该文件。 如果您的系统配备了 Agilent 1100/1200 系列二极管阵列检测器, 则系统验证测试还允许您测试检测器电子元件。

102

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性能认证 设置和运行系统验证

6

设置和运行系统验证
您可以从“系统认证”菜单或下图所示的系统验证任务选择窗格访 问此功能,以执行系统验证。

图 59

系统验证任务选择窗格。

可以使用定义测试功能来定义您自己的验证测试。指定一个数据 文件和一个方法文件,这两个文件都存储在受保护的寄存器中。 运行测试时,软件会使用测试方法处理数据、将结果与原始结果 进行比较,然后将结果指定为通过或失败。

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6

性能认证 设置和运行系统验证

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7 维护和故障排除
“诊断”视图 106 概述 106 仪器面板 107 工作日志 109 维护 110 早期维护预警 110 维护日志 111 维护过程 111 放空和抽真空 MS 112 诊断和解决问题 113 症状和原因 113 MS 诊断测试 114 解决问题 114

本章中,您将了解能帮助您维护和对 Agilent 6100 系列 LC/MS 系 统进行故障排除的概念。化学工作站软件中的“诊断”视图包括用 于维护和故障排除的软件工具。

Agilent Technologies

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7

维护和故障排除 “诊断”视图

“诊断”视图
概述
“诊断”视图提供以下功能: 了解系统问题的可能原因 执行诊断测试 抽真空及放空 MS 获取早期维护预警,这样能在问题发生前执行维护。 在维护日志中记录维护 获取系统中模块的详细信息,例如序列号、固件版本和操作小 时数。
标题栏 观测到的症状 可能的原因 原因信息簿

任务选择菜单 仪器面板

早期维护预警

视图选择

变量显示 命令行

图 60

“诊断”视图可帮助您对系统进行故障排除及维护系统。

106

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

维护和故障排除 仪器面板

7

仪器面板
顶端显示
“诊断”视图中心的仪器面板显示系统中的所有模块。 (请参见 图 61。 您可单击每个模块显示一个菜单,该菜单使您可以执行 ) 以下操作: 更新变量显示 - 在仪器面板下方的空间显示模块信息,例如序 列号、固件版本和 LAN 地址。 显示模块细节 - 显示模块的详细图解,如第 108 页上的图 62 所示。 显示模块测试 - 显示该模块的诊断测试列表,如第 114 页上 的图 66 所示。

图 61

仪器面板 – 顶端显示

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7

维护和故障排除 仪器面板

模块细节
更多菜单 切换至顶端 显示仪器面板 工作日志 调谐 电子元件 真空 获取子模块的 详细信息

图 62

仪器面板 – MS 的模块详细信息。

您在图 62 中显示的视图中移动鼠标时,只要光标从指针变成一个 小手,您就可以单击以显示能访问子模块详细信息的菜单。例如, 可以单击涡轮分子泵的图标来查看真空读数,或者单击四极杆的 图标来查看其温度。还可以单击右侧白色区域中的图标来显示这 些图标的菜单。

108

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

维护和故障排除 工作日志

7

工作日志
“诊断”视图提供对许多日志的访问,这些日志有助于故障排除及 维护。 错误日志 – 查看模块的最新错误 运行日志 – 查看最新运行的开始和停止时间 维护日志 – 查看最新维护事件。有关此日志的详细信息,请参 见第 111 页的“维护日志” 。 日期更改日志 – 查看日期更改 您可通过几种方式访问这些日志: 文件菜单 (文件 > 打开 > 日志) 日志图标,如第 108 页上的图 62 所示 (单击该图标,然后选 择更新变量显示) 顶部工具栏上的打开图标。

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109

7

维护和故障排除 维护

维护
对 LC/MS 系统进行正常维护有助于确保分析的质量,并避免因故 障引发的高额维修费和意外的停工时间。化学工作站软件包括能 帮助进行定期维护计划的功能。

早期维护预警
早期维护预警 (EMF) 将警告您进行必要的维护,这 样您能防止问题发生。该软件允许您使用过去的经验 来预测需要每种维护的时间。可以在“诊断”视图中输 入维护间隔的限值。 在“方法和运行控制”视图以及“诊断”视图中,当达到维护限值时, 绿色的 EMF 复选标记将更改为黄色的问号。这时,您可以单击“ 诊断”视图中的 EMF 图标以查看 EMF 信息板中的限值,确定需要 服务的模块。该模块的限值以黄色突出显示。

图 63

EMF 信息簿

110

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

维护和故障排除 维护日志

7

维护日志
维护记录有助于确保系统保持极好的运转状况,当您有多名操作 员时维护记录尤其重要。化学工作站维护日志提供了一个方便的 地方记录您对 LC 模块或 MS 执行的任何维护。 可以通过日志图标(如第 108 页上的图 62 所示)访问维护日志。 (单击该图标,然后选择维护日志条目。 然后,通过化学工作站 ) 软件手动输入信息。 维护日志并不存储在计算机磁盘上,而是存储在 LC 或 MS 模块的 内存中。这样,如果您将模块移动到其他系统,维护记录也随着 模块移动。

维护过程
当您需要执行维护时,可以在 Agilent 6100 系列单四极杆 LC/MS 系统维护指南 或者 LC 模块的手册中查找常见过程的说明。 您可以通过“诊断”视图的维护菜单实施某些维护过程,例如 DAD 检测器的波长校正。

图 64

维护菜单包括用于 MS 和 LC 模块的软件驱动维护任务。

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

111

7

维护和故障排除 放空和抽真空 MS

放空和抽真空 MS
放空
有时候,您需要对位于真空系统内的 MS 组件执行维护。此类维 护的示例包括更改电子倍增器和清洗离子光学元件等。对这些组 件执行维护之前,您需要先放空 MS。放空会将真空置于受控制的 方式。 可以使用“诊断”视图中的维护菜单启动放空。 (请参见第 111 页上 的图 64。 软件会执行一系列步骤安全地放空仪器。使用一个对 ) 话框,您可以查看放空的进度并在需要时反转此过程。

小心

请勿只通过关闭 MS 上的电源按钮来放空仪器。这会导致涡轮 分子泵过度磨损。

抽真空
完成维护后,您需要抽真空系统。抽真空时,真空泵将以正确的 顺序打开,在真空状态下安全带动系统运转。只需打开 MS 电源 开关就可进行抽真空,并以正确的顺序启动事件。通过从维护菜 单访问一个对话框,您可以监视并反转抽真空过程。

放空和抽真空的频率
有关将 MS 置于待机模式的详 细信息,请参见 Agilent 6100 系
列四极杆 LC/MS 系统快速入门 指南的“基本操作”部分。 通常,应将 MS 置于真空,即使在不使用时。重复进行放空和抽 真空会导致涡轮分子泵不必要的磨损。保持系统处于真空时,您 需要维护清洁度级别,敏感分析需要此清洁度。如果有一段时间 不打算使用 MS,请将其置于待机模式而不是将其放空。

112

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

维护和故障排除 诊断和解决问题

7

诊断和解决问题
症状和原因
图 65 显示能帮助您对仪器问题逐步进行故障排除的软件组件。 1 对于失败的 OQ/PV 测试,单击 OQ/PV,或者对于您在分析中 观察到的症状,单击分析。 2 选择特定的症状。 3 可能原因的列表会显示。选择其中一个原因。 4 备忘录会显示仪器数据和可以执行用来确认或反驳该症状原因 的测试。单击开始以显示测试的对话框。 5 单击开始可启动测试,单击说明可查看对测试的详细说明。
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5

图 65

发现仪器问题根本原因的过程概述

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7

维护和故障排除 MS 诊断测试

MS 诊断测试
有许多预编程的诊断测试,可用于系统中的每个模块。通过单击 仪器面板中的模块图标,然后选择显示模块测试,可以显示每个 模块完整的测试列表。图 66 显示 MS 的测试。

图 66

MS 诊断测试

解决问题
当您已经诊断出问题,需要解决此问题时,可以在 Agilent 6100 系列单四极杆 LC/MS 系统维护指南 中找到常见过程的说明。较严 重的问题可能需要致电安捷伦客户工程师以获取服务。

114

Agilent 6100 系列四极杆 LC/MS 系统概念指南

www.agilent.com

内容提要
概念指南 简要介绍了
Agilent 6100 系列 四极杆 LC/MS 系统的信息,以帮 助您了解硬件和软件的工作 原理。

? Agilent Technologies, Inc. 2009 - 2010
中国印刷 第 3 版, 2010 年 4 月

*G1960-97072*
G1960-97072

Agilent Technologies


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