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实验10 细菌菌落总数(CFU)的测定


细菌菌落总数(CFU)的测定

大连理工大学环境与生命学院

实验目的

1.学习并掌握细菌分离的原理与方法 2.掌握细菌菌落总数的测定

实验仪器

高压灭菌锅

实验仪器

培养箱

洁净工作台

/> 实验原理
细菌总数主要作为判定被检水样污染程度的 标志。 在水质卫生学检验中,细菌菌落总数(CFU)是 指lmL水样在营养琼脂培养基(LB培养基)中,于 37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。 它是有机物污染程度的指标,也是卫生指标。

实验步骤
1 取样 1. 用无菌锥形瓶到现场取一定量的活性污 泥或土壤或湖水,迅速带回实验室。

实验步骤
2.稀样水样

实验步骤
3 接种 3.
如上图,从试管中分别吸取1mL菌液于相应编 号的培养皿内。 加热融化培养基,当培养基冷至45℃左右时, 向培养皿中倒入培养基,然后将其平放在桌上,顺 时针和反时针来回转动培养皿,使培养基和菌液 充分混匀,冷凝后即成平板,倒置于37℃培养箱 内培养24h。

实验步骤
4.计菌落数 将培养24h的平板取出计菌落数。

菌落计数及报告方法

用肉眼观察,计平板上的细菌菌落数。记 下同一浓度的三个平板的菌落总数,计算平 均值,再乘以稀释倍数即lmL水样中的细菌菌 落总数。

菌落计数及报告方法
各种不同情况的计算方法如下:
1.首先选择平均菌落数在30-300之间者进行计算, 当只有一个稀释度的平均菌落符合此范围时,则 以该平均菌落数乘其稀释倍数报告之(例1)。

菌落计数及报告方法
2.若有两个稀释度的平均菌落数均在30-300之间, 则按两者之菌落总数之比值来决定,若其比值小 于2应报告两者之平均数,若大于2则报告其中较 小的菌落总数(例2及例3)。

3.若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按
稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之 (例4)。

菌落计数及报告方法
4.若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀 释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(例 5)。 5.若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间, 则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报 告之(例6)。

菌落计数及报告方法
6.在求同稀释度的平均数时,若其中一个平板上 有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无 片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。

若片状菌落约为平板的一半,而另一半平板上 菌落数分布很均匀,则可按半平板上的菌落计数, 然后乘以2作为整个平板的菌落数。

稀释度选择及菌落总数报告方式

思考题

在用平板培养微生物时,平板为什么倒置 放在培养箱中?


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