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减蛋综合征病毒(EDSV)的分离与鉴定


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中 采 22 第2g ;   圈 拿 0 年 4t 2 0   ̄ 0

CnPl o4o00   haot V.,..0 i  uy 1 N22 2 r 2

减 蛋综合 征病 毒 {DS 的分 离与鉴定★ E V)  
王雪 敏 ( 郸 农 业 高等 专科

学校 动 科 系, 邯 河北 永年 0 75 ) 5 10 



要 : 河 北邯 郸 某鸡 场 10 未经E 疫 苗免 疫 的 、 从 9d Ds 突然产 蛋 下 降并 出现 大量软 壳蛋 、  

无 壳 蛋 的鸡 群 中分 离到 一株 病 毒 , 经理 化 特 性 鉴 定 、 抗 D0— Ls 测 、 单 tE IA检 DNA探 针 斑 点 杂  交 , 定 分 离到 的病毒 为E V。 经 限制性 核 酸 内切 酶 酶 切 分析 , 明 分 离株 与E V标 准株  确 DS 表 DS
A 2 属 于 同一 个基 因型 。 V17  

关键 词 : 蛋 综合 征 病毒 ; 离 ; 定  减 分 鉴

Ioain a d I e t c t n o   g Dr p S n r me Vi s E V) s lt   n   d n i a o   fEg   o   y d o   r ( DS   o i f i u
Wa g Xu m n D pr n o  nm lS in e a d T c n lg  f n   e i ( e at t fA i a  cec  n   eh ooy o  me  
Ha d n Agiut rlColg , n na   b i 0 7     n a   r l a  le e Yo g in He e  5   0) c u 1 5

Ab t a t On  vr s sr i  g  s l td fo s r c : e i   t n wi ioa e   r m 1 0 d y o d p u t . h   n e td c i k n   h w d e g d o   i   f— u a s 9 一 a - l  o l y T e i fc e   hc e s s o e   g   r p w t s t   r h o s e l d a d h l e s e g .   d n i i g p y io h mia p o e t s u i g Mc   t EL S n d h l   n  s el s   g sBy i e t yn   h sc c e c l rp ri , s   Ab Do - I A a  DNA  r b  Do - it  e l f e n po e t bo ,

h   t i  a  d ni d a  E do   y do   i te s an w s ie t e   s a   g   rp sn rme v s ( D V) N s o  e i lt w r  M  ̄d b   s g df m t r i f n u r E S . A   f t   s a   ee a y   y u i   ie n  D h o e n n
rsrcin n o u lae .h  rs l h w d ha te ioae o l b ln  t te a  g n tp  a te tn ad t n e t t  e d n ce s s e e ut o e  t t h   s lt c ud eo g o h  sme e oy e s h  sa d r sl   i o T  s  
AV1 7  2. Ke   r s e   r p s n r me vr s i l t n;d n i c to   y wo d : g d o   y d o   i ; ai i e t a n e o s o i f i

19 年 ,河 北 邯 郸 某 个 体 养 鸡 户 的 10 只  99 10 10 的“ 兰褐 ” 鸡 , 9d 海 蛋 出现 突然 性产 蛋 下降 , 产蛋 

及 无 壳 蛋 鸡 的输 卵 管狭 部 , 灭 菌 生 理 盐 水 冲 洗  用 3 , 克 组 织 加 2  生 理 盐 水 , 浆 后 冻 融 3 , 遍 每 n 匀 次  

率 由9 . 35 %降 至 5%左 右 , 壳 颜 色 消退 , 出 现  6 蛋 并 大量 软 壳 蛋 、 壳 蛋 、 壳 蛋 及 畸 形 蛋 , 没 有 其  无 沙 但
他 明显 的临 床症 状 。 经调 查 该 鸡群 未 经E 疫 苗  DS

经3 0rmi离 心 1mi , 集上 清 液 , 毫 升 液体  50/ n 5 n收 每 中加 入 青 霉 素 20 I 链 霉 素 20 p , 4C作 用  00U、 00. 置  ̄ g
4 , 检 阴性 者备 用 。 h菌   11 .. 病 料 的接 种 2 将 处 理好 的病料 ,经 尿囊 腔  分别 接种 1 d 0 鸭胚 和鸡 胚 ( . / ) 每 代 接 种 5 1 mL 胚 , 0  

接 种 。 排 除饲 养 管 理 等 方 面 的 因 素 , 为 减 蛋 综  疑
合 征 ( DS , 集病 料 进 行 了病 毒 分离 鉴 定 , 步  E )采 初 确定 为 E V,命名 为Hd 。E V 属 于 腺 病 毒  DS l DS 隶 科, 目前 世 界各 地 分 离 到 的毒 株 属 于 同 一个 血 清  型 ,但 用 限 制性 核 酸 内切 酶 可 将 其 分 为 3 基 因  个
型。  

个, 盲传 3 , 获培 养 10 后 的 尿囊 液 , 08 代 收 2h 用 . %鸡 
经 细 胞 测 定 其 血 凝 性 。 同 时用 兔 抗 E V高 免 血  DS 清 ( 纯 化 的 E V免 疫 家 兔 制 备 , 效 价 为  用 DS HI 11g ) 行血 凝 抑制 ( ) 验 。 2o 2 进 HI试   11 病 毒 的增 殖 .3 . 取血 凝 ( A) 度最 高 者 , H 滴 接  种 1 d 胚 尿囊 腔 , 养 10 后 收 获尿 囊 液 。 0鸭 培 2h  

1 材 料 与方 法 
11 病 毒 的分 离 .  

11 病 料 的采 集 与处 理 .. 1

病料 采集 自产 软壳 蛋 

1 病 毒 的 鉴 定  . 2 1 . 血凝 谱 的测定 .1 2 取增 殖 的病 毒 液 ,分别 用  鸡 、 、 、 、 鼠、 、 羊、 鸭 鹅 鸽 大 马 绵 山羊 、 、 红 细 胞  牛 猪 按 常规 方 法 进 行 HA试 验 , 时用 兔 抗 E V高 免  同 DS

河 北 省 科 技 厅 攻 关 项 目( DS 快速 检 测 方 法 研 究) E V 的 
部 分 内容 。 目鳊 号 :0 2 4 6 项 0 2 00  
收 稿 日期 : o 2 O 一 O   20一 5 2


1 —  2

 

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⑨ 中 采 0 年 2 第0 圈 禽22 第4 2 0 卷  
27 单 抗Do- L S 检 测 结 果  . t E IA 分 离株 及AV1 7 产生 明 显 的 显 色 斑 点 , 2可 而 
表 2  

C ia 尸   r   o 2 , . 02 0   hn 0 y V L 4No2 . 0 2

限 制 性 酶 切 片 段 数 目及 分 子 ■ 
:  
A   I j   ( ’

C L E O病 毒 和 犬腺 病 毒 不显 色 。见 图2  。
E o 【 c R
B mH 【 a H id - n  

苎   堡竺.苎! 主  
D   E   F   G   H  I   J  

4  
4   1  0

Ps 【 t   S a m j【

9   4  

1  

2  

3  

4  

3 讨

论 

图 2 Do— L S 检 测 结 果    t E IA
I分 离 株 2AVI7株 3CE O 病 毒 4犬 腺 病 毒  . . 2 . L .

分 离 株 可 于 鸭胚 、 胚 成 纤 维 细 胞 、 胚 肝  鸭 鸡 细 胞 、 胚 肾 细胞 中 繁 殖 , 能 于 鸡 胚 及 鸡 胚 成  鸡 不 纤 维 细胞 中繁 殖 ; 抗 Do— L S 单 t E IA试 验 结果 为 阳  性 ;可 与 E V DNA 片 段 探 针 杂 交 以及 电镜 观  DS  

28 DNA探 针 斑 点 杂 交结 果  .  

标 记 的核 酸 探 针 可 与 分 离 株 及 A 2 V1 7株 

DNA 产生 明显 的杂 交 斑 点 ,但 与 C L 病 毒 及  EO 犬腺 病 毒 的 DNA 不杂 交 。见 图 3  。

察 结果 表 明 , 分离 的病毒 为 E V。限制性 内切  所 DS
酶 酶 切分 析 初 步 表 明 , 分离 株 与 标 准株 A 2 V1 7属 

于 同 一 基 因 型 。所 分 离 病 毒 的 基 因文 库 构 建 、 序  列 分 析 与 国 内 其 他 分 离 株 的 同 源 性 比较 有 待 进 


步 研究 。  

1  

2  

3  

4  

参考 文 献 
I B. . l e . sae  f p ut (e t  d o ) Iwa s t u i   W Ca kDi ss o   o l y tnh e f n . n e r i o   t e n— a   
v ri  p es 1 9   e t s y r s, 9 7

图 3 斑 点 杂 交 结 果 
I分 离株 DNA .   3CE O 病 毒 DNA . L   2A 2 .V17株 DNA   4犬 腺 病 毒 DNA  .

2 徐 宜 为 . 疫 检 测 技 术 ( 二 版 ) 科 学 出 版 社 .9 1 免 第 , 19 

29 限 制 性 核 酸 内 切 酶 酶 切 分 析 结 果  .  

3 王 雪 敏 , 明 球 , 宝 祥 等 Do— LS 检 测 减 蛋 综 合 征 病 毒  郑 蔡 t E IA

分 离 株 与 AV1 7株 经 限 制性 核 酸 内切 酶 酶  2 切后 的 片段 数 及分 子 量相 同。 表 2 说 明二 者 属  见 。 于 同 一基 因型 。  

的 研 究 . 国 畜禽 传 染 病 ,9 82 ( )3 "9 中 19 ;O I :8-   3
4 王 雪 敏 , 明球 , 宝 祥 等 . 高 辛 标 记 的 核 酸 探 针 检 测 E   郑 蔡 地 DS

病毒的研究. 畜牧与兽医.9 ; ()1 "2  1 83 3 : 81 9 0 2 9

I  

( 上接 第 1 页)2 1 AHI 0 18 1 5. %, 值> . 8 。说 明右 心室  9 4
重量 占全 心 室 重量 的 比值 越 大 , 腹水 量 越多 , 液  血 中液体成 分 越少 。这与肺 血流 量增 大 、 细胞数 增  红
加、 血液 粘稠 、 血 管壁肌层 增厚 、 肺 肺血 管管 腔狭 窄 

示 , 生产条件下 , 在 日粮 添 加 1 %的L —Ar 与 添 加  g 03 .%的Na O  HC ,降 低 肉鸡 腹水 综 合 征 病 死 率 的 
效 果相 近 。  

参 考文 献 :  
I 王 俊 东 .肉 鸡 腹 水 综 合 征 及 肉 鸡 猝 死 综 合 征 .畜 牧 与 兽 医 .    
2 0 3 5) 3 0 0, 2( : 》 5  
2   W i e n R F, r y YK. e to a d o r p i   e au i   o   d ma   Kib   Elc r c r i g a h c v lt on f

使 肺 动脉 压 升 高 , 引起 右心 室 扩 大 、 厚 和功 能 衰  肥 竭, 体循 环 回流 受阻 而发生 腹水 的假说相 一致 。   3   L r作 为合 成 NO的前 体 物 质 添 加 到 肉鸡  . 2 —A g
的 日粮里 , 使肺小 动脉 舒 张 , 解 了肺 动脉高 压 , 缓 减  少 了腹水 综合征 的发 生 。本试 验证 明 , 种作 用不  这

b o e  d rn  t e n e  o   u mon r  h p re so  i iit d y r i r u g h  o s t f p i ls i ay y e t n i n n t e  b   a
u i t rl p l n r   a r   o c u i . o lr   S in e 1 9 7   nl ea a   u mo a y me y c ls on P u t y c e c , 9 5, 5:
4 7 0  ̄41   6

但在 环境 低温诱 发 的P H、 及阻塞 单侧肺 动 脉 引 S AS  
起 的P 试验 中有 效 , HS 而且 在生 产条 件下 自然发 生  的 肉鸡 腹 水综 合 征 中同样 有效 。 日粮 中添 ̄ 1 1%的  1 L r可 以很好地 预 防因腹水 综合 征 引起 的死亡 。 —A g  

3 W ie n   d ma  R F, s i Ima M , r y YK , t 1 u p e i K b   e a. p l me tl S n a L—a g — r i 

i e t u t s u m n r   y me so   y r m   n n n   a t n ae   P l o a y h pe n i n s nd o e i   b o e s e r i r. l  
P u t   c e c , 9 5, 4: 2 " 3   o l y S in e 1 9 7 3 3- 0 r - 3 4   W id n ma  R F, r y n i K b  YK. r i Ca d o—p l u mon r  f c o  d rn   a y un t n i u g i

33 酸 中毒 可 以 引起 肺 小 动脉 收 缩 , 碱 中毒 可  . 而 以使肺 小 动 脉舒 张 。 因此 , 添加 适 量 的Na HCO  可  以舒 张肺 小 动 脉 , 降低 肺 动 脉 压 , 防 肉 鸡 腹 水  预
综 合征 的发 生 。这 与 No的作 用 相 似 。本 试 验 显 


a ue c t unl tr l c l t n f t e u m o a y a t r  i  b ol r fd i e a o c u o  o   h  p l n r   r ey n r i s e   a i e

de   o ti g n r lo  i  l e o 唱i n — LP ut   it c namn   oma rhg e h fa n e HC .o l y s   h v i r

S n , 9 , : 8"6   c c 1 67 1 71 2 i e 9 5 5 -0

口 

1 —  4


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