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等电点


等电点
中文名称: 等电点 英文名称: isoelectric point 定义: 蛋白质或两性电解质(如氨基酸)所带净电荷为零时溶液的 pH,此时蛋白 质或两性电解质在电场中的迁移率为零。符号为 pI。 应用学科: 生物化学与分子生物学(一级学科);氨基酸、多肽与蛋白质(二级学科) 简介 等电点(pI,isoelectric point)

等电点

:在某一 pH 的溶液中,氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度 相等,所带净电荷为零,呈电中性,此时溶液的 pH 称为该氨基酸的等电点。 两性离子所带电荷因溶液的 pH 值不同而改变,当两性离子正负电荷数 值相等时,溶液的 pH 值即其等电点。 当外界溶液的 pH 大于两性离子的 pl 值,两性离子释放质子带负电。 当外界溶液的 pH 小于两性离子的 pl 值,两性离子质子化带正电。 两性与等电点 氨基酸具有氨基和羧基的典型反应,例如氨基可以羟基化、酰基化, 可与亚硝酸作用;羧基以成酯或酰氯或酰胺等。此外,由于分子中同时具 有氨基与羧基,还有氨基酸所特有的性质。 氨基酸分子中既含有氨基,又含有羧基,所以氨基酸与强酸强碱都能 成盐,氨基酸是两性物质,本身能形成内盐。

氨基酸的高熔点(实际为分解点)、难溶于非极性有机溶剂等性质说明 氨基酸在结晶状态是以两性离子存在的。 在水溶液中,氨基酸二偶极离子即可以与一个结合成为正离子,又可 以失去一个成为负离子。这三种离子在水溶液中通过得到或失去互相转换 同时存在,在 pH 值达到等电点时溶液处于平衡。 等电点不是中性点,不同氨基酸由于结构不同,等电点也不同。酸性 氨基酸水溶液的 pH 值必然小于 7,所以必须加入较多的酸才能使正负离子 量相等。反之,碱性氨基酸水溶液中正离子较多,则必须加入碱,才能使 负离子量增加。所以碱性氨基酸的等电点必然大于 7。 各种氨基酸在其等电点时,溶解度最小,因而用调节等电点的方法, 可以分离氨基酸的混合物。 氨基酸形成内盐 氨基酸的晶体是以偶极离子的形式存在。 这种偶极离子是分子内的氨基与羧基成盐的结果,故又叫内盐。 核酸的等电点比较低。如 DNA 的等电点为 4~4.5,RNA 的等电点为 2~ 2.5。
中性氨基酸的羧基解离程度大于氨基,故其 pI 偏酸,pI 值略小于 7.0;酸性氨基 酸的羧基解离程度更大,pI 明显小于 7.0;碱性氨基酸的氨基解离程度明显大于羧基 等,故其 pI 大于 7.0;在一定的 pH 条件下,氨基与羧基的解离程度相等,静电荷为 零,此时溶液的 pH 即为其等电点。

蛋白质等电点测定方法
●方法:平板等电聚焦 ●原理:蛋白质分子在含有载体两性电介质形成的连续而稳定的线性 pH 梯度中进行电泳。但不自是按照等电点不同被分离。 ●仪器:Bio-Rad Model 111Mini IEF Cell ●样品要求: ●液体:浓度>3mg/ml;体积>200ul;固体:质量>200ug ●样品纯度>90%;含盐量<3 0mM;分子量:一般要求大于 1000Da ●常见影响测试情况: 1、蛋白质纯度不足 2、含盐量过高 3、蛋白质分子量太小,导致无法固定染色


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