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疟原虫镜检技术操作规范 2


疟原虫镜检技术操作规范
疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方 法,具有严格的操作程序和技术要求,为了统一方法、规范程序、提 高血检质量,特制定本操作规范。 一、血片制作 (一)所需器材 载玻片 玻片 3 张(1 张作载玻片,1 张作推片,1 张作采血后滴于 玻片备血用) 采血针 采用一次性采血针。 玻片盒 存放 50 或 100 片玻片的木质或塑料盒

。 皮肤消毒液、棉签或酒精棉球 75%的酒精、安尔碘 、碘伏等皮肤 表面消毒剂。 记号笔 用于玻片上书写血检病人基本信息。

(二)操作步骤 1、载玻片基本信息登记 取 1 张载玻片,首先用目测法将载玻片

从右 (磨砂处为右) 到左等分成 6 格, 接着用记号笔在第 1、 2 格即 (磨 砂处)写下血检病人基本信息:编号、姓名、制片日期 结果(镜检结 束后补写) 。载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。如图 1

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2、采血 采血部位为手指末端或耳垂,婴儿可从拇趾或足跟取血。用消毒 剂消毒取血部位皮肤后, 以一次性采血针迅速刺入取血部位 1~2mm 深, 约挤出 1-2 滴血,滴于玻片上(以备涂制厚薄血膜用) 。 3、涂制血膜 用推片的左下角刮取玻片上的血液 4~5μl,涂于

载玻片的第三格(靠近磨砂侧) ,由里向外一个方向旋转 2~4 圈,涂 成直径为 0.8~1.2cm 的圆形厚血膜;再用该角沾取血液 1~1.5μl 血 置于载玻片的中心点即(第四格前缘中点) ;接着用干棉球或卫生纸擦 净推片角上的血渍;最后用推片的下缘置载玻片的中心点(1~1.5μl 血液处) ,当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约 2cm 宽时,使两 玻片保持 25°~35°角,从右向左迅速推成舌状薄血膜,即(薄血膜 涂在第 4 格前缘至第 6 格中部) 。如(图 1) 、 (图 2)

疟原虫镜检涂制血膜方法示意图 2 薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳, (直观透 过玻片能清晰看到报纸上的字) ;厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见 到 5~10 个白细胞为宜。 二、固定 (一)所需器材 1、甲醇
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2、器具 玻璃棒、吸管 (二)操作步骤 薄血膜固定 薄血膜晾干后,用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲

醇平铺于薄血膜上,起固定薄血膜作用, (注意不能固定厚血膜) 。 三、染色 (一)所需器材 1、吉氏染液(原液) 2、器具 染色用的盘子、染色缸、烧杯、吸管若干。

3、染色及冲洗用水 蒸馏水、冷开水、自来水、pH7.2 缓冲液。 (二)操作步骤 单片染色 单张血膜染色可取蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水或 pH7.2 的缓冲液 1ml 加入吉氏染液原液 1-2 滴, 混合均匀后浓度约为 2~ 5%的吉氏稀释液,均匀滴在厚、薄血膜上,染色 20~30 分钟。 注意:1、浓度约为 2~5%的吉氏稀释液现配现用;2、新鲜厚血 膜充分干燥后才能染色;3、厚、薄血膜一起染色。 多片染色:用吉氏染液成批血膜染色时,将血膜朝一个方向插入 染色缸中, 或每对玻片血膜朝外, 背靠背插入染色缸中, 倒入新配的 2~ 5%吉氏染液(2ml 吉氏原液与 98ml 蒸馏水缓冲液混匀) ,浸没厚薄血 膜,染色 30 分钟后,向染色缸中注入 pH7.2 缓冲液或自来水,直到溢 出,除掉染液表面上的浮渣,将染色缸中残余的染液倾出,加入新水, 反复冲洗 2~3 次,然后取出玻片,将血膜朝下插在晾片板上干燥。 四、冲洗 染色后不要将玻片上残余染液直接迅速倒掉,应将玻片连同玻片
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上的染液一起放在水中轻轻漂洗,或沿玻片及染色缸边缘加水使染液 表层溢出并轻轻冲洗,以免染液色素颗粒沾污血膜。 五、镜 检 (一)器材 1、显微镜 单、双目显微镜均可,目镜一般以 5X 为宜(有的用

10X) ,物镜必须用油镜(100X) 。 2、镜油 3、擦镜纸 4、二甲苯或酒精乙醚 (二)操作步骤 1、 血膜上滴加镜油 2、镜检 滴一滴镜油在血膜上, 再将血片置载物台上。

用目镜 5×和物镜 10~40×低倍镜检下找到血膜,再将

物镜转换成油镜(100×) ,查找疟原虫,吉氏染色较好的血膜,红细 胞呈淡红色,嗜酸性细胞的颗粒呈鲜红色,淋巴细胞及疟原虫胞浆呈 蓝色或淡蓝色,白细胞的核呈紫蓝色,疟原虫的核呈红色。 3、观察血膜的方法 镜检时从血膜的一端开始,自上而下,自左

而右,逐个视野顺序查看。发热病人血片至少要查完 200 个视野以上, 普查带虫血片则需看完全片,方可报告结果。镜检疟原虫一般只查厚 血膜,薄血膜作为疟原虫的分类定种。 5、结果报告 结果报告分阳性和阴性,阳性者至少要查见一个典

型疟原虫(并需鉴别虫种和期别)方可确定;以查完整个厚血膜,未 查见疟原虫者判为阴性。 五、注意事项
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1、染色前血膜的保存 新制作的血膜应防止污染和苍蝇吸食血膜,新鲜厚血膜放置时要 保持水平,直到充分干燥后可不溶血直接染色。血膜放置时间,夏天 不宜超过 48 小时,冬天不宜超过 72 小时,否则厚血膜会自然固定而 不能溶血,影响镜检。不能即时染色的血膜,可先用甲醇固定薄血膜, 将厚血膜溶血,晾干后包好,放入干燥器中,置于冰箱内保存。临用 时,将干燥器放置室温中 1~2 小时后取出血片。 2、患者资料应登记详细,确保能追踪随访,个案调查、登记、 统计等资料应有专人负责保管。 3、镜检人员应加强自身防护,操作戴手套、穿工作服。 4、镜检室应保持环境及器具的整洁,试剂和染色用具要顺序放 置在固定的操作台上。 5、显微镜用毕,取擦镜纸沾取二甲苯或酒精乙醚擦拭油镜头清 除镜油,并清洁载物台及目镜。显微镜保存做到防尘、防潮、防霉。 6、医疗垃圾按医院废物管理相关规范进行处置。

疾病预防控制中心 2013 年 3 月 15 日

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疟原虫镜检操作步骤示意图
疟原虫镜检

血片制作

染色

镜检

载玻片基本信息登记

2%吉氏染液 (稀释液 PH 7.2)

镜油

采血 (耳垂或手指)

染色 (30 分钟)

厚血膜

涂制厚薄血膜

轻轻冲洗

薄血膜定种

薄血膜固定 厚血膜充分晾干

晾干

镜检结果及登记



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