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实验 柱色谱--亚甲基蓝与荧光黄的分离


实验

柱色谱

--亚甲基蓝与荧光黄的分离

一 实验目的
? ? 学习并掌握色谱法的原理及其应用。 ? ? 学习并掌握柱色谱的实验操作技能。

二实验原理
? 色谱法亦称色层法,层析法等,是分离,纯 化和鉴定有机化合物的重要方法之一。 ? 色谱法的基本原理是利用混合物各组分

在某 一物质中的吸附或溶解性能(即分配)的不 同,或其它亲和作用性能的差异,混合物的 溶液流经该种物质,进行反复的吸附或分配 等作用,从而将各组分分开。

色谱分离法的分类 (按操作条件的不同)
? 气相色谱 ? 液相色谱 ? 柱色谱 ? 薄层色谱 ? 纸色谱 ? 流动相:气体、液体、超临界流体 ? 固定相:液体、固体

色谱分离法的分类 (按组分在固定相中的作用原理不同)

色谱法的应用
? 色谱法在有机化学中的应用主要包括以下 几个方面: ? (1)分离混合物 ? (2)精致提纯化合物 ? (3)利用比移值(Rf)鉴定化合物 ? (4)跟踪反应进程

柱色谱
? 柱色谱常用的有吸附 色谱和分配色谱类。 前者常用氧化铝或硅 胶为吸附剂。后者以 硅胶,硅藻土和纤维 素为支持剂,以吸收 大量的液体为固定相

柱色谱
? 当加入的洗脱剂流下时, 由于不同化合物吸附能 力不同,因而以不同的 速度沿柱向下流动,继 续洗脱时,吸附能力弱 的组分随溶剂首先流出。 在连续洗脱过程中,不 同组分或不同色带就能 分别收集,从而达到分 离纯化的目的。

柱色谱
? 1 吸附剂 ? 常用的吸附剂:氧化铝,硅胶,氧化镁,碳酸钙, 活性炭 ? 或纤维素粉。 ? 选择吸附剂的首要条件:不与被分离物或展开剂 发生化学反应。 ? 吸附能力与以下几点有关: ? (1)吸附剂颗粒大小 ? (2)吸附剂含水量

柱色谱
? ? ? ? 2 溶剂 通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活 性等来考虑。 先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中,从柱 顶流入柱中,依次增大溶剂的极性,将不同化合物依 次洗脱。 ? 常用洗脱剂的极性: ? 石油醚< 环己烷< 四氯化碳< 甲苯< 苯< 二氯甲 烷< 氯仿< 乙醚< 乙酸乙酯< 丙酮< 乙醇<甲醇 < 水< 乙酸

三实验步骤及注意事项
? (1)取一支色谱柱,在柱子的收缩部塞一小 团脱脂棉花, ? 注意松紧要适度。然后在棉花上铺一层粗硅 胶或石英砂。 ? (2)将色谱柱垂直固定在铁架台上,往柱内 加适量70%乙 ? 醇溶液,打开活塞,赶走气泡。

三实验步骤及注意事项
? (3)再向柱中倒入适量70%乙醇溶液,打开活塞, 控制滴 ? 速为1滴/秒,用小锥型瓶承接,同时通过漏斗慢慢装 ? 入5gAl2O3,使其逐渐沉入底部。 ? 【在装吸附剂的过程中,应用质软的物体如试管夹、 ? 吸耳球等轻轻敲击柱身,促使吸附剂装填紧密,排除 ? 气泡。最终应使吸附剂的上端平整,无凹凸面。】

三实验步骤及注意事项
? (4)加完吸附剂后,在吸附剂上再盖一张直 径大小合适的小滤纸。 ? (5)当溶剂的液面刚好流至滤纸面时关闭二 通活塞,立即用移液管加入1mL亚甲基蓝和荧 光黄的乙醇混合液,尽量免待分离混合液粘附 在柱的内壁上。

三实验步骤及注意事项
? (6)打开二通活塞,等柱内的溶剂恰好流 到滤纸面时,关闭二通活塞,向柱内加入 70%乙醇,打开二通活塞进行洗脱。 ? (7)用锥形瓶收集蓝色的亚甲基蓝溶液。 【洗脱时切勿使溶剂流干! 】

三实验步骤及注意事项
? (8)当蓝色溶液收集完后,等柱内的70%乙醇 溶液恰好流到滤纸面时,关闭二通活塞,加入适 量2%氨水作为洗脱剂。打开二通活塞收集黄绿 色的荧光黄溶液,直到其完全被洗出。 ? (9)用量筒分别量取所分离出来的亚甲基蓝和荧 光黄溶液的体积后,倒入指定的回收瓶中。 ? (10) 分离结束后,应先让溶剂尽量流干,然后 倒置,用吸耳球从活塞口向管内挤压空气,将吸 附剂从柱顶挤压出。使用过的吸附剂倒入垃圾桶 里,切勿倒入水槽,以免堵塞水槽。


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