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vivo (动物体内转染试剂) 使用手册


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Entranster -in vivo (动物体内转染试剂) 使用手册
Cat. No. 18668-11 Size:1ml 常温运输,储存于 4℃。 一 产品介绍 英格恩生物公司(Engreen Biosystem Co, Ltd.)是专业的转染试剂研发生产厂商。 EntransterTM 是英格恩生物公司研发合成的纳米聚合物转染试剂,该试剂采用纳米技 术合成,是最新一代非病毒转染试剂。由于纳米技术的应用,EntransterTM-in vivo 在 细胞转染过程中,表现了卓越的低毒、高效的性能。本品可用于转染 DNA,也可以 转染 RNA(如 siRNA、miRNA、mimic 和 inhibitor),可用于如下研究: ● 基因治疗研究 ● RNA 干扰研究 ● 蛋白功能研究 本品显著的特点是方法简单、快捷,价格低廉,对动物没有明显的炎性反应,对 操作者安全。 二 使用前注意 一般情况下,核酸(ug)和 EntransterTM-in vivo (ul)按照 1:2 的比例使用。也可调整比 例从 1:1.5 到 1:4 自行优化使用。 核酸的具体用量和注射用量须根据靶器官大小、动物大小、给药途径决定,具体 可参考下表(核酸的用量换算成 μg 计算)。
表 1 给药途径与核酸用量 给药途径 尾静脉 成年小鼠 脑室 腹膜 皮下肿瘤 成年大鼠 脑室 静脉 建议的核酸用量 50μg 2.5-1μg 100μg 10-50μg 2-5μg 150-300μg 最大给药体积 200μl-400μl 5μl 0.6ml-1ml 100μl 20μl 1-1.5ml

TM

一些器官比如皮下肿瘤的用量,也可以通过先确定最终的注射量,然后根据表 2 推算出核酸的用量和转染试剂的用量。比如最终的注射量是 100ul,那么核酸用量一 般为 12.5ug,EntransterTM-in vivo 的用量为 25ul。
北京英格恩生物科技有限公司 订购电话:010-68489824 转 8001 技术支持:010-68489824 转 8003 网址:www.engreen.com.cn 订购 Email: order@engreen.com.cn 技术支持 Email:support@engreen.com.cn

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表2

100ul 转染复合物的组成 25μl 核酸溶 液 25μl 纯水 12.5μg 核酸

100μl 转染 复合物

核酸稀释液

25μl 的 10%葡萄糖溶液 转染试剂稀释液 25μl 转染试剂 25μl 的 10%葡萄糖溶液

三 操作步骤 下面以 50μg 的核酸与 100μl 转染试剂,总注射体积 400ul,成年小鼠尾静脉注射 为例说明。 1. 核酸的稀释。将 50μg 核酸用适量无内毒素纯水稀释成 0.5μg/μl,加入 10%葡萄糖 溶液(w/v)100μl,使葡萄糖终浓度为 5%,终体积为 200μl,充分混匀。 2. 转染试剂的稀释。 100μl 的 EntransterTM-in vivo 试剂用等体积 100μl 的 10%葡萄 取 糖溶液稀释,得到葡萄糖终浓度为 5%,终体积为 200μl,充分混匀。 3. 转染复合物形成。立即将稀释后的转染试剂加入到稀释后的核酸溶液中,立即充 分振荡混匀。
表3 400ul 转染复合物的组成 100μl 核酸 溶液 100μl 纯水 50μg 核酸

400μl 转染 复合物

核酸稀释液

100μl 的 10%葡萄糖溶液 转染试剂稀释液 100μl 转染试剂 100μl 的 10%葡萄糖溶液

4. 室温静置 15 分钟。 5. 动物注射。 6. 基因表达检测。一般来说,根据注射方法和靶器官的差异,12-48 小时后基因表达 效果较好。 注意:a. 稀释用液的选择:强烈建议用注射用 10%葡萄糖溶液,如果由于注射体积 限制,可考虑采用更高浓度的葡萄糖溶液稀释,最终使注射时葡萄糖终浓度为 5%。 b. 转染用核酸请采用:高纯度和无内毒素核酸。提取的核酸请用无内毒素高纯水稀 释并尽量高浓度,便于最终注射时葡萄糖终浓度为 5%。否则容易出现沉淀、造成动 物的炎性反应和注射液渗透压过低,造成动物死亡。 c. 注射时的核酸终浓度请勿超过 0.5μg/μl 否则容易形成沉淀。 确定最优的核酸与转染试剂比例。 核酸与转染试剂比例是最重要决定转染效率的因素 之一。建议根据表 2 用量进行梯度实验确定最佳用量。
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四 常见问题与解决方案
问题 转染复合物出现 沉淀 可能原因 核酸用 TE 等溶解 注射时的核酸终浓度过高 转染复合物被冻存或低温放置时 间过长 核酸量欠佳 核酸和转染试剂比例欠佳 核酸用量过大 动物有炎性反应 或死亡 核酸用纯水溶解 注射时的核酸终浓度<=0.5μg/μl 转染复合物最好即配即用 优化核酸用量 优化核酸和转染试剂比例欠佳 降低核酸用量,保持核酸和转染试剂比例, 同步降低转染试剂用量。 采用无内毒素的核酸 注射液中含内毒素 注射前,采用 0.22μm 滤器过滤除菌 解决方案

转染水平低

五 储存与安全 本品常温运输,储存于 4℃,有效期 12 个月。 本品使用安全,未发现任何生物、化学毒性。如不慎沾染,用清水冲洗即可。 六 其他相关试剂 EntransterTM-D:用于将 DNA 高效低毒体外转染入动物细胞。 EntransterTM-H:用于将 DNA 转染入 HEK293T 细胞。 EntransterTM-R:用于将 RNA 体外转染入动物细胞。 七 质量保证 北京英格恩生物科技有限公司对 EntransterTM-in vivo 基因转染试剂的每批产品实 行严格质量检验,并进行转染验证,以确保产品质量。请用户使用前务必认真阅读本 手册。 八 使用限制 本转染试剂仅限科研用途。

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