当前位置:首页 >> 农林牧渔 >>

甘蓝型油菜小孢子


2010年 9月 2010, 32( 3): 349 - 353

中国油料作物学报 Ch inese journal of o il crop sc iences

甘蓝型油菜 DH 植株创建及其倍性的流式鉴定
介智靖
1 2 ,

, 闫晓红 , 方小平 , 杨

1

>
1

洁 , 黄进勇 , 魏文辉

1

2

1*

( 1. 中国农业科学院油料作物研究 所基因组学与分子生物学研究室, 农业部油料作物生 物学 重 点开放实验室, 湖北 武汉 430062 2 郑州大学生物工程系, 河南 郑 州 450001) ; .

摘要: 以甘蓝型油菜大粒品系和小粒品系的小孢子为试验 材料, 研究取样时 期、 蕾大小、 花 培养基 类型及添加 成分对小孢子产胚率的影响, 利用流式细胞仪对小孢 子再生 植株及 加倍植 株进行 了准确、 快速 的倍性 分析。结果 表明, 始花期为最佳取蕾时期, 花 蕾大小在 2. 5~ 3 5mm 为宜, 培 养基以液 体培养基最 好。培养 基中加入 0 1m g /L . . 6- BA 可以促进小孢子胚的发生 , 而活性炭对小孢子培养没有明显的促进作用。 流式细胞仪 倍性检测 显示小孢子 再生植株加倍后的双单 倍体 ( doub led haplo id, DH )占 49% , 还存在少量的三倍体 ( 11. 3 )、 % 四倍体 ( 1 1 )及嵌合 . % 体 ( 27 3% ) 植株。本研究为油菜材料的快速纯合及其 DH 系群体的构建等提供了新的经验。 . 关键词: 甘蓝型油菜; 小孢子 ; 单倍体; 双单倍体; 倍性鉴定 中图分类号: S565. 403 文献标识码: A 文章编号: 1007- 9084( 2010) 03- 0349- 05

Construction of doub led hap loid p lan ts and flow detec tion of their p loid ies in Brassica napus JIE Zhi- jing
1, 2

, YAN X iao- hong , FANG X iao- p ing , YANG Jie , HUANG Jin - yong , WE IW en- hu i

1

1

1

2

1*

( 1 Depart ent of G enom ics and M olecular B iology, O il Crop s R esearch Institu te of the Chinese A cademy . m of A gricultural Sciences /K ey Laboratory of Oil Crop B iology of theM in istry of A griculture, Wuhan 430062 China; 2 D epartm ent of B ioeng ineering, Zhengzhou University, Zhengzhou 450001 China ) , . , Abstract L arge and sm all seed lin es o fB rassica napus L. w ere used fo rm icrospo re culture and haplo id id enti : fication by flow cytom etry m ethod The factors effected em bryo production rate w ere in vest ig ated It w as found that . . th e op ti al bud m aterial o f 2. 5 to 3 5mm grew at pr i ary flow erin g period The liqu id m edium added w ith m . m . 0 1m g /L 6- BA w as able to accelerate the em bryogenesis A ctiv ated carbon has no obv io us prom o tion to the oc . . currence of em bryo T he flow cytom etry w as found to be qu ick and accurate on plo idy detection Results show ed . . th at after co lchic in e doub ling, the proport io n o f doub le d haplo id ( DH ) plan ts w ere 49 . T here w ere also a few o f % triplo id ( 11 3% ), tetrap loid ( 1 1 ) , and chi era p lants ( 27 3 ). T he present study offered new experience . . % m . % to obtain pure m aterials and to construct doub led haplo id lin es in B. napus breed ing. K ey w ord s B rassica napus; M icrospore; H aploid Doubled haplo id P lo idy id entificat io n : ; ; 植物小孢子培养已成为单倍体育种的重要手段 之一, 与常规育种相比, 该方法具有明显的优势: 单 倍体小孢子经过加倍后, 基因型纯合, 无需杂交育 种过程中的多代自交, 大大提高了育种效率, 缩短了 育种周期, 加快了育种进程
[ 1~ 3]

会发生外源基因的丢失

[ 4]

。在理论研究上, 利用小
[ 5]

孢子培养技术获得 DH 系群体, 可用于遗传分析及 分子标记 遗传图谱的研究 。有关甘蓝型 油菜小 [ 6] 孢子培养已有报道, L ichter 首次进行了甘蓝型油 菜游离小孢子的培养, 并成功获得再生植株。桑玉 芳等
[ 7]

。同时, 小孢子具备

单细胞和单倍体特性, 是植物基因工程中优良的转 化受体, 且加倍后植株为纯合体, 在繁殖过程中不

在此基础 上改进了甘蓝型油菜胚状 体诱导
[ 8]

培养基的配方, 李浩杰等

对影响甘蓝型油菜小孢

收稿日期: 2010 04 25 基金项目: 国家自然科学基金 ( 30671312 ); 湖北省自然科学基金创新群体项目 ( 2008CDA 083) ; 湖北 省自然科学基 金 ( 2009CD B191 ) ; 中央级公 益性科研院所基本科研业务费专项资金 ( 200802) 作者简介: 介智靖 ( 1983- ) , 女, 硕士研究生, 研究方向: 植物生理学; 闫晓红为并列第一作者 * 通讯作者: 魏文辉 ( 1971- ) , 男, 副研究员, 研究方向: 基因组学与分子生物学, Te: 027- 86817881 E - m ai: whw e@ oilcrops cn l ; l i .

350

中国油料作物学报

2010 32( 3) ,

子胚诱导的因子进行了分析, 这些均为我们开展类 似研究提供了有益的借鉴。 尽管油菜小孢子培养技术体系已渐成熟, 但在 实际操作过程中仍存在小孢子出胚率低、 不同遗传 [ 9] 背景的材料出 胚率差异大等问 题 , 为此, 需要进 一步改进技术, 提高小孢子再生植株的效率。 流式细胞术 ( F low cytom etry FCM ) 是 20世纪 , 70年代发展起来的一种快速单细胞定量分析和分 [ 10] 选技术, 通过直接测定细胞的 DNA 含量, 从而快 速鉴定出植株的染色体倍性水平。目前被用于茄科 作物如辣椒
[ 11]

C: NLN + 13 蔗糖 + 0 1mg /L 6 - BA; D: NLN + % . 13 蔗糖 + 1 琼脂; E: NLN + 13 蔗糖 + 0 5m g /L % % % . 活性炭 + 1 琼脂; F: NLN + 13 蔗糖 + 0 1m g /L % % . 6- BA + 1 琼脂。上述液体培养基采用 0 22 m % . 过滤膜过滤除菌, 固液双层培养基参照牛应泽等方 法
[ 13]

。置于 32! 黑暗条件下, 静置培养 48h后转入

25! 下黑暗培养至出现肉眼可见的小胚状体。 1 2 4 小孢子胚培养和生根 将出现小胚状体的 . . 培养皿 放在 摇 床上 振 荡 培养 约 2w ( 转 速 为 50r / m in ) 至形成子叶胚。再将发育良好的子叶 胚转于 固体培养基 ( B5 + 0 1m g /L GA 3 + 30g /L 蔗糖 + 9g / . L 琼脂 ) 上分化成苗, 发育异常的畸形胚采用愈伤组 织途径培养成苗。当幼苗长至 3~ 4片真叶时, 将其 转于生根培养基 ( MS+ 0 1m g /L NAA+ 30g /L 蔗糖 . + 7g /L 琼脂 ) 上生根。 1 2 5 倍性流式鉴定 将培养基中的幼苗移出室 . . 外, 炼苗后用 0 3% 的秋水仙碱进行浸根加倍处理。 . 采用流式细胞仪分析成活植株的染色体倍性。操作 步骤参考 Jaroslav 的方法, 以甘蓝型油菜 大粒品 系四倍体正常植株为对照。取加倍后植株幼嫩的新 鲜叶片进行细胞 DNA 含量测定, 由 Ce ll L ab Quanta SC 分析仪自动测定和记录 DNA 含量的分布曲线。
[ 14 ]

, 芸薹属作物如甘蓝等

[ 12 ]

的倍性鉴

定。本试验以甘蓝型油菜大粒品系和小粒品系为材 料, 优化培养条件进行了游离小孢子培养, 并结合流 式细胞仪对小孢子再生植株及加倍植株进行染色体 倍性快速鉴定, 成功获得了双单倍体植株, 建立了稳 定、 高效的甘蓝型油菜双单倍体创建技术体系, 为开 展后续研究奠定了基础。

1 材料与方法
1 1 实验材料 . 以大田种植的甘蓝型油菜大粒品系及小粒品系 的花蕾作 为实验 的起始材 料。 2008 年 9月 播种, 2009年 3月取材。其中大粒品系及小粒品系均由 本单位方小平副研究员提供。 1 2 方法 . 1 2 1 花蕾的采集时期及选择标准 分别在油菜 . . 始花期、 盛花期、 蕾薹期及终花期四个时期选取植株 主花序、 一级侧枝和二级侧枝上 1 5 ~ 4 5mm 长的 . . 花蕾, 苏木精染色, 在显微镜下镜检小孢子确定发育 时期, 选取单核靠边期小孢子所占比例较大的花蕾, 用于分离小孢子。 1 2 2 . . 小孢子的游离 首先 用 75 的 酒精消毒 % 30s, 0 1% 升汞表面消 毒花蕾 8~ 10m in 再用无菌 . , 水冲洗 3次以上。然后将消毒的花蕾置于 50mL 试 管中, 加 B 5 提取液 ( B5 大量元素 + B 5 微量元素 + B5 有机添加物 + 乙二胺四乙酸铁钠 + 13 蔗糖, pH % 6 0) , 用玻璃棒将花蕾研碎, 压出花粉小孢子, 将小 . 孢子悬浮液用 300目滤网过 滤, 收集滤 液, 1 000r/ m in离心 5m in, 沉降小孢子。弃去上清液, 再加入 B5 提取液悬浮小孢子, 再离心沉降小孢子, 重复 3次。 1 2 3 小孢子胚状体的诱导 将纯化干净的小孢 . . 子加 NLN - 13 液体培养 基稀释, 用血球 计数板计 数, 调整小孢子浓度为 1 10 个 /mL, 分别置于本
5

2 结果与分析
2 1 花蕾的选取时期 . 选取甘蓝型油菜大粒品系的始花期、 盛花期、 蕾 薹期、 终花期花蕾及小粒品系的终花期花蕾进行游 离小孢子培养。结果发现大粒品系在始花期产胚数 最高, 培养效果最好, 盛花期次之, 蕾薹期和终花期 最差 ( 表 1) 。而小粒品系的 花期与大粒材 料不同 步, 在大粒材料为始花期时, 小粒材料已经处于终花 期, 而且不同基因型的产胚能力也有明显的差异, 最 终小粒材料没有成功出胚。因此, 对一般材料的小 孢子培养在初花期至盛花期取材为最好。 2 2 花蕾的选择标准 . 选取 1 5 ~ 1 99mm, 2 ~ 2. 49mm, 2 5 ~ 2 99 . . . . mm, 3~ 3 49mm, 3 5~ 3 99mm, 4 0~ 4 49mm 长度 . . . . . 的花蕾进行小孢子培养, 发现大粒材料长度为 2 5~ . 3 5mm 的花蕾中单核晚期小孢子较多, 获得较多的 . 胚状体, 而其它大小的花蕾出胚较少 ( 图 1)。由于 小粒材料开花较早, 没有来得及对各种大小花蕾取 材, 只取到了终花期的花蕾。 2 3 培养基成分与小孢子出胚率的影响 . 培养基成分对小孢子胚的诱 导和形成影响极 大。 与固 - 液培养基相比, 液 体培养基更好 。 液体

试验所设计的 6种 NLN 改良培养基上, 即 A: NLN + 13% 蔗糖; B: NLN + 13 蔗糖 + 0 5m g /L 活性炭; % .

介智靖等: 甘蓝型油菜 DH 植株创建及其倍性的流式鉴定
表 1 花蕾 选取时期对小孢子胚产量的影响 T ab le 1 E ffect of bud stage on the yie ld of m icrospore embryo
因子 Factor 花期 Flow ering 花蕾数 Bud numb er 产胚数 /蕾 Em bryo yield / bud 始花期 Pri ary m 48 50 材料 M aterial 大粒品系 Large seed line 盛花期 Flourish ing 30 28 蕾薹期 Bud 15 5 终花期 E nding 15 3 始花期 P ri ary m 0 0 小粒品系 Sm all seed line 盛花期 Flourish ing 0 0 蕾薹期 B ud 0 0

351

终花期 End ing 32 0

进行 DNA 含量的测定, 用大粒品系四倍体正常植株 细胞作对照, 使 G1 期对照细胞位于 200道附近 ( 图 2a) 。每个待测样本测定 1次, G1 期的 DNA 峰值处 在 100道、 200道、 400道附近的分别为单倍体、 双单 倍体、 四倍体, 其余的为嵌合体。是嵌合体的单株, 又根据峰值位置确定其构成细胞的倍性。结果显示 88株小孢子植株 群体中, 单 倍体、 双单倍 体、 三倍 体、 四倍体及嵌合体同时存在 ( 图 2)。其中, 单倍体 占 11 3 , 双单倍体比例为最高, 占 49 , 三倍体为 . % %
图 1 大粒品系花蕾长度与单核晚期小孢子 所占百 分率之间的比例关系 F ig. 1 Re lation sh ip between th e bud size of large seed m aterial and the p ropor tion of m icrospore at late un inu cleate stage 表 2 培养基成分对大粒品系小孢子出胚率 的影响 Tab le 2 E ffect of m ed iu ingred ien ts on th e y ie ld of m m icrospore e bryo for large seed line m
培养基类型 M ed ium type A B C D E 培养花蕾数 Bud num ber 15 28 20 24 30 产胚数 Em bryo yield 44 20 32 3 0 每花蕾产胚数 Em bryo per bud 2 93 . 0 71 . 1 6 . 0 13 . 0

11 3 , 四倍体为 1 1 , 嵌合体为 27 3 。 . % . % . %

3 讨论
本研究表明大粒品系小孢子胚诱导率在初花期 取材时最高, 而盛花期和蕾薹期取材时则较低。究 其原因, 可能是始花期处于单核靠边期及双核早期 的小孢子在小孢子群体中所占比例较大, 适于进行 胚状体诱导。而后期则可能是随着气温的升高, 小 孢子发育进程加快, 取材时已超过了双核期, 脱分化 启动较困难而导致产胚率下降 。研究表明, 小孢 子的发育时期对胚状体诱导频率有直接影响, 只有 单核晚期的小孢子最容易发育成胚状体
[ 16] [ 15 ]

。因此,

F 35 2 0 06 . 注: A: N LN + 13 蔗糖; B N LN + 13% 蔗 糖 + 0 5m g/ L活 性炭; % : . C: N LN + 13% 蔗糖 + 0 1m g /L 6 - BA; D: N LN + 13% 蔗 糖 + 1 琼 . % 脂; E: NLN + 13% 蔗糖 + 0. 5m g /L 活性 炭 + 1 琼脂; F: N LN + 13% % 蔗糖 + 0 1m g /L 6- BA + 1% 琼脂 . N ote A: NLN + 13% sucrose B N LN + 13 sucrose+ 0 5m g/ L : ; : % . act ive carbon; C: N LN + 13% sucrose + 0 1mg /L 6 - BA; D: NLN + . 13 su crose+ 1 agar E: N LN + 13% sucrose+ 0 5m g /L active car % % ; . bon+ 1 agar F: N LN + 13% sucrose+ 0. 1m g /L 6 - BA + 1% agar % ;

进行油菜小孢子培养时要严格挑选处于单核晚期的 [ 17] 小孢子作接种材料。杨立勇 等研究发现初花期 前后两周左右, 产胚率达到最大值, 然后在盛花后期 至终花期, 小孢子培养的产胚率大幅度下降或不能 形成胚状体。刘志文 等也认为始花期后一周或 两周取蕾最佳。本研究结果也表明, 单株开花后一 周或两周, 即始花期及盛花期时处在单核靠边期即 单核晚期小孢子比例最高, 此时花蕾营养水平高, 小孢子发育同步性好、 生理活性高、 分化程度较低、 代谢旺盛, 有利于小孢子接受外界环境条件的刺激, 改变发育方向, 从而提高胚的诱导频率
[ 19] [ 18 ]

培养基 ( 表 2 A、 C ) 中平均每花蕾形成 2 93个 , B、 . 胚, 而固 - 液培养基 ( 表 2 D、 F ) 中平均每花蕾只 , E、 形成 0 13个胚。加入适当浓度的 6- BA 促使了小 . 孢子有较好的产胚率 ( 表 2 C 比 D 产胚多, F 比 E , 产胚多 ) , 表明激素促进小孢子的分化, 有利于小孢 子诱导成胚状体。而添加活性炭 ( 表 2 B 和 E ) 与 , 对照 (表 2 A ) 相比, 小孢子胚 产量没有增加, 表明 , 活性炭对小孢子胚胎发生和形成作用不大。 2 4 大粒品系 DH 植株染色体倍性鉴定 . 通过流式细胞仪对大粒品系 DH 植株叶片细胞

, 之后则

大多数小孢子越过该期, 脱分化启动较为困难, 出胚 效率不高。 小孢子所处的发育时期是影响游离小孢子培养 成败的又一个重要因素。官春云
[ 20]

认为小孢子发

育同步化程度高, 处于单核靠边期的比例愈高, 愈易

352

中国油料作物学报

2010 32( 3) ,

a: 单倍体; b: 双单倍体; c 三倍体; d 四倍体; e 嵌合体 ( 单倍体 + 二倍体 ); : 嵌合体 ( 单倍体 + 二倍体 + 四倍体 ) : : : f a hap loid b doub led hap lo id c trip loid; d tetraploid; e: ch i era ( haploid and doub led hap lo id) ; : ch i era ( h aploid, doub led haploid and tetrap lo id) : ; : ; : : m f m

Fig 2 .

图 2 小孢子培养的植株倍性检测 Ploidy de tection of the m icrospore cu ltured p lan ts

于诱导。周芳菊等

[ 21]

研究发现油菜单核期与双核

促进小孢子胚的发生。张亚丽等

[ 23]

研究发现, 低浓

期相比, 小孢子同步化程度高, 小孢子核质比大, 增 长速度快, 小孢子成胚率高且单核晚期处于适宜接 种的小孢子在花蕾中达 70% 。进行游离小孢子培 养时, 可以通过花蕾大小这一形态指标来估计小孢 子所处的发育阶段。在选蕾时我们发 现 2 5 ~ 3 5 . . mm 大小的花蕾最佳, 通常可保证有较高比例的单 核靠边期小孢子。 近年来的小孢子培养基本为固体和悬浮培养两 种方式, 而悬浮培养的诱导率高于固体培养, 可以增 加胚的数量, 胚状体的发育也较好。本研究比较了 这两种培养方式, 所得结果与前人一致 泽
[ 13] [ 22 ]

度的 6- BA 能促进大白菜小孢子胚的发生, 但是随 着 6- BA 浓度的增高, 小孢子胚发生受到抑制, 并 使小孢 子 胚 畸形 化, 并 认 为 6 - BA 最佳 浓 度 为 0 2m g /L。 . 刘雪平等
[ 24]

发现加入 6- BA 时, 小孢子

再生频率显著增加, 但畸形胚增多。目前激素对小 孢子的作用仍未确定。 本研究活性炭对小孢子培养没有明显的促进作 用。刘艳玲等
[ 25 ]

研究则发现在培养基中加入适量

的活性炭, 可以吸附小孢子培养时释放的有害物质, 改善小孢子的发育环境, 促使胚发生能力较强的小 孢子产生胚状体, 但不能使不具备胚发生能力的基 因型产生胚状体, 认为活性炭在一定程度上改善了 小孢子的生存环境。 小孢子培养诱导的植株几乎全部是单倍体 ( 自 然加倍者极少 ) , 通常需要对单倍 体植株进行秋水

, 但牛应

在实验中发现固液双层培养基可较大提高产

胚的基因型范围及产胚率。目前实验中采用固液结 合方式培养的报道不多, 仍需要作进一步研究。 本研究表明培养基中加入适量的 6- BA 可以

介智靖等: 甘蓝型油菜 DH 植株创建及其倍性的流式鉴定 仙碱处理, 人工加倍染色体。但如果加倍频率不理 想时, 通过对处理植株的染色体倍性早期快速鉴定, 对未加倍的单倍体材料, 继续加倍, 是构建 DH 群体 十分重要的技术环节。传统的倍性鉴定是基于对根 [ 26] 尖细胞染色体计数 , 但由于甘蓝型油菜的染色体 数目多 ( 2n= 38)、 细胞染色体制片需要相当熟练的 实践技能, 并且这种方法过程繁琐、 费工费时。流式 细胞仪鉴定再生植株的倍性简便、 快速、 准确, 且不 受植物体取材部位和细胞所处的时期限制, 取材部 位可以是叶片、 根、 果皮、 茎、 花、 种子等, 在熟练操作 时仅需一片真叶即可进行植株倍性检测, 大大提高 了检测 效率与 准确性 , 且分 析一 个样品 仅需 10m in 特别适合于较多样品的倍性检测分析。 ,
[ 17]
[ 27 28 ] ,

353

[ J] . 福建农业大学学报 ( 自然科学版 ), 2002, 31( 1): 55- 58. [ 13] 牛应泽, 刘玉贞, 郭世星. 提高甘蓝型油菜游离小孢子产 胚率的研究 [ J]. 西南农业学报, 2005 12( 1): 24- 27. , [ 14] Do leze l J Lys kM A, H ouw e I V D, et a.l U se of flow , cy to etry fo r rap id p lo idy de ter ination inM usa spec ies m m [ J] . Info usa 1997 6( 1): 6- 9 M , , . [ 15] 王亦菲, 陆瑞菊, 孙月 芳, 等. 大田油菜 游离小 孢子培 养高频胚状体 诱导 及植 株再 生 [ J]. 中 国农 学通 报, 2002, 18( 1): 20- 23. [ 16] Babbar S B, A ga r al P K, Sahay S et a . Iso la ted m icro w , l spo re culture o fBrassica: A n expe ri en tal too l for deve l m opm ental stud ies and crop i prove ent[ J]. Ind ian Jour m m na l o f B iotechno logy 2004 3: 185- 202. , , 杨立勇, 范 志雄, 杨 光圣. 甘 蓝型 油菜 小孢 子培 养中 几项技术改进 [ J] . 中国油 料作物学 报, 2005, 27 ( 1): 14- 18. [ 18] 刘志文, 刘雪平, 傅廷 栋, 等. 甘蓝型油 菜小孢 子培养 的胚诱导 和加 倍 效 率的 研 究 [ J]. 华 中 农业 大 学学 报, 2005, 24( 4): 339- 342. [ 19] Sm kalov I V trovcov M, K lm aM, et a.l Effic iency , o f m icrospo re cu lture fo r doubled haplo id production in the breed ing pro jec t? CzechW in ter R ape# [ J] . C zech J G enet P lant Breed, 2006, 42( 2): 58- 71. [ 20] 官春云. 甘 蓝型油 菜小 孢子 培养 和双 单倍 体育 种研 究 I 供 体植 株 和小 孢子 密 度对 小 孢子 培养 的 影响 . [ J] . 作物学报, 1995, 21( 6): 665- 670. [ 21] [ 22] 周芳菊, 李 栒. 油菜 小孢子 培养及其 单倍体 应用研 究进展 [ J]. 作物研究, 2004, ( 5): 372- 379. 曹丽娟, 栾 非时, 李 锡香. 植 物游 离小 孢子 培养 的研 究进展 [ J] . 东 北农 业大 学学 报, 2005 36( 5) : 660 , 663 . [ 23] 张亚丽, 张鲁刚, 张华 敏, 等. 早熟大白 菜游离 小孢子 胚诱导及植株 再生 的研 究 [ J]. 甘 肃农 业大 学学 报, 2009, 44( 3): 45- 49. [ 24] [ 25] 刘雪平, 刘志文, 涂金 星, 等. 甘蓝型油 菜小孢 子培养 技术的几项改进 [ J] . 遗传, 2003, 25( 4): 433- 436. 刘艳玲, 简元才, 李成 琼, 等. 结球甘蓝 游离小 孢子培 养胚发生能 力的 研究 [ J]. 西南 农业 大学学 报 ( 自然 科学版 ) , 2006, 28( 3): 439- 446. [ 26] D o leze l J C ihalikov a J L ucre tti S. A h igh y ie ld pro ce , , dure for iso lation of m etaphase chro osomes from root m tips o f Vicia faba L. [ J]. P lanta 1992, 188 93- 98. , : [ 27] [ 28] O chatt S J F low cyto e try in plan t breed ing [ J]. Cy . m to etry 2008, 73A: 581- 598. m , Cous in A, H ee l K, Co ling W A, et a . A n e fficient w l h igh throughput flow cy to etric m ethod for esti a ting m m DNA plo idy leve l in plan ts[ J]. Cytom etry 2009, 75A: , 1 015- 1 019 .

参考文献:
[ 1] W ang M, Be rgen S V, D uijn B V. Insights into a key de velopm enta l sw itch and its i po rtance fo r e ffic ient p lant m breeding[ J]. P lant P hysio logy 2000, 124 523- 530. , : [ 2] 顾宏辉, 胡林军, 周伟 军. 小 孢子培 养技术 在芸薹 属作 物育种上 的应 用 研 究进 展 [ J]. 农 业 生 物技 术 学报, 2004, 12( 2): 219- 223. [ 3] 王学军, 林良斌, 熊兴 华. 油 菜小孢 子再生 体系的 研究 进展 [ J] . 湖 南农业 大学 学报 (自然 科学 版 ) , 2003, 29 ( 4): 361- 364. [ 4] D roste A P G, Bodanese Zane ttin iM H. T ransfor ation m system: an a lternative m e thod fo r soybean transfor ation m [ J]. P lantM o lecu la r B io logy R epo rter 2000 18 51- 59 , , : . [ 5] Dew an D B, R ako G, Downey R K. G ro th and y ie ld o f w w doubled hap lo id lines o f o ilseed Brassica rap a [ J]. C ana d ian J P lant Sc ience 1998, 78 537- 544. , : [ 6] L itcher R. Induction of haplo id plants from iso la ted po llen of B rass ica napus L. [ J] . Z P flanzenphysiology 1982 , , 105: 427- 434 . [ 7] 桑玉芳, 张 恩慧, 杨 安平, 等. 甘 蓝游 离小 孢子 培养 中 影响 胚 状 体 形 成 的 主 要 因 素 [ J] . 西 北 农 业 学 报, 2007, 16( 2): 125- 129. [ 8] 李浩杰, 蒲 晓斌, 张 锦芳, 等. 甘 蓝型 油菜 小孢 子培 养 影响因素的研 究 [ J]. 中 国农学通 报, 2009, 25( 23): 82 - 85. [ 9] D u ijs J G, V oorr ips R E, V isse r D L, et a . M icro spore l cu lture is successfu l in m ost crop types of Brassica olera cea L. [ J]. Euphy tica 1992, 60: 45- 55. , [ 10] Eeckhaut T, L eus L, H uy lenb roeck J V. Explo itation o f flo cytom etry fo r plant breeding [ J]. A cta Phys io log i w . ae P lantarum, 2005, 27( 4B ): 743- 750. [ 11] [ 12] 陈 斌, 耿三省, 张晓芬, 等. 辣椒 花药培 养再生 植株 染色体倍数检测研究 [ J]. 遗传育种, 2005, 4: 28- 30 . 周元 昌, K ennedy S. 抱 子甘 蓝 花培 苗 倍性 快速 鉴 定


相关文章:
甘蓝型油菜与紫罗兰遗传学
甘蓝型油菜小孢子 5页 免费 甘蓝型油菜人工合成种遗传... 8页 2财富值如要投诉违规内容,请到百度文库投诉中心;如要提出功能问题或意见建议,请点击此处进行反馈。...
甘蓝型双低杂交油菜制种原理及技术规程
甘蓝型双低杂交油菜制种原理及技术规程_农学_农林牧渔_专业资料。甘蓝型双低杂交油菜制种原理及技术规程 摘要:在对天祝县甘蓝型双低杂交油菜制种技术原理和规程进...
天助三国世家小菜籽油品类介绍--甘蓝型油菜高油酸品系H...
天助三国世家小菜籽油品类介绍--甘蓝型油菜高油酸品系H177小菜籽主要特性及栽培技术...六个甘蓝型油菜油酸脱氢... 7页 免费 甘蓝型油菜小孢子 5页 免费 甘蓝型油...
生物技术在油菜育种中的应用
一、小孢子培养在油菜育种中的应用 培养单倍体植株的小孢子的目的是想从中分离 A 和 C 基因组,即分离出白 菜型油菜甘蓝, 或者创造非整倍体油菜。单倍体...
分子标记筛选甘蓝型油菜抗病材料研究
以胚状体为受体进行基因转化,以小孢子胚状体研究基因的表达等等。应用 小孢子培养技术,吴江生等选育出华双3号,李加纳等获得了一批甘蓝型黄籽油菜纯 系;国外也育成...
高产双低甘蓝型油菜新品种扬油6号
高产双低甘蓝型油菜新品种扬油 6 号 扬油 6 号是江苏里下河地区农业科学研究所最新育成的低芥酸、 低硫甙甘蓝 型油菜新品种,于 2004 年通过国家审定定名,...
小孢子培养技术
注释: ①、 如果遇到阴雨天气,为了不影响实验进程也可以取材,但一定要选取生长良好的花序,因为有研究报 道低温有利于小孢子的胚胎发生。 ②、甘蓝型油菜花序一般...
油菜试题
白菜型油菜的苔茎叶为 () A、全抱茎 B、半抱茎 C、不抱茎 D、都有可能 2、三大类型油菜中,为异花授粉的是 () A、白菜型 B、甘蓝型 C、芥菜型 D、...
2015油菜综合实验报告
由于甘蓝型和白菜型油菜的自交不亲和系具有自交不亲和基因, 在开 花前 1-2...由于油菜花较小,去雄授粉需要一定的技巧及耐心,去雄 时要避免雄蕊破裂。 授粉前...
第七章 油菜品质及检验
第二节 油菜品质的形成与调控 油菜以农艺性状为基础,可分为白菜型、芥菜型和甘蓝型三大类。向菜型油菜俗 称小油菜,染色体数 20,包括芸薹(北方型小油菜) 、...
更多相关标签:
甘蓝型油菜 | 甘蓝型油菜基因组 | 甘蓝型油菜 苗 | 孢子甘蓝 | 孢子甘蓝的做法 | 孢子甘蓝多少钱一斤 | 孢子甘蓝是转基因的吗 | 孢子甘蓝种子 |