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叶面肥标准—氨基酸含量的测定


1 氨基酸含量的测定 原理 试样用磺基水杨酸沉淀蛋白质后,用EDTA络合金属元素释放氨基酸,各种 氨基酸经分离后分别与茚三酮显色,在pH2.2条件下用氨基酸自动分析仪测定各 种氨基酸含量,各种氨基酸的总和,即为氨基酸叶面肥料氨基酸的含量。 1.1试剂 试剂 (1)混合氨基酸标准液(仪器制造公司出售),0.00250mol/L。 (2) 乙二胺四乙酸二钠溶液 (EDTA) 溶液: 1%溶液, 称1gEDTA溶于100mL 水中。 (3)磺基水杨酸溶液:称取5g磺基水杨酸溶于100mL水中。 (4)盐酸。 (5)盐酸溶液:0.06mol/L。 (6)氢氧化钠溶液:称取50g氢氧化钠溶于100mL水中。 (7)PH2.2的柠檬酸钠缓冲液:称取19.6g柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)和 16.5mL盐酸1.1.(4)加水稀释到1000mL,用盐酸和氢氧化钠溶液1.1.(6)调节PH 至2.2。 (8)PH3.3的柠檬酸钠缓冲液:称取19.6g柠檬酸钠和9mL盐酸1.1.(4)加水稀 释至1000mL,用盐酸1.1.(4)和氢氧化钠1.1.(6)调节PH至3.3。 (9)PH4.0的柠檬酸钠缓冲液:称取19.6g柠檬酸钠和9mL盐酸1.1.(4)加水稀 释至1000mL,用盐酸1.1.(4)和氢氧化钠1.1.(6)调节PH至4.0。 (10) PH6.4的柠檬酸钠缓冲液: 称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠 (优级纯) 加水稀释至1000mL,用盐酸1.1.(4)和氢氧化钠1.1.(6)调节PH至6.4。 (11)茚三酮溶液: a)PH5.2的乙酸锂溶液:称取氢氧化锂(LiOH·H2O)168g,加入冰乙酸(优 级纯)279g,加水稀释到1000mL,用盐酸1.1.(4)和氢氧化钠1.1.(6)调节PH到5.2。 b)茚三酮溶液:称取150mL二甲基亚砜(C2H6OS)和乙酸锂溶液a)50mL 加4g水合茚三酮(C9H4O 3·H2O)和0.12g还原茚三酮(C18H10O 6·2H2O) 搅拌至 完全溶解。 1.2仪器和设备 仪器和设备 常用实验室仪器、设备和 a) 氨基酸自动分析仪

b) 离心机:3500~4000r/min 1.3分析步骤 分析步骤 1.3.1试样溶液的制备 称取试样1~5g,精确到0.001g,置于250mL容量瓶中,加水至刻度,用移液 管取上层清夜2mL于10mL离心管中,加入5%磺基水杨酸1.1.(3)2mL,混匀,放 置1h,使蛋白质沉淀。再加入EDTA溶液1.1.(2)1mL和盐酸溶液1.1.(5)1mL,用离 心机离心15min, 用移液管取上清液1mL于5mL的容量瓶中, 蒸干, 用1mL的PH2.2 的缓冲液1.1.(7)溶解,供仪器测定用。 1.3.2试样空白溶液的制备 空白试验溶液除不加试样外,用相同试剂溶液,按1.3.1规定的步骤进行。 1.3.3测定 准确吸取0.2mL混合氨基酸标准液1.1.(1),用PH2.2的柠檬酸钠缓冲液1.1.(7) 稀释至5mL,次标准稀释液浓度为5.00nmol/μL,作为上机测定用氨基酸标准, 用氨基酸自动分析仪以外标法测定试样溶液氨基酸含量。 1.4分析结果的表述 分析结果的表述 氨基酸的含量X,以质量百分数(%)表示,按式(1)计算: m c × 1 / 50 × F × V × M i X =∑ i × 100 ………………………(1) m × 109 i =1 式中:X—样品氨基酸含量,g/100g;
ci—试样中第i中氨基酸含量,nmol/50μL; F—样品稀释倍数; V—水解后样品定容体积,mL; Mi—第i种氨基酸分子量; m—样品质量,g; n—氨基酸数量; 1/50—折算成每毫升样品测定液的氨基酸含量,nmol/mL; 109—将样品含量由ng换算成g的系数。

1.5允许差 允许差 取平行测定结果的饿算术平均值为测定结果; 平行测定结果的绝对差值不大 于1.0%。


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