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02 练习徒手切片


练习徒手切片,观察植物器官
【实验目的】 掌握生物玻片标本制作的常规方法,了解石蜡切片的制作方法。 【实验材料】 胡萝卜、马铃薯、、植物鲜茎叶、植物干茎叶植物根、茎、叶的永久切片等等。 【实验用具】 显微镜、载玻片、盖玻片、刀片、剃刀、培养皿、吸管、解剖工具、酒精、甘油、 番红 【实验内容】
(一) 植物徒手切片的制作与封藏

植物形态解剖学实验教学中,最简单和常用的切片法是徒手切片法。徒手切 片法简称手切片法。一般是指材料和刀片(或剃刀)都握在手里所进行的一种切 片方法。 材料是新鲜的, 有时也用预先固定好的。 这种切片方法, 虽然有其缺点, 如:不易做到将整个切面切得薄而完整,往往切出的片子厚薄不一;过软或过硬 的材料比较难切。但也有许多优点,如:工具简单,只要有一把锋利的剃刀或双 面刀片就够了,方法简单,容易学会;制片时间短,只要有现成材料,可以立刻 用刀片切成薄片,当即观察,即便要染色,时间也不长;还有一个独特的优点就 是可以看到原来的天然颜色。 徒手切片法,由于具备上述优点,可以说不需要任何特殊设备,简便易行, 省时间又省资金, 因此具有普遍应用的适应性。不仅适于基层科学研究单位从事 研究观察时用,更适合用于中学教学中使用,因为中学一般不具备切片机,而中 学生物教学中所用切片, 又多是属于形态构造方面的内容,因比可以通过徒手切 片给学生做示范观察,或者让学生用现成材抖,亲自动手切片,使他们将从外观 看到的生物的外部形态和显微镜下所看到的内部解剖构造联系起来, 加深机能与 构造是统一的慨念。从这-意义来讲,徒手切片的制作是重要基本技能之一。 1. 一般材料的徒手切片制作方法 (1)材料和刀片的握法: 制手切片前,首先将材料切成长约 2-3 厘米的小段。 手持材料时,左手拇指和食指夹住材料。为防止刀伤,拇指应略低于食指。为便 于徒手切,材料的上端应高于拇指和食指,但不必高出很多,高出过多切削时材 料容易动摇。握材料时要注意,一定要使材料的轴面与水平面互相垂直。对双面 刀片用右手拇指和食指横向平握其右角, 对于单面刀片则用大姆指和中指夹住刀 片右后角,食指顶住刀片左前角,刀口向内,然后置于左手食指之上,刀片要与 材料的纵轴相垂直。 (2)切片法:切片前,先将材料和刀口上蘸些水,使之切时滑润。切时,先 切去材料上端一段,使截面平整。切的方法,以刀口自外侧左前方向内侧右后方 斜切,这样可以边切边看清切片的进展情况,同时切起来也比较顺手。不要向内 平切或向外切,切片时切忌中途停顿或推前拖后作“拉锯”式切割。左手保持稳

定, 不要两手同时拉动。 注意切片时两手不要紧靠身体或压在桌子上用臂力而不 要用腕力及握刀指关节的力量。 每切 2-3 片后就把所切材料的薄片用蘸水毛笔移 入盛有清水(或 50-70%酒精)的培养皿中,以备取用。尽量不要切斜,如发现 切面出现倾斜应立即修正,切平,然后再继续切片。 (3)如何选片:切下的薄片,移入盛水的培养皿里后,检查一下可见有各 种情况:材料完整但很厚;材料完整但厚薄不均,材料不完整但很薄;材料完整 而且全面薄。这几种薄片中,当然以最后者为最理想,但其他的片子并不全是废 片。如有时只需观察局部就足以了解整体的构造时,虽然材料不完整,但局部切 片尚薄,或材料完整,仅局部切的薄的片子均可以选用观察。如玉米茎横切片, 只要有四分之一或者更少的小片,就可以看出内外维管束的大小、多少及每个维 管束的构造, 所以切下的切片不是每一片都适用,也不是只有全面切得薄的才能 用,要根据需要选择,一次可以多选几片置于裁玻片上,滴水制成临时水装片, 通过镜检再进一步选择理想的材料用以观察。 同时也可以通过镜检找出自己制片 中的缺点和问题,以求改进。 2.柔软和坚硬材料的切法 过于柔软的材料,如植物的叶片或其他薄而 微小的材料,难以直接执握手切,则须夹入坚固而易切的维持物中切。常用的维 持物有胡萝卜(用胡萝卜时可将中间硬心即木质部切除,用其余部分)、马铃薯 块茎、接骨木的髓部及通草髓等。但须要注意的是通草髓遇水即变软,可将其保 存在酒精中留作切片或用于夹持材料。切前先把夹持物切成长方小体,上端与纵 轴垂直面削平,若被切材料属叶状体一类的薄片,从上至下纵切一缝,将材料夹 于其中即可,如不是叶状体,即将材料夹于其中,或根据材料不同在缝里挖一个 和材料形状相似,大小相等的凹陷,把材料夹在凹陷里。然后用手握紧夹持物, 将夹持物和其中的材料一齐切成薄片,除去夹持物的薄片,便得到材料的薄片。 坚硬的材料要经软化处理后再切。软化方法:-种是对于比较硬的材料,先 切成小块, 后进行煮沸, 经 3-4 小时煮沸后, 再浸入软化剂 (50%酒精∶甘油=1∶ 1)中数天至更长些时间,而后再切。另一种,对于已干或含有矿物质,比较更 硬的材料,要先在 15%氢氟酸的水溶液中浸渍数周,充分浸洗后,再置入甘油 里软化后再切。 3、切片的封藏 用徒手切片法获得的植物根、茎、叶的切薄材料,组织离 析材料,花粉粒或低等植物类的单细胞藻类,多细胞系状体和叶状体等,在显微 镜下观察时,需将其置于载破片上,并滴以封藏剂制成临时观察的装片,以防止 材料因干燥而收缩,并且可使其得到充分平展和便于光线的透过。 临时装片根据封藏剂不同,可分水封片和甘油封片。凡用以临时观察,不欲 久留的装片均可用清水封藏,制成水封片;需要提前半天或一天就备出的装片, 或者观察后须保留一定时间的装片,为防止水分蒸发,出现材料收缩现象,则适 量用甘油封藏,制成甘油封片。用甘油封片时,保留时间短者,可用 10%甘油 水溶液,保留时间长者则须从前甘油中再转入 50%甘油水溶液中或在此液中浸 1

小时后再转入纯甘油中封藏。用甘油做临时封藏的优点是不仅封片保留时间长, 且有加强材料透明的作用。 据以上所述,无论用哪种封藏剂制作封片均须注意:①、于载玻片中央滴加 封藏剂的液滴要适中, 既要使其充满盖破片,又要注意不致使盖破片浮动或使液 滴从盖片下外溢。②、材料置于封藏剂中之后,要用镊子或解剖针进行调理,使 其充分展平或分散。③、覆盖破片时,要用右手的拇指和食指夹持盖玻片的上下 相对边,或用镊子挟住其一瑞,先使盖玻片的一边贴近封藏剂的液滴,然后徐徐 放下盖破片,在此过程,如材料中存有气泡,覆盖盖玻片时,要注意将其逐渐排 出材料之外,或自盖片中排除。当载玻片被夹持的一边将贴近盖玻片时,则可放 手或抽出镊子,使其自然轻轻覆盖。 4.染色 用徒手切片法获得的切薄材料,如果仅仅是为了临时观察,制 成临时装片即可, 这种临时装片既可识别其结构, 又可观察到植物体本来的原色。 但为了求得更清晰地显示其细微结构及化学成分,则可以进一步染色。 常用的染色法是番红--苯胺蓝(或固绿)二重染色法,其染色步骤: (1) 将植物切片材料放入 30%酒精中,5 分钟后移入水中。 (2) 用 0.1%番红水溶液染色 12-24 小时。 (3) 倒去番红液,用清水冲洗数次后,再放回 50%酒精液中浸渍 5 分钟。 (4) 将材料从 50%酒精液中转入 70%酒精中脱色,直至硬木质化的细胞 壁呈现红色,其它部分呈粉红色或近于无色时为止。 (5) 用 70%酒精配的 1%苯胺蓝对染 2-5 分钟。若用 0.1%固绿对色,则 仅需 40 秒-1 分钟即可。此步染色,要不时地在显微镜下检视,切忌 染色过深,当木质化细胞壁呈红色,其它部分为淡蓝或淡绿色时,即 可停止。 (6) 用 95%酒精冲去多余染液,再经无水酒精脱水 6 分钟。 (7) 放入等量无水酒精+二甲苯及二甲苯中透明各 3 分钟。 (8) 用中性树胶封藏。 染色结果:木质化细胞壁呈现红色,纤维素细胞壁呈现蓝色或谈绿色。 (二) 植物细胞、组织离析标本的制备(选做) 为了解构成植物体的不同组织, 功能作用不同, 细胞构造的形态特征也不同, 常常要观察细胞的立体形态结构。 细胞立体形态结构的制备, 是经由化学药剂处理获得的,这种化学处理方法 称为离析法。即用化学药品把植物细胞壁的中层物质溶解,轻加压力,使细胞分 离、散开。经离析制备出的材料,可以作临时装片观察,也可制成永久切片长期 使用。 离析前将材料洗净。坚硬、木质化材料,先切成火柴杆粗细,长约 l 厘米的 小条。如材料系草本植物的髓、薄壁细胞、叶肉组织、就先切成小决。 具体离析方法介绍如下四种; 1、铬酸——硝酸离析法 此法适用于处理木质化的组织,可用于木材、离 析纤维析标本的制备。

方法是将切好的材料放入小瓶中,加入约为材料 20 倍的离析液,塞紧瓶塞, 置于 30-40℃温箱中。一般浸泡 1-2 天,检查材料是否已分离好,取少许置载玻 片上, 滴水加盖片后, 用解剖针轻轻敲打盖玻片, 若材料离散, 表明浸渍可停止, 用清水洗净材料后,保存于 50%酒精中,以备随时观察用。如经检查材料仍未 离析好,则可换新离析液,再放置 1-2 天。观察木材中的导管、管胞、木纤维、 薄壁细胞的立体形态,即可用此法离析。 铬酸--硝酸离析液的配制方法:10%铬酸加 10%硝酸(1∶1),混合后使 用。 2、硝酸——氯酸钾离析法 此法也适用于离析较坚硬的木质化材料。 材料切成与前述同样大小块,先用水煮,之后放入试管中,加入离析液至使 浸没材料,然后投入一小撮氯酸钾。如不急待使用,在室温条件下置放半月 左右时间,用玻璃棒轻捣材料,若已离析完好,用流水清洗。此法离析有氯 气放出,为防止氯气中毒,应放置通风橱内。用作离析液的硝酸浓度,可用 市场出售的浓硝酸加水(1∶1)配制。在急需离析材离时可将注入浓硝酸水 液(1∶1)的试管放入水浴锅内加热处理,并投入一定量氯酸钾。一般加热 至 60-80℃,经 15-30 分钟,即可达到离析程度。此法更须注意防止氯气中 毒。 3、盐酸--草酸铵离析法 此法较前两种方法缓和,适用于草本植物 根、茎的薄壁细胞及叶肉组织的离析。 方法是先将材料切成小块, 置于盛有酒精和浓盐酸 (3∶3) 的混合液中, 浸 24 小时后,用清水洗净,再置入 0.5%草酸铵水溶液中。浸渍时间因材 料性质不同而异,可以每隔一、二月作一次检查,以材料充分离散为止。 4.氨水离析法 此法适用于离析分生组织,观察细胞立体形状用。 将植物种子刚刚萌发的胚根沿纵向切成薄片,在浓氨水中浸 24 小时后 水洗,以染纤维素方法染色,取少许材料于载玻片上,盖上盖玻片,用解剖 针轻敲,至细胞分离,在显微镜下观察,便可观察到细胞的立体形状。 【实验报告】 列出徒手切片制作的注意事项。


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