当前位置:首页 >> 农林牧渔 >>

食品中转基因成分的检测


!分析检验

《食品科学》

&$$#, YBDO &&, )BO ^ !"

食品中转基因成分的检测
覃文
摘 要

董洁

高东微

吴宏中

广州出入境检验检疫局

/>广州

!#$%&’

本研究建立了从多种精加工和深加工食品中提取 ()* 的简便、 易操作的方法。 根据转基因农作物最常使用的

外源基因设计引物, 采用荧光 +,- . /0102341 技术, 在食品中检测出 ’!2 启动子、 )52 终止子、 16788 标记基因以及目的 基因 ,9: 和 ;+2+2 等转基因成分, 并对 +,- 产物进行测序或酶切分析确认, 防止假阳性。 关键词 转基因食品检测 食品 ()* 提取 荧光 +,- . /01<341

!"#$%&’$ =>?< <7@A: 906B97< 4 C@4D?47?E0 A07037?B1 FB9 7941<G01?3 G010< H ’!2I )52I 16788I ,9:I ’!2 J ,=+ BF ,+K ;+2+2 L ?1 69B30<<0A FBBA< M: 4 +,- . /0102341 N07>BAO * 04<: 41A 946?A FBBA ()* 0P79437?B1 41A +,- . /0102341 FB9 A07037 +,- 69BA@37< 490 @<0F@D FB9 D0G4D B9 3BNN093?4D A07037?B1 BF G0107?34DD: NBA?F?0A FBBA H /Q FBBA L O ()* +,%-# /Q FBBA (07037?B1 ;P79437?B1 FBBA ()* +,- . /0102341

由转基因植物或动物加工而成的转基因食品正 随着转基因产品逐渐商品化而不断加大在传统食品 市场中的份额。转基因食品已经逐渐走上人们的餐 桌,进入人们的食物链。在众多用于制造加工转基因

基因以及大豆、 玉米自身基因 H X037?1、 8Y- L 的扩增所 需引物 R K S 分别由上海生工和大连宝生物公司合成。 荧光 +,- 反应体系 H &!!D L 含有 QG,D&&O !NQ、 A)=+ $O &!NQ、R Z S A,=+ $O !!Q [ &!Q、引物 #$$1Q、

食品的植物原料中, 以大豆、 玉米、 马铃薯、 番茄居多, =4C 酶 $O %&!\ 和模板 #O !!G . #$!G。 +,- 反应条件见 其次还有油菜等。 表 #。+,- 扩增后的 +,- 产物, 经 "!] 解链, 在 )(* 由于转基因食品含有新的遗传物质 H )(* L 和蛋 白质,而在以往的传统食品中,这些物质或许不存 在。因此,转基因食品的出现引起了民众极大地关注 和争议。对于转基因食品而言,为了保障人类的身体 健康, 消除消费者顾虑, 有利于国际贸易和商品流通, 许多国家对其制定了安全管理条例,欧洲、日本等国 还制定了相应的法规 R # S R & S 。 然而, 要使有关转基因食品 的管理法规能得以实施,关键问题是能够有相应的科 学检测方法来分析与鉴别传统食品与转基因食品。 本研究旨在建立一种快速、简便且灵敏的、从加 工过的食品成品中直接进行外源基因检测的方法。 # #O # 材料与方法 材料 食品成品为购自超市的进口食品,部分食品成品 为送检的进口食品样品。 #O & 方法 食品成品 ()* 的提取采用改良 ,=*T 法
R’S

遗传分析仪 H ’#$ )(* /0107?3 *14D:V09I +; L 上进行片 或 断分析。余下的 +,- 产物用相应的内切酶做酶切, 进行测序,以便确认是否为目标片断。所有实验均设 有阴性对照及只加水、 不加 ()* 模板的空白对照。
表! 外源基因 ’!2 )52 检测转基因食品外源基因的 "#$ 反应条件 变性 扩增 循环数 最终延伸

"K] &$< "K] ’N?1O !K] K$< ^&] #<

K$

^&] ’N?1O

;+2+2 "!] ’$< "!] !N?1O %$] ’$< X037?1 ’!2 J ,=+ ^&] #N?1O "!] ’$< %$] ’$< ^&] #N?1O "K] #N?1O !_] #N?1O ^&] #N?1O

K$

^&] !N?1O

,9: 8Y-

"!] !N?1O

K$

^&] #$N?1O

167"

"K] ^N?1O

’!

^&] ^N?1O

或改 & 结果

良 试 剂 盒 H U?V49A /01BN?3 ()* +@9?F?347?B1 W?7 以紫外分光光度法定量。 +9BN0G4 L ,
RKS

目标基因片段的扩增,’!2 启动子和 )52 终止子 , 大豆抗草甘膦除草剂 H ;+2+2 L 基因、 玉米抗虫 H ,9: L

&O # +,- . /0102341 法检出部分食品中的 ’!2 启动 子。 H 如图 # L

I$.; )), #$; * !" )""&,

《食品科学》

!分析检验

奶粉; 豆奶; 速食面汤料; #$%& : #$’"( 薯片; #$&)* : #$&%+,: -( -./01 2$034$.5 6( 6$78389: 2$034$.。

图 ! 部分食品检测 "#$ 终止子的 %&’ ( )*+*$,-+ 峰图

); % 6<= > ?:0:@2/0 法检出部分食品中的 0D3 !标 记基因。 B 如图 % C

玉米片: 卜卜米; 油豆腐; 奶粉; #$+" : #$H% : #$+% : #$%E : -: -./01 2$034$.5 6( 6$78389: 2$034$. 。

图.

部分食品检测 /0$ 启动子的 %&’ ( )*+*$,-+ 峰图

); ) 6<= > ?:0:@2/0 法检出部分食品中的 #A@ 终 止子。 B 如图 ) C

窝窝头; 番茄酱; #$HE : #$H)( 爆米花; #$+%( 油豆腐; #$&&! : -: -./01 2$034$.5 6( 6$78389: 2$034$.;

图 / 部分食品检测 +12! 标记基因的 %&’ ( )*+*$,-+ 峰图

); E 6<= > ?:0:@2/0 法检出部分食品中 <4F 抗虫目 的基因。 B 如图 E C ); ’ 6<= > ?:0:@2/0 法检出部分食品中 G6@6@ 抗除 草剂基因。 B 如图 ’ C

!分析检验

《食品科学》

6@@", P$*< 66, #$< ? !"

罐头粟米汤; 卜卜米; 爆米花; #$%! : #$&"’ 水果麦片; #$%( : #$%" : 窝窝头; #$%& : ): )*+,- .$,/0$*; 1: 1$23/345 .$,/0$*。

图 ! 部分食品检测 "#$ 抗虫目的基因的 %"& ’ ()*)+,-* 峰图
豆腐丝; #$%&’ 窝窝头; #$N6 : #$NN’ 豆皮; ): )*+,- .$,/0$*O 1’ 1$23/345 .$,/0$*。

图 . 部分食品检出 /%+%+ 抗除草剂基因的 %"& ’ ()*)+,-* 峰图

67 !

1.8 产物的确认 在检出外源基因后,为了避免假阳性,本研究对

有的样品还作了 某些样品的 1.8 产物作了酶切实验, 测序, 以便进行确认是否为目标片断。 67 !7 " 酶切 根据各外源基因的酶切位点,选择特异性内切 酶, 对 1.8 产物进行酶切鉴定。图 ! 示转基因食品检
B+,5 "’ #$(( C3*- 1$DE50 (9: F GH,I E3J52/< B+,+ &’ #$(6 C3*1$DE50 #;: F #23I E3J52/< B+,5 6’ #$(( C3*- 1$DE50 (9: F GH,I E3J52/< B+,+ 9’ #$(6 C3*1$DE50 #;: F #23I E3J52/< B+,5 (’ #$(( C3*- 1$DE50 (9: F I,KLM+/3$,< B+,+ &’ #$(6 C3*1$DE50 #;: F I,KLM+/3$,<

出 (9: 启动子、#;: 终止子及其相对应的酶切凝胶电 泳图。 6< !< 6 测序 部分样品的 1.8 产物测序后与已知外源基因序 列比较 = 结果未显示 > , 若符合率达到 ?@A 以上, 则判 定为阳性。

图 ! 转基因植物及转基因食品 "#$ 扩增产物及酶切产物凝胶电泳图

_PN5 "", ’P5 @ !" "00%,

《食品科学》

!分析检验

# #$ %

讨论 食品中 &’( 的提取 食品成分复杂,含有多种组分,同时含有盐、糖、

度不强, 影响结果判断, 并且, 片断大小是根据电泳后 斑点的大致位置进行估计,难免存在偏差。尤其是食 品中 &’( 遭到严重破坏的情况下, 更难以检测。 有文献报道 F 8 G 琼脂糖凝胶法的检测极限可以达到 05 0%H 。由于提取的食品 &’( 在凝胶电泳图谱上看 不到条带,因此应该采用比凝胶电泳更为灵敏的方法 检测 )*+ 产物。 否则会因为灵敏度的原因而不能确定 转基因食品检测方法是否成立,造成检测结果假阴 性。 本研究首次采用荧光 )*+ 技术检测食品中转基 因成分, 由于 )*+ 产物带有荧光, 即使在 )*+ 产物含 量很低的情况下, 也能通过内标准确测出 )*+ 产物的 大小。通过灵敏度实验,)*+ I BC1C,DE1 法的检测极 限可以达到 05 000%H J 结果未显示 K 。 由于每次 )*+ 都设置了阳性对照, 因此从出峰的 位置和峰形上可以初步判定是否为目标峰。当样品峰 与阳性对照峰相差几个碱基时,凝胶电泳的图谱上看 不出区别 J 结果未显示 K , 但在 )*+ I BC1C,DE1 的峰图 上可以看到两者明显的差别,经酶切证实不是目标片 断, 由此可以避免假阳性。 以 BC1C,DE1 法代表传统的凝胶电泳法检测 )*+ 产物,即可以减少操作人员接触溴化乙锭 J ?. K 的机 会, 也有利于环保。 #5 8 检测玉米、 大豆本身基因的作用 由于食品成品有可能同时含有几种转基因的原 检验者判断所检出的外源基因是来自于玉米还是大

油、 香料或酸, 加工过程中的煎、 炸、 煮、 烤等工艺又使 原料的 &’( 受到不同程度的破坏,其提取一直被认 为是个难题。因此, 为保证 )*+ 等下游实验的顺利进 行, 提取纯化 &’( 是整个研究的关键。 食品各组分基因组 &’( 的提取,我们分别采用 经过改良的 ,&, 法、 *-(. 法以及试剂盒法。经比较, 所提取的 &’( 纯度不好, 故放弃。 改 ,&, 法较为繁琐, 良后的 *-(. 法和试剂盒法均可以提取到比较纯的 &’(,/&"!012 3 /&"4012 为 %5 !6 7 "5 0,虽然改良 *-(. 法成本较低, 但改良 *-(. 法所提 &’( 的得率远远低 于试剂盒法,操作步骤亦比试剂盒法多,某些步骤还 要求 89 离心。 试剂盒法操作较简单, 不需使用有机试 剂, 且能保证试剂批次间的质量。 #5 " )*+ 扩增时引物的选择 考虑到食品中使用最多的原料是大豆、玉米、马 铃薯及番茄,而这四种已经商品化的转基因产品绝大 部分使用的启动子、终止子及标记基因分别为 #6,、 初筛检验就以 #6,、 ’/,、 1:;<<。因此, ’/,、 1:;<< 作为 检验指标。抗虫基因主要集中在玉米和马铃薯两个品 种, 食品中只要含有玉米、 马铃薯的成分, 则要进一步 检测、 某 *=> 目的基因。大豆主要含有抗除草剂基因, 玉米成分的食品应检测 ?),), 目的基因。 所提取的 &’( 呈碎片状,大小从几十到数百碱基不 等,因此选择引物时,必须考虑到该引物所扩增出的 )*+ 产物的片断大小不能太大,否则很可能由于引物 不合适而未检出外源基因,造成假阴性。本研究所采 用的引物, 最大扩增片断为 80@A:, 绝大多数在 "60A: 以下。为保证检出率, 避免假阴性, 每个外源基因均设 置大小不同的两对引物,根据食品的加工程度,选择 引物。 #5 # BC1C,DE1 法检测 )*+ 产物 通常目标基因的检测, 是在 )*+ 完成扩增后, 以 琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增片断是否为预期的长度大 小。由于琼脂糖凝胶电泳在 &’( 含量较低时, 斑点亮

些转基因玉米也含有抗除草剂基因, 所以, 含有大豆、 料。检测玉米、 大豆本身基因, 在某些情况下, 有助于 加工工艺等因素使食品成品中的 &’( 被破坏, 豆。
参考文献

% " # 8

/LLMDMEN OPQ=1EN PL ;RC ?Q=P:CE1 *P22Q1M;MCS5 %TT@ , U8# , % 7@ /LLMDMEN OPQ=1EN PL ;RC ?Q=P:CE1 *P22Q1M;MCS5 %TT4 , U%6T , 8 7@ 王关林, 方宏筠 5 植物基因工程原理与技术 5 北京: 科学出 版社, %TT45 !00 7 !0"5 *E=PN>1 &5 VQ=S;W (1XQS Y1MXR;W <E1 O5 .=QDC5 )*+ ZC;CD;MP1 PL XC1C;MDENN> 2PZMLMCZ SP>E E1Z 2EM[C M1 LPPZS;QLLS5 \PNCDQNE= .=CC] ZM1XW %TTTW 6^ 6@T 7 64!5

6

_PNNC1RPLC= ,W .Q=X YW ,DR2MZ; OW C; EN5 BC1C;MDENN> 2PZMLMCZ P= XE1MS2S M1 ‘PPZ I ,D=CC1M1X E1Z ,:CDMLMD &C;CD;MP1 A> )PN>2C=ESC *REM1 +CED;MP15 O5 (X=MD5 ‘PPZ *RC25 %TTTW 8@^ 60#4 7 608#5


相关文章:
转基因食品的认识及其检测技术
现在,就什么是转基因食品, 如何检测转基因食品,我国大众对于转基因食品的认识...例如,人类培育转基因牛,然后在牛奶中提取转基因成分,用于医学或 者药学方面的...
荧光定量PCR检测转基因食品DNA
项目: 项目分类: 农产品中转基因成分定量检测检测范围: 大豆、玉米、水稻、小麦、马 铃薯、木瓜、油菜等常见农作 物 食品、调味品中转基因成分检测 普通食品...
转基因食品快速检测试纸的检测原理
转基因食品快速检测试纸的检测原理一、转基因食品快速检测试纸简介概述: 托普云农转基因食品快速检测试纸用于快速检测种子或植物叶片等样品中 的转基 BtCry1Ab/1Ac,...
PCR扩增反应在食品转基因成分鉴定中的应用
PCR 扩增反应在食品转基因成分鉴定的应用 转基因生物(GMO)的检测在农业与食品工业中的用途十分广泛。学术界对转基因生物 的观点各不相同,一方面可以利用转基因...
食品重金属添加剂及食品相关产品检验检测标准(2012年4...
食品重金属添加剂及食品相关产品检验检测标准(2012年4月10日整理)_环境科学/...油菜籽中转基因成分定性 PCR 检测方法 马铃薯中转基因成分定性 PCR 检测方法 ...
进口农副产品的转基因检测
可以用于加工食品中转基因玉米成分及品系的定性检测, 也可以作为常规PCR定 性方法的确证试验方法。 关键词:转基因;实时荧光PCR;基因芯片;定性检测 I Abstract ...
转基因食品检测技术应用探究
现在社会对其的忧虑有二点: 通过生物技术产生的新食品成分、 食品添加剂对人体...对食品 中转基因含量的多少加以限制,转基因原料和食品的检测技术是必不可少...
微生物生物技术在食品安全检测中的应用
而基因探针技术、PCR 技术、免疫学技术等 作为现代生物学技术手段应用于食品微生物或食品中转基因成分的检测 ,克服了传统食品安全检 测方法的缺点和不足 ,而且还...
转基因食品标准化探讨
中转基因成分定性 pcr 检测方法 sn/t 1202—2010 食品中转基因植物成分定性 pcr 检测方法 sn/t 1203—2010 食用油脂中转基因植物成分实时荧光 pcr 定性检测方法...
转基因技术
(qualitative detection)对样品中转基因成分进行检测, 以判定该样品是否为转基因...生活中最常见的几种转基因食品包括:大豆及以大 豆为原料的制品如豆腐、豆油等...
更多相关标签:
转基因成分检测 | 转基因成分 | 已不再含有转基因成分 | 食品药品检测中心 | 食品药品检验检测中心 | 食品检验检测中心 | 食品检测中心 | 国家食品检测中心 |