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制作石蜡切片的注意事项


试 验 研 

希 作石赔◆  的汪意事项  I j 乃
郝 肖赘 
( 山西农 业大学 研 究生学 院 ,太谷 00 0 ) 3 8 1 
DO I1 . 9 9 J I SN. 6 1 6 2 . 0 9.5. 1   : 03 6 /. S 1 7 — 0 72 0 0 0 5

石 蜡 切 片 是 组

织 学 常 规 制 片 技 术 中最 为 广 泛 应 用 的方 

伤。  

法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织 的形态结构 , 也是  病理学和法医学等学科用以研究 、 观察及判断细胞组织 的形  态变化的主要方法 , 而且也 已相 当广泛地用于其他许多学科 
领域 的研 究 中 。   石 蜡 切 片 法包 括 取 材 、 固定 、 涤 和脱 水 、 明 、 蜡 、   洗 透 浸 包

1  固 定 . 2  

用适 当的化学药液—— 固定 液浸 渍切成小块 

的新鲜材料 ,迅速凝 固或沉淀细胞和组织 中的物质成分 、 终  止 细胞 的一 切代 谢过程 、 防止细胞 自溶或组织 变化 , 可能  尽

保持其活体时的结构。固定能使组织硬化 , 有利 于切片的进 
行, 而且也有媒浸作用 , 有利于组织着色。   固定操作要求 : 固定 液量 : 为标本总体积 的 l 5倍 ; 固定  时间 : 小标本如小 鼠、 大鼠等动物 的组织器官 比较柔软细嫩 ,   应将 整个 内脏器官投入 固定液 中整体 固定 4 6 ,待组织稍  ~h 硬 化后再取材 ; 其它动 物脏 器离体后可立 刻取材 , 取好 的组  织 立刻投入 固定液 中固定组织 6 1h ~ 2 ;组织块取材 大小 以  5 mx m 3 m为宜 , m 5 mx m 固定温度控制在 2  ̄ 固定时要注意  5C。

埋、 切片与粘 片、 脱蜡 、 染色 、 脱水 、 明 、 透 封片等步骤。 一般 的 

组织从取材固定到封片制成玻片标 本需 要数 日, 但标本可 以 
长期保存使用 , 为永久性显微玻片标本 。  
1 石蜡 切 片 制 作 各步 骤 的 注 意事 项   

11 取 .



应根据要求选取材料来源及部位 。  

取材不 当易造成人为挤压组织 以至组织成分难辨 , 因此 
取 材 要 避 开 脂 肪 组 织 、 死 组 织 或 血 块 ; 材 时 应 用 锋 利 的  坏 取

组织在 固定液中的位 置 , 并且随时翻动组织 , 使其充分固定 。  
组 织固定过程中如果 固定 液变为深棕色或红色应 更换固定 
液。  

刀、 , 剪 刀刃宜薄而长 。 切取组织 时一般从刀的根部开始向后  拉动切开组织 , 避免用钝刀前后拉动或用力挤压组织。用镊 
子 夹 取 组 织 时 动 作 应 轻 柔 , 宜 过 度 用 力 , 避 免 使 用 有齿   不 应

1 洗涤与脱水 . 3

固定后的组织材料需除去 留在组织 内的 

镊 , 则会挫伤或挤压组织 , 否 引起组织 结构的挤压变形 和损 
23 刺五 加 浓 缩 液 对 小 鼠肝 糖元 的影 响  _ 表 3 刺五 加 浓 缩 液 对 小 鼠肝 糖 元 的 影响 

固定液及其结晶沉淀 , 否则会影响以后的染 色效果 。多数用  后, 其小 鼠运动后血乳酸曲线 下面积高剂量组有下降 , 经统  计学处理 , 高剂量组与两个对 照组 比较均有显著性差异( < p  00 )说 明刺五加浓缩液能降低血乳酸 。 . , 5  
3 讨 论 

本实验结果 表明 , 口给予小鼠不 同剂量 的刺五加浓缩  经 液 3 d后 , 0 能延长小 鼠负重游泳时间; 减少肝糖元消耗量 ; 对  运动时血清尿素水平无影响, 对小 鼠运动后血乳酸升高有抑 

制作用。因此认为 , 刺五加浓缩液在提高机体对运动负荷的 
注 : 与 阴性 对照 组 比较 p O 5 / 与糖 对 照 组 比较 p O0     < . ;k 0 < .5

适应能力 , 延缓疲劳的产生和加速疲劳 的消除方面有很明显 
作 用 。并且 可 以开 发 刺 五加 保 健 饮 品 。  

由表 3可 见 , 口给予 小 鼠不 同剂 量 刺 五 加 浓 缩 液 3 d 经 0 

后, 、 高 中剂量组能够减少肝糖元 的消耗 , 经统计学处理 , 高  剂量组与两个对照 比较均有显著性差异 ( P<00 ) . 。 5  
24 刺 五加 浓缩 液 对 小 鼠血 乳 酸 的 影 响  .
表 4 刺 五 加 浓 缩液 对 小 鼠 血 乳 酸的 影 响 
刺  动物 数  湔  圳 m乳 游淋 h m乳酸  游泳  2 mi    0 n m  m乳 酸曲线 F㈣ 私  L !

参 考文 献 
[】张东杰等 、 1 刺五加茶饮料抗疲 劳作用的实验研究[】 J. 营养学报 ,  
2 0 .5 3)3 9 1  0 32 ( :0 —3 1

[]潘翔等. 2 刺五加抗疲劳功能实验研究的进展f_ J实验动物科学与  】
管理 ,0 52 ( ) 9 4   2 0 .2 2 : — 3 3

( k ) ( ) 峨  请I   )   g      mgL 

督(  1 m )  

乳酸   ̄( / ) 1mgL 

[ 3 ]曲中原等. 五加总甘抗疲劳实验研究【 . 束 4 J 中国现代实用医学  】
杂志 ,0 4 (9、0) 2 2   2 0 .3 1 2 : — 5 2

注 : 与 对照 组 比 较 差 异显 著 p O0 ;△与糖 对照 组 比较 p O0 ;   < .5 < .5  

由表 4可见 , 经给予小 鼠不同剂量 的刺五加浓缩液 3 d 0 

20 9 年 第 5期   0

试 验 研 究  
流水 冲洗 ; 使用 含有 苦味酸的固定 液固定的则需用酒精多次  吸除多余水分 , 载玻 片放入 4  ̄温箱 中干燥 , 将 5 C 也可 在 3 ℃  7 温箱 中干燥 , 但需适当延 长时间。   1 切 片脱蜡及 水化 . 8 干燥后 的切片需脱蜡及水化才 能在  水溶性染液 中进行染色 。   用二 甲苯脱蜡 ,再 逐级经纯 酒精及梯 度酒精直至蒸馏  水 。如果染料配 制于酒精 中, 则将切 片移 至与酒精 近似浓度  时, 即可染色。  

浸洗 ; 如果组织经酒精或酒精 混合 液固定 , 则不必洗涤 , 可直 
接进行脱水 。  

脱水容易出现的问题主要是脱水不净和过度硬化 , 要控  制过度硬化只需 调整好各 步骤 的脱水时间。 若组织脱水不净 

时 , 成随后的透明和浸蜡过 程中二甲苯和石蜡液无法渗人  造
组织 , 所以应保证脱水液的浓度 , 并经常更换新液。 脱水时间  长短应根据组织厚度 , 组织较 薄或 小 ,Hb鼠 、  ̄- t' 大鼠组织块柔  软 细嫩 , 脱水 时间不宜过长 , 否则 组织会 出现过硬或 过脆 的  现象 ; 组织 厚度 大时相对 要求 时间长些 。透 明要求在肉眼观  察组织呈棕黄色或暗红色透 明状( 珀样) 琥 即可。   1 透  明  纯酒精不能与石蜡相溶 , - 4 还需用能与酒精和石  蜡相溶 的媒浸液 , 替换 出组织 内的酒精 。材料块在这类媒浸  液 中浸渍 , 出现透明状态 , 此液 即称透 明剂 , 透明剂浸渍过程 
称透明 。  

1 染  色 染色 的 目的是使细胞组织 内的不同结构呈现  . 9 不 同的颜色 以便 于观察 。未经染 色的细胞组织 其折光率相 
似, 不易辨认 。经染色可显示细胞 内不 同的细胞器及 内含物  以及不 同类型 的细胞组织 。   染 色时要 注意三点 , 1染色时最好用显微镜观察 , () 以便 
及 时纠 正 。 2 酸 酒 分 化 要 掌 握 好 时 间 , 短 , 着 色 过 深 , () 过 核 过 

长, 核着色发灰 。返蓝 时最 好不用弱碱水 , 而用温水返蓝 5   ~

1mi 0 n即可 , 这样可避免切片褪色 , 以利于切片长久保存 。3  ()
切 片染色时要彻底 脱蜡 , 冬季室 温较低 , 一定要 延长脱蜡时  间, 以免出现组织灶状着色不 良。   1 0 切 片脱水、透明和封 片 染色后的切片 尚不 能在显微  . 1  

透 明时要注意 : 要保证最后一级纯酒 的浓 度 , ① 使组织  彻底脱水 , 否则在二 甲苯 内就不能得到完全透明 。② 切片从  纯酒取 出后进入二 甲苯时 ,在空气 中停 留的时间不宜过长 ,   特别是在阴天 , 空气湿度较大 时 , 因纯酒吸水性较强 , 致使 切  片进入二 甲苯时其表面 出现雾状而使切片透明不 良。   1 浸蜡与 包埋 . 5 用石蜡取代透明剂 , 使石蜡浸入组织而起  支持作用。浸蜡要求掌握时间 , 短石蜡没有 完全渗 入组 织  过 中, 会出现组织过软 , 切片困难 。过长会造成组织硬脆 , 片  切 也难。组织包埋 时要掌握 好标 本切面 , 选择较完 整平坦 面为  切面 , 切面朝下 。 小标本包埋速度应快 , 否则易造成组织块 与  周 围石蜡的脱裂 , 包埋好 的蜡块放置 6 ℃冰箱 中过夜 , 便于切  片 。以上操作过程 , 我室采用全 自动脱水机完成。   1 切 . 6 片 包埋好 的蜡块 用刀片修成规整 的方形 或长方    形, 以少许热蜡液将其底 部迅速贴 附于小木块 上 , 夹在轮转 

镜下观 察 , 经梯 度酒精脱 水 , 9 %及 纯酒精 中的时间可  需 在 5
适 当加 长以保证脱水 彻底 ; 如染液 为酒精配制 , 则应 缩短在 

酒精 中的时间 , 以免脱色 。 二甲苯透 明后 , 迅速 擦去材料周围  多余液 体 , 滴加适 量( ~ 1 2滴 ) 中性树 胶 , 再将 洁净盖玻 片倾  斜放下 , 以免出现气泡 , 片后 即制成永久性 玻片标本 , 封 在光 
镜 下 可 长 期 反 复 观察 。  

切片封 固不 良, 易出现色素颗粒 、 气泡 、 云雾状物等 。其 
原因大致为 : 固时二甲苯已挥发完毕 ; 固剂过稀 ; 封 封 切片厚 

薄不匀 ; 片未展开 ; 固方法不 当; 切 封 组织脱水不净等 。故在 
封 固前 , 当二 甲苯 挥发后应 重新 放人 到二甲苯 中透 明 , 固  封 剂浓度要适 当, 封固时先将 盖玻片一侧 放置于滴有树胶的组  织 切片上 , 然后缓慢放下将空气完全排除避免产生气泡 。  
2 小 结 

式切片机 的蜡块钳内 , 使蜡块切面与切 片刀刃平行 , 旋紧。 切 
片刀不锋利和切片机性能较 差会严重影响切片质量 。 切片 刀  要求锋利且无缺 口,切片 自行卷起 多由切 片刀不锋利所致 。   刀有缺 口时 , 易造成断裂 、 破碎 和不完整 。 片时组织块 固定  切 不牢时 , 切片上常形成横纹及切片厚薄不均 。因此 刀放置 的  倾 角以 1。 2 。 0~ 0为宜 , 刀刃与蜡块表面呈 5夹角 , 。 在夏季切片 

制 作优质石蜡切片 , 虽然难度不大 , 但其操作较繁琐。制 
作 过程 必需 以人 的因素为关键 , 技术人 员的敬业 态度 和严格 

操 作规 范程序至关重要 。 每一步 骤都关系到下一步骤的顺利 
进行乃 至于切片的最终 质量 , 把握好每个 步骤并认 真的做好  各项工作 是提高切片质量的根本保正 。出现问题时 , 解决 了 

时, 为保持 蜡块 硬度 , 可把蜡块 放于冰箱 中 , 时取出 , 切 组织  蜡块 四周在切片前应修 齐。切片厚度调整为 5 6 , 轮转式  -1 a m,
切 片机 切 取 组 织 时 是 由下 向上 切 , 为得 到 完 整 的切 片 , 止  防

上述石蜡 切片制作中的问题 以后 ,在实践 中摸索 总结 , 断  不
汲取新 的知识才能制作出高质量的切 片。  
参 考 文献 

组织 出现刀纹 、 裂缝 , 应将组 织硬脆难切 的部 分放 在上端f 如  皮肤组织应将表皮部 分向上而 胃肠组织浆膜 面朝上) 证  ,保 切片的完整性 。 对于组织结构致密 的组织如淋 巴结等应适 当  薄切以防细胞 成分叠加 , 影响观察效果 。 遇到硬化过度 的肝 、   脾、 脑等组织时应轻轻 切削 , 防组织 由于震动 产生空洞现  以
象。  

【1 l 路健等. 石蜡切 片制作 中的问题与解决【. J基础医学教育. 0 , J 2 73 0  
()2 5 3 :6   【] 志清等. 2谭 浅谈影响石蜡切 片质量的原因分析及对策I_ J丹东医  1 药 . 0 6,( )3 — 7 2 0 4 1 :6 3 

1 贴 片与烤片 用粘附剂将展平的蜡 片牢 附于载玻片上 , . 7     以免在以后 的脱蜡 、 水化及染色等步骤 中二者滑脱开 。粘 附  剂 是 蛋 白甘油 。  

首先在洁净 的载玻 片上涂抹 薄层蛋 白甘油 , 再将一定长 
度 蜡 带 ( 续 切 片 ) 用 刀 片 断 开 成 单 个 蜡 片 于 温 水 ( 5 左  连 或 4 ̄ C

右) 中展平后 , 捞至玻片上铺正 , 或直接滴两滴蒸馏水于载玻  片上 , 再把 蜡片放 于水滴 上 , 略加温使蜡片铺展 , 最后用滤纸 
●蟹  

20 09年 第 5期  


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