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淡紫拟青霉NH


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植物保护   31 卷第 3 期 ( 2005)   PLAN T PRO TECTION   第 Vol. 31 No. 3 ( 2005)

面 ,来完成各种相关的查询 、 专题图绘制 、 生态学分 析及图形化显示等操作 。要开发更加完善的系统 , 准确的数据 、 科学的方法和严密的结构设计都是必 不可少的 。


参考文献
[1]   王人潮. 农业资源信息系统[ M]. 北京 :中国农业出版社 ,2000. [2]   闫宏娟 , 李典谟 . 地理信息系统及其在昆虫生态学中的应用 [J ] . 昆虫知识 , 1999 , 36 (1) :41~44.

( 1. 福建农林大学植物保护学院 , 福建 福州   350002 ;   福建农业科学院生物技术中心 , 福建 福州   2. 350003)

摘要   观察淡紫拟青霉菌在不同培养基上的生长状况 ,研究淡紫拟青霉菌在不同培养基上的生长特性及对茎线虫 的毒力 。结果表明 : 不同培养基对淡紫拟青霉 N H2PL203 菌株的生长特性有明显影响 。在孟加拉红 、 PDA 和察氏培 于动态增长趋势 ,而且不同培养基产孢量大不相同 ; 在察氏和燕麦培养基上产孢量最大 ,培养 8d ,产孢量分别达到 力较高 ,对茎线虫的最高校正死亡率达到 43. 44 % 。
36. 90 × 6 / mL 和 35. 51 × 6 / mL ; 培养液滤液的毒力随淡紫拟青霉培养时间延长而升高 ,在察氏培养基培养毒 10 10

养基上 ,菌丝量增长最为显著 ,培养 8d ,菌丝量分别达到 0. 80 、 73 g/ 50 mL 和 0. 70g/ 50 mL ; 培养过程产孢量处 0.

关键词   有害生物生物防治 ;   淡紫拟青霉 ;   培养基 ;   生长特性 ;   毒力 中图分类号  S 47612
[4 ]

Abstract  The OD value , p H value , dry weight of mycelia , sporulation and toxic affect on nematode in the process of culture

have been investigated to studied the growing characteristics on different media. Result showed that Paecilomyces lilacinus could

grow normally on all tested media. Best mycelia growth occurs on the media of Martin & Johnson ,PDA ,and Czapek , cultured

8d ,the dry weight of mycelia could reach 0. 80g/ 50ml ,0. 73g/ 50ml and 0. 70g/ 50ml respectively ; The maximun sporulation of 36. 90 × 6 / ml produced on Czapek media ,the next was oat media (35. 51 × 6 / ml) . The filtrate has significant toxic effects on 10 10
Ditylenchus dest ructor Thorne , the revised mortality of treated juveniles increase along with culture continues , the maximun. re2
[1 ]

vised mortality of D. dest ructor treated by filtrate from Czapek media was 43. 44 %.

  淡 紫 拟 青 霉 [ Paecilom yces lil aci n us ( Thom. )
Samson ] 是重要的植物线虫生防菌

在优 化 淡 紫 拟 青 霉 培 养 条 件 方 面 已 有 许 多 研

究 [ 1~3 ] 。Zaki2FA 研究表明 : 不同液体培养基或不 的是麦芽浸膏培养基 。培养基是菌体生长繁殖的

同培养条件会导致菌液毒性的差异 , 最具杀虫毒力

收稿日期 :   2004 - 11 - 15 基金项目 :   国家 863 计划项目 (2002AA244031 - 2) ; 福建省计委项目闽计投资 ( [ 2003 ]170 号) . 3 通讯作者

Key words   pest bio2control ;  Paecilom yces lilaci nus ;   media ;   culture characteristics ;   toxic effect

? 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.

2 L 淡紫拟青霉 NH P 203 菌株在不同培养基上 的生长特性
Gro wing characteristics of Paecilomyces lil aci nus ( Thom. ) Samson
( 1 . College of Plant Protection , Fujian U niversity of A gricult u re and Forestoy , Fuz hou   350002 , Chi na ;

2 . B iotechnology center of Fujian A cademy of A gricult u ral Sciences , Fuz hou   350003 , Chi na)

李  1,  芳 黄素芳2 ,     2 3 刘 波 2 NH PL203 on different media
L I Fang1 ,  HUAN G Su2fang2 ,   IU Bo2 L

物质基础 ,培养基成分与配比对微生物的生长发育 、 物质代谢都有很大影响 [ 5 ] 。本研究采用 7 种常用真 菌培养基培养淡紫拟青霉 , 以淡紫拟青霉菌株 N H2 子量 、 毒力为指标 ,比较分析淡紫拟青霉在不同培养 基上的生长特性 , 旨在为淡紫拟青霉菌剂的工厂化
PL203 培养过程发酵液的 OD 值 、H 、 p 菌丝重量 、 孢
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。国内外学者

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生产提供科学依据 。

亡数量 ,采用盐刺激法 ( 加 10 %NaCl 溶液) 判断线虫 的死活。设清水对照 ,3 次重复 ,计算甘薯茎线虫校正 死亡率。3 次重复 ,采用清水对照。

1  材料与方法
1. 1   材料

根结线虫的番茄根围分离得到 。 供试 线 虫 : 甘 薯 茎 线 虫 ( Ditylenchus dest ruc2 tor ) 由福建省农业科学院生物技术中心农业环保 技术研究室提供 。
1. 2   方法 1. 2. 1   供试培养基配方 (1) 孟加拉红 ( Martin & Johnson) 培养基 : KH2 PO4 1. 0g 、 MgSO4? 2 O 0. 5g 、 7H 蛋白胨 5. 0g 、 葡萄糖10. 0g ; (2) PDB 培养基 :马铃薯 250g ; ( 3) PDA 培养基 : 马铃

薯 200g 、 葡萄糖 20g ; ( 4) PCA 培养基 : 马铃薯 20g 、 胡 萝卜 20g ; (5) 察氏 ( Czapek) 培养基 :NaNO3 3g 、 2 HPO4 K 蔗糖 30g ; ( 6) 玉米培养基 : 玉米片 20g 、 蔗糖 20g ; ( 7)

1g 、 MgSO4? 2 O 0. 5g 、 0. 5g 、 7H KCl FeSO4 ? 2O 0. 01g 、 7H

燕麦片培养基 : 燕麦片 75g 、 酵母膏 1g 。以上配方均 加入蒸馏水1 000mL ,所含天然成分 ( 马铃薯、 玉米片 琼脂即成平板培养基。

等) 均煮沸 30min 取滤液。液体培养基配方加入 15 %
1. 2. 2   培养方法与培养条件

放在平板中央 ,25 ℃ 恒温箱培养 ; 液体培养 : 将培养液 按 50 mL/ 瓶分装于 250 mL 锥形瓶中 ,用移液枪吸取 置为 25 ℃,110 r/ min ,培养 2d 后开始取样检测。
1. 2. 3   培养参数测定

0. 2mL 新鲜孢子悬浮液于每瓶培养基中 ,恒温摇床设

清液做 OD 和 p H 分析 。OD 测定 :751 分光光度计 , 波长 620nm ;p H 测定 :p HS225 酸度计 ( 上海雷磁仪 称重 ; 产孢量测定 : 隔 24h 取样 1 次 ,每次 3 瓶 ,采用 血球计数法计数 ,取平均值 。
1. 2. 4   对线虫毒力测定

器厂) ; 菌丝干重测定 : 每隔 24h 取样 1 次 , 每次 3 瓶 ,从三角瓶中倒出所有菌液 ,滤过双层纱布 ,烘干 ,

r/ min 离心 15min ,取上清。把带甘薯茎线虫的病薯切

成 0. 15~0. 20g 小块 ,于 40 ℃ 温水中浸泡 3h ,置 4 ℃、
8 000r/ min 离心 10min , 弃上清 , 将底部的 1mL 带甘
图1  不同培养基对淡紫拟青霉菌丝生长影响

薯茎线虫的浓缩液 (约 100 条线虫) 滴入 5mL 供试上

清液中 ,25 ℃ 恒温箱置放 24h ,在体视镜下计数线虫死

供试菌株 : 淡紫拟青霉 N H2PL203 菌株 ,从染上 每次取样 3 瓶 ,8 000 r/ min 离心 10 min , 取上 培养 2d 后开始取样 ,每次取样 2 瓶 ,混匀 ,3 000

2  结果与分析
2. 1   淡紫拟青霉在不同培养基上的生长状况

试验结果见表 1 , 淡紫拟青霉在不同培养基上 呈现多样化生长状况 ,在营养丰富的培养基上 ( 孟加 拉红 ,PDA) 菌丝生长旺盛 , 菌落厚实 、 毡状 ; 在营养 ( PDB 、 ) 菌落平整 , 产孢 淡薄的植物培养基上 PCA 早 ,菌落转色快 ,颜色较深 。
表1  淡紫拟青霉在不同培养基上的生长状况
培养基种类
1. 孟加拉红 2. PDB 3. PDA 4. PCA 5. 察氏 (Czapek) 6. 玉米 7. 燕麦

生长状况及菌落形态 轮纹状厚实菌落 同心圆平整菌落 轮纹毡状菌落 松枝状放射菌落 菌落边缘波浪状 同心圆平整菌落 同心圆绒毛状菌落

颜色变化 白色 - 棕色 - 淡紫 白色 - 淡紫 - 绿色 白色 - 淡紫 白色 - 淡紫色 白色 - 棕色 - 绿色 白色 - 浅绿 - 深绿 白色 - 浅绿 - 深绿

2. 2   不同培养基对淡紫拟青霉菌丝生长的影响

淡紫拟青霉在不同培养液中生长浓度变化可通 过测定培养液 OD 值 ( 620mm ) 来表示 , 培养液 OD 值的总体变化趋势为 : 初期缓慢上升 ,4 ~ 6d 后明显 跃升 ,以后保持相对稳定 。不同培养基对 OD 值变 化有显著影响 , PDA 、 察氏 、 孟加拉红培养液 OD 值 变化趋势基本相同 ,培养 8d ,OD 值分别达到0. 720 、
0. 814 和 0. 680 。PDB 和 PCA 培养基 ,OD 值上升较

平板培养 :用滤纸片 ( 直径 0. 5cm) 沾孢子悬浮液

为缓慢 , 培养 8d ,OD 值仅为 0. 330 、 321 。燕麦培 0. 养基本身稠度高 ,因而初期 OD 值大 ,随着内含物被 消耗 ,OD 值也随之下降 ( 图 1) 。

2. 3   培养基对淡紫拟青霉发酵过程 p H 的影响

试验结果见图 2 。从总体看 ,培养过程 p H 处于
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相对稳定状态 , 大约培养 5d 菌丝进入快速生长期 ,
p H 明显下降 ,7~9d p H 有明显回升并维持在 6 ~ 7

2. 5   培养基对淡紫拟青霉产孢量的影响

试验结果见图 4 , 总体上 , 产孢量增长趋势与 菌丝干重相仿 , 培养过程产孢量处于动态增长趋 势 ,而且不同培养基产孢量大不相同 。在察氏和 燕麦培养基上产孢量最大 , 培养 8d , 产孢量分别达 到 36 . 90 × 6 个 / mL 和 35 . 51 ×10 6 个 / mL , 其 10 次 为 PDA ( 28 . 50 × 106 个 / mL ) 、 加 拉 红 孟
( 25. 80 × 6 个/ mL ) 和 玉 米 培 养 基 ( 23 . 33 ×10 6 10

之间 。培养基配方对菌液 p H 动态变化有明显影 响 。孟加拉红和 PDA 培养液 p H 变化趋势大体相 同 ,培养 5d p H 分别下降到 5. 44 和 5. 33 ,随后回升 达到 6. 80 和 6. 72 ; 而 PDB 、 PCA 培养液 p H 有明显 碱性化趋势 ,培养 8d p H 从第 2 天的 6. 50 和 6. 56 上升到 8. 12 、 88 ; 玉米和燕麦培养液 p H 有明显下 7. 降趋势 ,培养 8d p H 分别下降为 4. 78 和 5. 51 。而察 氏 p H 相对平稳 ,在 5. 99 和 7. 10 之间波动 。

个 / mL ) , 在 PDB 培养基中产孢量最少 。随着孢子 的不断产生 , 培养液色泽也逐渐加深 , 如察氏培养 基颜色从清澈透明 - 淡黄色 - 棕色 - 淡紫色 - 深 绿色 。

图2  不同培养基对淡紫拟青霉 pH 的影响

2. 4   培养基对淡紫拟青霉菌丝干重的影响

图4  不同培养基对淡紫拟青霉产孢量的影响

试验结果见图 3 , 培养过程菌丝干重总体上处 于增长趋势 ,2~4d 菌丝干重缓慢上升 ,4d 后进入快 速增长期 ,大约在第 8 天 ,达到最高值 。不同培养基 对淡紫拟青霉菌丝生长有显著影响 ,孟加拉红 、 PDA 和察氏培养基菌丝量增长最为显著 , 培养 8d , 菌丝 量分别从初始值的 0. 02 g/ 50 mL 、 02 g/ 50 mL 和 0. 0. 01 g/ 50 mL 达到 0. 80 g/ 50 mL 、 73 g/ 50 mL 和 0. 0. 70 g/ 50 mL ; PDB 、 PCA 培养基菌丝量增加较为缓 慢 ,培养 8d ,菌丝干重仅为 0. 22 g/ 50 mL 和 0. 18 g/ 50 mL 。 玉米 、 燕麦由于本身稠度高 , 虽然第 8 天菌 丝量达到 0. 68 g/ 50 mL 和 0. 52 g/ 50 mL ,但仅比初 始值增加 2. 43 和 1. 70 倍 。

体上滤液的毒力随培养时间延长而升高 。从孟加拉 红、 、 PDA 察氏和燕麦培养基得到的淡紫拟青霉滤液 毒力 较 高 , 对 茎 线 虫 的 最 高 校 正 死 亡 率 分 别 为
34. 5 % 、 10 % 、 44 %和 28. 70 % ; PCA 、 23. 43. PDB 和 14. 80 % 、 26 % 、 13. 67 % ,见图 5 。 16. 和

玉米 培 养 基 总 体 毒 力 较 低 , 毒 力 峰 值 分 别 为

以上试验从 5 个方面考察了 7 种培养基对淡紫 拟青霉培养的影响 , 结果表明培养基成分不仅影响
图3  不同培养基对淡紫拟青霉菌丝干重的影响

菌液 OD 值 、H 与生物量 , 也影响菌液次生代谢物 p
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2 2. 6   培养基对淡紫拟青霉 NH PL203 菌株毒力的
图5  不同培养基淡紫拟青霉培养液对甘薯茎线虫毒力

影响    不同培养基对淡紫拟青霉毒力有明显影响 , 总

3  小结与讨论

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对线虫的毒力 , 而且从感观上此菌在不同培养基上 的生长也呈现多样性 , 这说明淡紫拟青霉具有生态 可塑性 。 相对而言 , 营养丰富的培养基如 PDA , 孟加拉 红有利于菌丝生长 ; 含天然成分的培养基 ( 燕麦 ) 有 利于产孢 ; 富含无机盐离子的察氏培养基 ,比较有利 于毒素产生 ; 单纯马铃薯浸出液 ( PDB ) 生长缓慢且 毒力最低 。这与张青文研究结果无机盐成分与拟青 霉属的毒素形成有密切联系较为符合
[6 ]

terials and Paecilomyces lilaci nus [ J ] . Bioresoune Technology , 1997 , (61) :247 - 250. [ 2 ]   2Laban A Z , Saleh H M. Evaluation of animal manures for Abu parasitic fungi[J ] . Nematologica ,1992 , (38) :237 - 244. [3]   Lopez M Z , Ayas M A , Fraga M , et al . Evaluation of different de Proteccion Vegetal , 1992 , (7) :31 - 33. logical Control ,1989 , (3) :56 - 58. gia2Mediterranea , 1991 ,19 (2) :211 - 212. 1992. 255~259.

[4]   Zaki F A , Bhatti D S. Effect of culturae media on sporulation and

。虫生真菌
[7 ]

毒力代谢产物构成和来源复杂多样 ,既有内毒素 ,又 有外毒素 ; 既有稳定毒素 , 又有不稳定毒素
, 同时

[5]   Mani A , Anandam R J . Evaluation of plant leaves , oil cakes and agro2industrial wastes as substrates for mass multiplication of t he

外在影响因子也十分复杂 ,可以说 ,淡紫拟青霉菌液 对甘薯茎线虫毒力的不稳定状态正是这些因素的综 合体现 。因此 , 要深入了解毒力代谢物的生成与组 成规律 ,不仅要研究其产生的营养条件 ,还必须对毒 力代谢物质的生成进行更加系统的定量研究 。

[6]   张青文 ,罗 科 ,郑应华 ,等 . 一株拟青霉代谢产物防治棉蚜的研

参考文献
[ 1 ]  Khan T A , Saxena S K. Integrated management of root knot ne2

[7]   Cayrol J C , Djian C , Pijarowski L. Study of the nematocidal properties
nus [J ] . Revue de Nematologia ,1989 , (12) 331 - 336.

我国新疆和东北三省发生稻米黑斑病
赵廷昌1 ,   梁乃亭2 ,   孙福在1 ,   洪玉梅1 ,     1 刘 鹏
2. 新疆农业科学院核技术生物技术所 , 新疆 乌鲁木齐   830000)

( 1. 中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室 , 北京   100094 ;

   近年来 ,我国新疆温宿县 、 黑龙江方正和五常县

状相似 , 日本称为黑蚀米或尻黑米。刘水芳等 (1997)

和辽宁辽阳县的稻粒上发现一种细菌性黑斑病 , 稻 米胚乳组织表面有黑 ( 褐) 色斑点 ; 病斑仅在米粒上 颖壳表面没有病斑 ,在强光照射下 ,颖壳表面可隐约 透出米粒上的黑斑 ,病斑的位置一般在稻米中部 ; 病 斑长 1~3mm , 宽 0. 5~1mm ; 米粒上也发现有黑环 正常米粒略小 , 病斑处易破碎 。

报道 ,1993~1996 年天津发生稻米细菌性黑斑病 ,病粒 率 15 %以上 ;童蕴慧 ( 1998) 报道 ,1997 年江苏省发生 , 病粒率 3. 3 %~8. 3 %。
2003~2004 年作者分离了新疆、 黑龙江和辽宁省

斑呈圆形或椭圆形 , 直径 1 ~ 2mm , 也有线形的 , 病 斑 , 横绕米粒 。病斑深度一般到胚乳为止 , 病粒比 根据调查 ,稻米黑斑病在新疆南北疆都有发生 ,

采集的病米粒 ,获得了 30 多株 ,经鉴定 , 初步认为病原 菌为 Erwinia 原 herbicola 群细菌 ,主要有草生欧文氏菌 ( Erwinia herbicola = P. agglomerans) 和菠萝欧文氏菌
( E. ananas) 。刘水芳等 (1997) 鉴定病原菌为草生欧文

氏菌 ( Erwinia herbicola) 。童蕴慧等 (2001) 研究也认为 该病病原菌可能是 E. herbicola 。 稻米黑斑病已成为严重影响稻米品质的重要因素

南疆多于北疆 。阿克苏多于其他地区 , 发病率在

1 %~5 %之间 , 最多的达到 10 % 。调查中发现 , 一

般老稻田发病多于新稻田 ,烂泥田多于透气田 ,早熟

之一 ,由于近几年稻米黑斑过多 ,致使新疆稻米失去了 市场竞争能力 ,出现了米价格低、 销售难的严重局面。 大大影响了新疆稻农的种稻效益和种稻积极性 ,进而 影响到新疆优质稻米产业的发展和产业化进程。对该 病发生规律需进行研究 ,并制定综合防治方案。
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品种多于晚熟品种 , 插秧田多于直播田 。仅因为稻 米黑斑的原因 , 大米的销售价格至少降低 0. 2 元/ kg ,降低收入 70~80 元/ 667m2 。 水稻黑斑米与岩立 (1931) 描述的水稻粒黑腐病症

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of the culture filtrate of the nematophagous fungus Paecilomyces lilaci 2

its efficacy against Medloi dogy javanicai n tomoato [J ] . Nenatolo2

究 [ A ] . 中国生态学会青年研究会 . 北京农业大学有害生物综 合防治研究所 , 青年学者论丛 [ C ] . 北京 : 中国科技出版社 ,

nematophagous fungus , Paecilom yces lilaci nus [J ] . Journal of Bio2

matode Meloi dogy ne javanica infecting tomato using organic ma2 mass production , storage and application of some nematode egg media in t he reproduction of Paecilomyces lilaci nus [ J ] . Revista


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