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猪的人工受精操作标准


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人工受精操作标准

青岛正大农业发展有限公司

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前言

人工授精可以提高优良种公猪的利用率,促进种猪的品种品系改良和商品猪生产 性能的提高;同时克服公,母猪体格大小的差别,充分利用杂种优势;减少疾病的传播,节 省人力,物力,财力; 人工授精虽有以上好处,但如果本身生产水平不高,技术不过关,很可能会造成母猪 子宫炎,受胎率低和产仔数少的情况,反尔降低了经济效益; 本手册详细介绍人工受精的操作流程,希望对猪场人工受精工作起到作用并使得工 作朝着标准化和效率化前进;

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一.采精 采精前的准备 1. 配制稀释液 按稀释剂配方称出所需的化学试剂备用,取蒸馏水加入盛放稀释液的容器内达 2000ml(一次制作稀释液 2000ml),塞紧瓶口后,放进消毒蒸锅,开水后蒸煮 30 分钟消 毒,冷却后加入提前称量的化学试剂,充分溶化,摇匀,备用;(当天制作的蒸馏水使用 前不用放消毒蒸锅内消毒) 稀释液使用前,应添加抗生素,搅匀后即可使用;添加抗生素的稀释剂可在实验室保 存 3 天;超过 3 天的应丢掉,重新配制; 稀释液的配方: 1.氯化钾 1.5 克,2.碳酸氢钠 2 克,3.乙二胺四乙酸二钠 2 克,4.柠檬酸三钠 12 克,5. 无水葡萄糖 74 克;另一种配方是 1.碳酸氢钠 2 克,2.乙二胺四乙酸二钠 4.7 克,3.三 羟甲基氨基甲烷 11.3 克,4.柠檬酸 5.8 克,5.柠檬酸三钠 13.8 克,6.无水葡萄糖 55 克; 抗生素的使用 2000ml 稀释液中添加 2 支青霉素(160 万单位/支),2 支链霉素(100 万单位/支);也可 以添加人用庆大霉素 200 万单位(8 万单位/支,需用 25 支);还可以加硫酸锌霉素 4 克;抗生素每 3 个月更换一次; 稀释液的作用: (1) 增加精液的数量; (2) 为精子提供合适的生存环境和需要的能量; 0.7% 2. 配制 0.7%生理盐水 称 7 克氯化钠备用,取蒸馏水加入盛放生理盐水的容器内达 1000ml(一次制作生理 盐水 1000ml),塞紧瓶口后,放进消毒蒸锅,开水后蒸煮 30 分钟消毒,冷却后加入提前 称量的氯化钠,充分溶化,摇匀,备用;(当天制作的蒸馏水使用前不用放消毒蒸锅内 消毒) 0.7%浓度的盐水是用来清洗各类与精液直接接触的器皿;此盐水的浓度与精液浓度 相近,对精虫不起渗透;如用蒸馏水,将使精虫致死; 3. 准备采精所需器具 准备好消毒过的集精瓶,集精袋,过滤纱布,橡胶圈,卫生纸,一次性乳胶手套,PE 手套, 盐水,剪刀等所需物品; 将盛放精液用的集精袋放进采精用的集精瓶中,技术人员只接触留在杯外的袋的开 口出处,将袋口打开,环套在保温杯口边缘,并将消过毒的 2 层沙布罩在杯口上, 用橡 皮筋套住,盖上盖子,放入 37℃的保温杯中预热,冬季尤其应引起重视; 这样做可以 减少低温对精子的刺激; 4. 采精栏的准备

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采精前先将假母猪台周围清扫干净,特别是公猪精液中的胶体,一旦残落地面,公猪 走动很容易打滑,易造成公猪扭伤而影响生产;安全区应避免放置物品,以利于采精 人员因突发事情而转移到安全地方;采精室内避免积水,积尿,不能放置易倒或能发 出较大响声的东西,以免影响公猪的射精; 5. 公猪的训练 在种公猪达 7 月龄时,要训练它骑上假母台交配,并记录其精液质量; 在种公猪达 8 月龄时,开始采精液;如其质量佳,即可使用;如其质量不佳,则过二星 期后再采精液检查; 种公猪采精的密度: 猪龄 猪龄 猪龄 8-10 个月 10-12 个月 12 个月以上 一周采 1 次 两周采 2 次 一周采 3 次

采精的方法 对种公猪采集精液时,应穿专业工作服,上衣两侧各有一个兜,用于放置盐水塑料瓶, 剪刀和卫生纸等; 根据采精记录表,选择要采精的公猪,冲洗干净,赶进采精栏;当公猪性欲达到旺盛 时,它将爬上假母台,在采精之前,将公猪尿囊中的残尿挤出,若阴毛太长,则要用剪 刀剪短,防止操作时抓住阴毛和阴茎而影响阴茎的勃起,以利于采精;用 0.7%生理盐 水冲洗干净公猪阴茎及包皮部,并用卫生纸擦干净阴茎及包皮部,避免采精时残液滴 或流入精液中导致污染精液,也可以减少部分疾病传播给母猪,从而减少母猪子宫炎 及其它生殖道或尿道疾病的发生,以提高母猪的受胎率和产仔数; 当公猪伸出阴茎龟头来回抽动,右手抓住公猪阴茎的螺旋头处,并顺势拉出阴茎,顺 势稍微回缩,直至和公猪阴茎同时运动;左手拿采精杯,若用左手采精时,则要蹲在公 猪的右侧,左手抓住阴茎,右手拿采精杯; 无论用左手或右手,当握住公猪的阴茎时,都要注意要用拇指和食指抓住阴茎的螺旋 体部分,其余三个手指予以配合,象挤牛奶一样随着阴茎的勃动而有节律地捏动,给 予公猪刺激;采精时,握阴茎的那只手要戴双层手套,乳胶手套外套一层 PE 手套,用 这种手套对精子杀伤力较小,当将公猪包皮内的尿液挤出后,应将外层手套去掉,以 免污染精液或感染公猪的阴茎; 手握阴茎的力度,太大或太小都不行,应以不让其滑落并能抓住为准;用力太小,阴茎 容易脱掉,采不到精;用力太大,一是容易损伤阴茎,二是公猪很难射出精液;公猪一 旦开始射精,手应立即停止捏动,而只是握住阴茎,射精完后,应马上捏动,以刺激其 再次射精; 当公猪射精时,一般射出的前面较稀的精清部分应丢掉不要,当射出乳白色的液体时, 即为浓精液,就要用采精杯收集起来,射精的过程中,公猪都会再次或多次射出较稀 的精清,和最后射出的较为稀薄的部分,胶体都应弃去不要;精液品质的好坏,量的多 少只是其中的一个衡量指标,在相同的取舍方法下,关键要看精子的密度和活力的高 低;初学者大都将公猪射出的较稀的精清和浓的精液全部收集起来计量,以此来衡量 公猪的好坏,是不恰当的;因为,同品种的不同公猪及不同品种的公猪在射精量和精 子浓度方面都有个体的差异,尤以不同品种公猪之间较为突出,如大约克的射精量大,

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但浓度稀;杜洛克公猪的射精量小,但浓度高;因此,在相同的采精方法下,应以精子 密度,活力为主进行评价,而精液量只是其中一个标准; 应注意的是,采精时,避免人为的接触集精器具,减少细菌的滋生,传播; 采完精液后,公猪一般都会自动跳下母猪台,但当公猪不愿下来时,可能是还要射精, 故工作人员应有耐心;对于那些采精后不下来而又不射精的公猪,不要让它形成习惯, 应赶它下母猪台;对于采得的精液,先将过滤纱布及上面的胶体丢掉,然后将集精袋 上部扭在一起,放在杯外,用盖子盖住采精杯,迅速传递到精液处理室进行检查,处 理; 二.精液品质的检查 精液的品质检查,稀释处理和保存,均在精液处理室进行,除了本处理室工作人员外, 其它人员禁止入内; 由采精室递过来的精液,要马上进行鉴定,以便决定可否留用,从而保证母猪的受胎 率和产仔数的提高;检查精液的主要指标有如下几个:精液量,颜色,气味,精子密度, 精子活力,畸形精子率等;每一份经过检查的公猪精液,都要有一份详细的检查记录, 以备对比及总结; 检查前,将精液转移到在 37℃水浴锅内预热的烧杯中,以免因温度降低而影响精子活 力,整个检查活动要迅速,准确,一般在 5~10 分钟内完成; 1.精液量:后备公猪的射精量一般为 150~200 毫升,成年公猪的为 200~300 毫升, 有的高达 700~800 毫升;精液量的多少因品种,品系,年龄,采精间隔,气候和饲养管 理水平等不同而不同; 2.颜色:正常精液的颜色为乳白色或灰白色,精子的密度愈大,颜色愈白;否者越小, 则越淡;如果精液颜色有异常,则说明精液不纯或公猪有生殖道病变,如呈绿色或黄 绿色时则可能混有化脓性的物质;呈红色时则有新鲜血液;呈褐色或暗褐色时则有陈 旧血液及组织细胞;呈淡黄色时则可能混有尿液等;凡发现颜色有异常的精液,均应 弃去不用,同时,对公猪进行对症处理,治疗; 3.气味:正常的公猪精液含有公猪精液特有的微腥味,这种腥味不同于鱼类的腥味, 没有腐败恶臭的气味;有特殊臭味的精液一般混有尿液或其它异物,一旦发现,不应 留用,并检查采精时是否有失误,以便下次纠正做法; 4.精子成活率的检查必须用 37℃左右的保温板,以维持精子的温度需要;一般先将载 玻片和盖玻片放在保温板上预热至 37℃左右后,再滴上精液,在显微镜下进行观察; 在显微镜下观察一个视野内的精子运动,若全部直线运动,则为 1.0 级;有 90%的精 子呈直线运动则活力为 0.9;有 80%的呈直线运动,则活力为 0.8,依次类推;鲜精液 的精子活率以高于 0.7 为正常,使用稀释后的精液,当活力低于 0.6 时,则应丢掉不 用; 5.精子活力:精子活力的高低关系到配母猪受胎率和产仔数的高低,因此,每次采精 后及使用精液前,都要进行活力的检查,以便确定精液能否使用及如何正确使用;检 验前,应先将精液瓶上下翻转,使精液遍布瓶内;再用接种环在火上烧红,冷却后插入 精液瓶,采出精液滴在盖玻片上(精液滴要求小,圆,鼓),再把盖玻片翻扣在凹玻片上, 用显微镜 100 倍观察精虫活动;随后,显微镜放大 400 倍,观察精虫尾部摆动状况,精 虫的活动状况有以下几种状况:

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+++标志精虫活动灵活,看不见其尾部,活动时产生涟漪; ++ 标志精虫活动快速,看见其尾部; + - 标志精虫活动迟缓,来回摆动; 标志精虫已僵死; +- 标志精虫能动弹,但不能游动; 6.畸形精子率(需制片固定后检查):畸形精子指断尾,断头,有原生质,头大的,双头 的,双尾的,折尾等精子,一般不能直线运动,虽受精能力较差,但影响精子的密度;用 位相差显微镜,可直接观察;公猪的畸形精子率一般不能超过 20%,否则应丢掉; 精虫发生异常,可能有以下原因: 公种猪生病,过度受凉或受热,以致精虫头部和尾部发生异常; 公种猪交配过于多,休息不足,或者是小公猪,排出的软体精虫超过正常数; 检查畸形的方法:将 1:1 稀释好的精液取 0.5ml 到血清瓶中,加 10%的福尔马林 0.5ml 慢慢转动使两者混合均匀;用消了毒的接种环取一滴滴在盖波片上反扣在载玻片上 平推盖玻片,使精虫分布在玻片上任其晾干,五分钟后可以检查精液的畸形率. 把经晾干的载玻片放到 100 倍的显微镜下观察,确定精虫位置后,再放达到 400 倍 的显微镜沿左到右,从上到下的顺序计算精虫数.要数足 333 条可见的精虫,并把 异常精虫的异常状况和所占的百分比记录下来. 异常的精虫有以下几种状况: (1)头部异常,如:反常的大,歪扭等; (2)颈椎异常,断裂或连接头部的关节不良; (3)身部异常,体形扭曲或过大; (4)尾部异常,如:弯曲或尾部缠在身上; (5)软体,颈,身,尾等部位有细胞浆包住; 三.精液的稀释 经过检查的精液,差的丢掉,留品质好的进行稀释处理;优良公猪利用率的高低,关键 在于处理保存的好坏;处理后的精液和原精液相比,一是扩大了与配母猪头数,能迅 速将优秀公猪基因推广开来;二是增加了精液的营养成分,有利于精液的保存; 处理精液必须在适合的温度环境中进行,实验室温度应在 22-24 度;处理时,应严禁 太阳光直射精液,因阳光对精子有一定的杀伤力;稀释液一般要在采精前准备好,并 进行预热; 稀释前,应对自己所需稀释的精液头份进行确定;稀释头份可按如下方法进行计算:人 工授精的正常剂量一般为 30~50 亿个精子/1 个剂量,体积为 80~100ML,一般采用 40 亿左右/100ML.头份,不过,主要是根据实际情况而定;正常的公猪精液,假如密度为2 亿/ML,采精量为 150ML,并计划稀释后密度为 40 亿/100ML.头份;则此公猪精液可稀 释 150×2/40=7.5 头份,即需加(750-150)ML=600ML 稀释液;不过,同一种稀释液,精子 密度越大,因所消耗能量多,保存时间也就越短; 稀释前,稀释液的温度应和精液接近,相差不能超过 1℃;根据计算好的稀释头份,用量 杯量取稀释液的体积; 稀释方法,将精液沿瓶壁缓慢倒入到消过毒的精液瓶中,精液瓶应事先消过毒并用盐 水冲洗过,注意瓶壁的温度接近精液温度;2.量取稀释液和精液的温度.先将温度计

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用冷水冲净,再用稀释液冲洗几次插入稀释液和精液中量取温度,使稀释液温度与精 液温度相等或相差不超过 1℃,注意:稀释液温度不能高于精液温度;量取稀释液和精 液温度时应用两个温度计,避免混合一起;3.加入稀释液时缓慢从瓶侧沿瓶壁加入同 时转动精液瓶使二者混匀;4.按精子活率与密度情况一般按 1:1 比例稀释保存; 精液稀释的成败,与所用仪器的清洁卫生有很大关系;所有使用过的烧杯,玻璃棒及温 度计,精液瓶,采精杯等都要及时用清水洗涤,并进行高温消毒;是稀释后的精液能保证 适期保存,利用的重要条件; 四.分装 分装 按其质量根据配种需求,再进一步稀释分装,(每头份 100ml);精液的分装,有瓶装和 袋装两种;装精液用的瓶子和袋子均为对精子无毒害作用的塑料制品;瓶装的精液分 装时简单方便,易于操作,但输精时需人为挤,压或瓶底开口,因瓶子有一定的固体形 态;袋装的精液分装一般需要专门的精液分装机,用机械分装,封口,但输精时因其较 软,一般不需人为挤压; 分装后的精液,要逐个粘贴标签,一般一个品种一个颜色,便于区分;注意要在上面标明 公猪耳号采精处理时间等,并将以上各项登记到记录本上,以备查验; 五.保存 保存 稀释的精液应保存在 15-18℃的保温箱;以水为调温介质,把精液瓶放在塑料杯内, 把等同精液温度的水倒入杯内至水位高过精液液位;做好后不能立即放入 17℃左右 的恒温冰箱内,应先放置在冰箱外 1 小时左右,让其温度下降,以免因温度下降过快而 刺激精子,造成死精子等增多; 放入冰箱时,不同品种的公猪精液应分开放置,否则匆忙中容易拿错精液;不论是瓶装 的或是袋装的,均应平放,并可叠放;从放入冰箱开始,每隔 12 小时,要摇匀一次精液,因 精子放置时间一长,会大部分沉淀;可在早上上班,下午下班时各摇匀一次; 保存过程中,一定要时时注意冰箱内温度计的变化,以免因意想不到的原因而造成电 压不稳而导致温度升高或降低; 为了便于监督,每次看温度都应有时间和记录; 稀释的精液可在保温箱内保存约 3 天;超过 3 天的精虫,质量将开始下降,直降至不能 用于人工授精; 六.输精 取保温箱内的精液使用时,应进行精子活力检验;向试管倒入 1-2ml.精液,把试管放 在 37-38℃的恒温水浴锅中加温;保存未超过 1 天的精液,加温 5 分钟;保存超过 3 天的,需加温 10 分钟;检查精子活率及密度,精液低于标准应丢掉不用; 精液取用过程的保温和防暑;高温的夏天,一定要在泡沫保温箱中放入冰皇(17℃恒 温),再放精液进行运输,以防止天气过热,死精太多,严寒的季节,要用保温用的恒温乳 胶或棉花等在保温箱内保温; 输精前将应配母猪全身冲洗干净特别是后躯不得留有脏物;用 10%新洁尔灭擦洗种 母猪的性器官, 再用盐水清洗一次;输精管事先必须消毒,用时再用盐水把它里外洗 干净后,缓慢以偏上 45 度角直插入母猪性器官,直到触及其子宫,即逆时针方向转动 以挂紧子;再把精液瓶放进输精管口,慢慢注输入精液直至输完;输完一瓶精液,约需 5-10 分钟;然后,顺时针方向抽出输精管;所有用具;事后均应清洗和蒸煮消毒干净;

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以备下次再用; 七.卫生 与人工授精有关的每一个环节都应该保持高度卫生; 1.从事人工授精的人员必须经常洗手,更换干净的衣服,携带干净的手纸; 2.公猪舍和化验室要保持干净,干燥,无应激; 3.输精管必须彻底清洗,消毒,使用前保证干燥; 4.即时,妥善处理不用的物品,防止疾病传播; 5.消毒器应定期清洗; 6.保持恒温箱里清洁; 7.所有人工受精器材每次使用完后都要进行清洗和消毒,消毒后放恒温干燥箱备用;

附: 青岛正大农业发展有限公司种猪场需购买化验室物品 1. 恒温干燥箱 3 个(存放消毒器具,避免污染,影响精液质量) 2. 蒸馏水机器 2 个(用于生产蒸馏水,清洗,配制稀释液,盐水等) 3. 输精管消毒桶 3 个(用于消毒使用后输精管)

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