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毕业论文-散尾葵叶枯病病原研究


海 南 大 学 毕 业 论 文(设计)



目:散尾葵叶枯病病原鉴定及其生物 学特性

学 姓 年 学 系 专

号: 名: 级: 院: 别: 业:

B0711019 李 龙 07 制药工程(农药方向) 环境与植物保护学院 制药工程系 制药工程(农药方向) 张荣意 教授 5

日 2010 年 11 月

指导教师: 完成日期:

散尾葵叶枯病病原菌鉴定和生物学特性研究





散尾葵(Chrysalidocarpuslutescens H.Wendl)叶枯病是散尾葵上的一种 重要病害,该病严重影响了散尾葵的生长发育及其观赏价值。目前,国内 对该病的防治报道较多,但还未查到对其病原物相关研究的报道,为了进 一步做好防治工作,本文对该病害病原的鉴定及生物学特性进行了基础性 研究。 散尾葵叶枯病病原主要危害散尾葵叶部,尤其是幼嫩叶尖,轻者使整 片叶片干枯,重者会导致植株整株死亡。通过试验及相关资料显示,该病 原菌为真菌门半知菌类,丝孢纲,丛梗孢目,丛梗孢科,帚梗柱孢属,帚 梗柱枝菌(Cylindrocladium quinqueseptatu Figueredo) 。该属真菌常引起植

物焦枯病害(如桉树焦枯病 Eucaly puts dicback)和根、茎腐败病(如水稻 叶鞘腐败病 Rice sheath rot )等,对种植农业、园艺行业等有较大影响。 关键词:散尾葵;叶枯病;鉴定;生物学特性

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散尾葵叶枯病病原菌鉴定和生物学特性研究

Abstract
Chrysalidocarpus lutescens (Chrysalidocarpuslutescens H.Wendl)leaf blight is an important disease on the Chrysalidocarpus lutescens,

Chrysalidocarpus lutescens the disease has seriously affected the growth and development and ornamental value. At present, there is no report on the prevention and treatment of disease, but has not yet found its coverage of pathogen research, in order to further improve relevant prevention and control work, this pathogen in the disease and the biological characteristics of the basic research . Chrysalidocarpus lutescens leaf blight pathogen primarily affecting San Chrysalidocarpus lutescens leaves, especially the young tip,the light so that the entire piece dry leaves, weight of whole plant could cause death. By testing and related information, the pathogen fungus is Fungi Imperfect,

Hyphomycetes, Moniliales, moniliaceae, Cylindrocladium,Cylindrocladium quinqueseptatu Figueredo . The fungi cause plant scorch diseases and more (such as Eucaly puts dicback) and the root and stem rot disease (such as Rice sheath rot) and so on for agricultural, horticultural industries have a greater impact. Keywords Chrysalidocarpus lutescens ; Biological characteristics; leaf blight ; Identification ;

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目 1



材料与方法…………………………………………………………… 4 4 4 5 5 5 5 5 6 6 6 6 7 7 8 9 10 10 11 12 14 14 15 17 18

1.1 材料来源…………………………………………………………… 1.2 病原菌的分离及菌种的纯化……………………………………… 1.3 分离菌株致病性测定……………………………………………… 1.4 生物学特性测定…………………………………………………… 1.4.1 不同温度对菌丝生长的影响…………………………………… 1.4.2 不同光照对菌丝生长的影响…………………………………… 1.4.3 不同 pH 值对病原菌菌丝生长的影响 ………………………… 1.4.4 不同碳源对病原菌菌丝生长的影响…………………………… 1.4.5 不同氮源对病原菌菌丝生长的影响…………………………… 1.4.6 病原菌菌丝致死温度测定……………………………………… 1.4.7 病原菌产孢诱导及病原菌鉴定………………………………… 2 结果与分析 …………………………………………………………

2.1 症状描述…………………………………………………………… 2.2 病原菌致病性测定………………………………………………… 2.3 不同温度对菌丝生长的影响……………………………………… 2.4 不同光照对菌丝生长影响………………………………………… 2.5 不同 pH 值对病原菌菌丝生长的影响 …………………………… 2.6 不同碳源对病原菌菌丝生长的影响……………………………… 2.7 不同氮源对病原菌菌丝生长的影响……………………………… 2.8 病原菌菌丝致死温度测定………………………………………… 2.9 病原菌产孢诱导及病原菌鉴定 …………………………………… 3 结论与讨论 …………………………………………………………

致谢……………………………………………………………………… 参考文献…………………………………………………………………

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散尾葵叶枯病病原菌鉴定和生物学特性研究

散尾葵叶枯病病原菌鉴定及其生物学特性
散尾葵(Chrysalidocarpus lutescens H.Wendl) ,又名黄椰子,为丛生常 绿灌木或小乔木, 棕榈科 Palmaceae, 散尾葵属 Chrysalidocarpus H. Wendl. 植物[1]。散尾葵原产非洲的马达加斯加岛,世界各热带地区多有栽培,我 国引种栽培广泛,常栽种于草地、树荫、宅旁,也用于盆栽,是布置客厅、 餐厅、会议室、家庭居室、书房、卧室或阳台的高档盆栽观叶植物。散尾 葵易发生叶枯病、根腐病和介壳虫类危害等,尤以叶枯病为害较重。 散尾葵叶枯病是一种常见病害,其植株发病率高达 36%,其中病株单 株叶片发病率平均约为 23%,对散尾葵生长影响很大,轻者使叶片干枯, 重者会导致植株整株死亡。病菌最先侵染叶尖和叶缘,发病初期染病处呈 褐色斑点或条块状斑块,中期斑点或斑块逐渐扩大并相互连接,后期叶片 呈现灰白状干枯,严重影响到了散尾葵的观赏性 [2]。为了更深入地了解该 病害病原菌及其病害特点,笔者对该病害病原进行了鉴定及其生物学特性 的测定。

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材料与方法

1.1 材料来源
散尾葵病叶于 2009 年 10 月采自儋州两院。

1.2 病原菌的分离及菌种的纯化
采用常规组织分离法[3][4]分离病原菌。 采集田间自然发病典型的散尾葵 叶片,剪取病健交界处组织,大小约为 5mm× 5mm;用 70%乙醇消毒 10s, 0.1%HgCl2(g/V)表面消毒 30s;灭菌水冲洗 3~4 次,无菌操作接种到马铃薯 葡萄糖琼脂培养基(PDA)[5]上,培养 3~4d。在平板上标记上面 PDA 长出 的不同类型的菌落,编号 1 号、2 号,无菌操作分别将 1 号、2 号菌种接种 到 PDA 平板上,培养 4~5d。 采用单菌丝分离纯化(由于未观察到孢子,所以选择使用菌丝段纯化)
[4]

,用分别用灭菌水将 1 号、2 号菌株配置成菌丝悬浮液(注意打散菌丝,

使菌丝成为单个菌丝段, 不互相缠绕) 用接种环取 1 环菌丝悬浮液与 10mL , 已融化的 PDA 培养基(约 40℃ )充分混合,倒入灭菌的培养皿中,置于

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28℃ 恒温培养箱中培养。 后, 2d 从培养皿中挑取单个分散的菌落移植到 PDA 培养基上进行纯化培养,然后转入 PDA 试管斜面保存[5]。

1.3 分离菌株致病性测定
根据柯赫氏法则[6]进行寄主活体接种测定。在田间选取健康的散尾葵 叶片 18 片,用无菌水清洗叶片表面,在每其中 9 片叶面用消毒过的针轻轻 刺伤叶片表皮,将纯培养在 PDA 上的 1 号、2 号菌打菌饼(菌饼大小约为 3mm)然后接种到叶片的伤口处,以无菌的 PDA 培养基块做对照并进行分 组为 A(1 号) 、B(2 号) 、C(CK) ,每组三个重复,剩余 9 片叶片按上述 方法进行无伤接种处理(不刺伤叶片表皮) ,分别依次编号为 D(1 号) 、E (2 号) 、F(CK),保温保湿,5d 后观察。如果该病原菌能使散尾葵发病, 并与田间自然发病症状相比较,若存在相同症状则将长出的病斑采用 1.2 所述方法分离得到病原菌,并将两次获得的病原菌作比较,判断两次提取 的病原菌是否相同,以确定该菌为致病菌。

1.4 生物学特性测定
1.4.1 不同温度对菌丝生长的影响 在无菌操作条件下,将直径 5mm 菌龄相同的菌饼移到 PDA 培养基平 板中央,分别置于 15、20、25、28、30 和 37℃ 的恒温培养箱中培养,观察 菌丝生长情况,每天测量菌落直径,比较在不同温度下菌丝生长速率。5d 后用十字交叉法测量菌落直径。每处理三个重复。 1.4.2 不同光照对菌丝生长的影响 将直径为 5mm 的菌龄相同(培养 4d)的菌饼接种到 PDA 培养基平板 中央,分别置于 24h 完全光照,12 小时光照和黑暗交替,24 小时完全黑暗 3 中环境中,在 28℃ 恒温培养箱中培养,6d 后测量菌落直径。每处理三个 重复。 1.4.3 不同 pH 值对菌丝生长的影响 制作 PDA 培养基, 0.1mol/L 的 HCl 和 NaOH 将其 pH 值分别调节到 用 4、5、6、7、8、9、10 这 7 个梯度,湿热灭菌(121℃ ,20min) ,再用无菌 的 0.1mol/L 的 HCl 和 NaOH 重新调节 pH 值后倒入已灭菌的培养皿中制成 平板[7];用直径为 5mm 的打孔器,取菌落边缘的菌饼(在 PDA 平板上培
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养 4d) 接种到不同 pH 值的培养基平板中央, , 置于 28℃ 恒温培养箱中培养, 6d 后观察菌落状况。每处理值三个重复。 1.4.4 不同碳源对菌丝生长的影响 使用 Czapek 固体培养基[8]为基础培养基:MgSO4· 2O 0.5g, KH2PO4 7H 1g,KCl 0.5g,FeSO4· 2O 7H 0.01g,NaNO3 2g(纯氮约 0.3294g),琼脂

20g,蒸馏水定容至 1000mL。 另外,分别以等当量的葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、D-果糖、D-甘 露糖、D-木糖作为碳源(以 20g 葡萄糖含碳量为标准) ,配置成不同碳源[7] 的培养基,湿热灭菌(121℃ ,20min) ,然后制成平板,在平板中央接入直 径为 5mm 菌龄相同的菌饼;置于 28℃ 恒温培养箱中培养,5d 后观察菌落 状况。每处理三个重复。 1.4.5 不同氮源对菌丝生长的影响 使用 Czapek 固体培养基为基础培养基:MgSO4· 2O 0.5g, KH2PO4 7H 1g,KCl 0.5g,FeSO4· 2O 7H 0.01g,葡萄糖 20g,琼脂 20g,蒸馏水

定容至 1000mL。 另外,分别以等当量硝铵酸 2.00g、硫氨酸 1.53g、色氨酸 2.40g、肌氨 酸 1.00g、蛋白胨 4.00g、L-苯丙氨酸 4.00g、磷酸二氢铵 2.70g 为氮源,配 置成不同氮源的培养基,湿热灭菌(121℃ ,20min) ,然后制成平板,在平板 中央接入直径为 5mm 菌龄相同的菌饼;置于 28℃ 恒温培养箱中培养,5d 后观察菌落状况。每处理三个重复。 1.4.6 菌丝致死温度测定 将病原菌菌饼(5mm)移入已灭菌的试管内,塞上橡皮塞,分别 45℃ 、 50℃ 55℃ 60℃ 65℃ 70℃ 、 、 、 和 恒温水浴处理 10min, 然后再分别接种到 PDA 培养基平板中央,以未处理菌饼接种到 PDA 培养基平板中央为对照,28℃ 恒温培养箱中培养,5d 后观察菌落状况。每处理三个重复。 1.4.7 病原菌产孢诱导及病原菌鉴定 由于未在培养基上获得病原菌孢子,设计了以下促使孢子产生的方法 (表 1) ;观察菌落及分生孢子颜色、形态、以及分生孢子梗形态并测量孢 子大小。

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表 1 促使孢子产生的方法 培养基 散尾葵葡糖糖琼脂培养基 散尾葵琼脂培养基 燕麦片琼脂培养基 马铃薯琼脂培养基 散尾葵叶组织 PDA 培养基 散尾葵植株活体嫩叶 PDA 处理方式 28℃ 恒温培养箱中培养 8d。 28℃ 恒温培养箱中培养 8d。 28℃ 恒温培养箱中培养 8d。 28℃ 恒温培养箱中培养 8d。 28℃ 恒温培养箱中培养 8d。 保温保湿直到叶病部灰白干枯,长出小黑点 28℃ 正常培养 4d, 紫外灯 (200~275nm) 照射 20min, 28℃ 恒温培养 4d。 PDA 28℃ 正常培养 4d, 12 小时光暗交替,28℃ 恒温培养 4d。 PDA 28℃ ,正常培养 5d 后,将培养皿置于 5℃ 低温条件下 2 天,再转入 28℃ 恒温培养 3d。 PDA 28℃ 正常培养 5d 后,将菌丝挑出接种于无菌蒸馏水 上,28℃ 恒温培养 5d。 注:1、散尾葵葡糖糖琼脂培养基配制营养为:新鲜散尾葵叶组织 20g,葡糖糖 2g,琼脂 2g,蒸馏水 100mL。 2、散尾葵叶组织 PDA 培养基制作方法:将新鲜健康的散尾葵叶片表面消毒,剪 成小块(约 3mm× 3mm)散置于 PDA 培养基平板上。

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结果与分析

2.1 症状描述
该病原菌主要危害叶部,尤其是上部嫩叶。病菌最先侵染叶尖和叶缘, 发病初期染病处呈褐色斑点或条块状斑块,中期斑点或斑块逐渐扩大并相 互连接,渐扩展为条斑,并可汇合成不规则的坏死块,后期叶片呈现灰白 状干枯,边缘有深色线条围绕;温湿条件下病部散生一些小黑点,轻者使 叶片干枯,重者会导致植株整株死亡。 (如图 1A~D)
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2.2 分离菌株致病性测定
用田间自然发病的散尾葵病株分离获得纯菌种,按照柯赫氏法则进行 接种,结果表明:刺伤接种 A 处理组 3d 后病原菌接种部位开始发病,出现 水渍状小斑点,5d 后染病处呈褐色斑点或条块状斑块,约 10d 后斑点或斑 块逐渐扩大并相互连接,渐扩展为条斑,并可汇合成不规则的坏死块,最 后叶片呈现灰白状干枯,边缘有深色线条围绕,温湿条件下病部散生一些 小黑点,其发病率达 100%;B 处理组和 C 无发病现象。无伤接种 D 处理 组 5d 后病原菌接种部位开始发病, 其发病过程与刺伤接种 A 处理大体相似, 发病率为 66%,无伤接种 E、F 处理组无发病现象。 用获得的菌种接种后出现的症状与田间自然发病症状相同,从接种发 病的植株分离获得的病原菌与田间自然发病获得的病原菌相同;对照植株 生长良好,同样进行组织分离,无病原菌存在,证实分离菌是散尾葵叶枯 病的致病菌。

A: 叶尖易受害;B:渐扩展为条斑,并可汇合成不规则的坏死块;C:病斑中心灰 白色,边缘有深色线条围绕;D:叶片有一半以上干枯卷缩

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图 1 散尾葵叶枯病发病症状

图 2 病原菌在 PDA 上的菌落

图 3 光照对病原菌菌丝生长的影响

2.3 不同温度对菌丝生长的影响
结果表明:病原菌在 20~37℃ 均能生长;温度在 15~28℃ ,菌落直径 随着温度的升高而逐渐增加;温度在 28~37℃ 范围内,菌落直径随着温度 的升高而逐渐减小。试验中最适宜菌丝生长的温度为 28℃ ,培养 5d 菌落平 均直径达到 41.5mm;15℃ 条件下菌丝生长受阻止或不能生长。所以菌丝生 长的最适温度范围在 25~30℃ ,而菌丝能否生长的低温临界温度在为 15~ 20℃ 之间。 (表 2)
表 2 温度对菌丝生长的影响 菌落直径 温度℃ Temperature (5d/mm) Diameter of colony(5d/mm) 15 20 0.0aA 26.1bB 菌丝不生长,未有任何菌丝特征 菌落圆形、边缘较整齐、浅褐色、棉絮状,边缘 菌丝稀疏,未产孢。 25 35.0cC 菌落圆形、边缘较整齐、褐色,菌丝生长旺盛, 棉絮状,菌落平整,背面有褐色色素,未产孢。 28 41.5dD 菌落圆形、边缘较整齐、红褐色,菌丝生长旺盛, 棉絮状,菌落平整,背面有黑褐色色素,未产孢 30 30.3eB 菌落圆形、边缘较整齐、褐色,菌丝生长旺盛, 棉絮状,菌落平整,背面有深褐色色素,未产孢。 菌落特征(5d) Colony character(5d)

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11.0fF

菌落不规则形、灰白至浅褐色,菌丝稀疏,棉絮 状,未产孢。

注:差异显著性使用 LSR 法计算,小写字母代表 α=0.05 水平差异显著性;大写 字母代表 α=0.01 水平差异显著性。

2.4 不同光照对菌丝生长影响
不同光照下,菌丝生长有所不同(图 3) ,从菌丝生长速率和菌丝颜色 上来看: 光照处理组的菌落直径最大, 24h 其次是 12h 光暗交替处理组, 24h 黑暗处理组的菌落直径相对较小; 24h 光照处理组的菌落深褐色、 表面有大 量白色菌丝,12h 光暗交替处理组菌落深褐色、表面有少量白色菌丝,24h 黑暗处理组菌落深黄褐色。 (表 3)
表 3 光照对菌丝生长影响 处理 24h 全光照 菌落直径(6d/mm) 57.3aA 菌落特征(6d) 菌落较规则圆形、深红褐色,表面有大量白色菌丝, 周围菌丝灰白色,未产孢。 12h 光暗交替 53.5bB 菌落不规则形、深红褐色,表面有少量白色菌丝, 周围菌丝灰白色,未产孢。 24h 全黑暗 52.0bB 菌落不规则形、深黄褐色,周围菌丝灰白色,未产 孢。 注:差异显著性使用 LSR 法计算,小写字母代表 α=0.05 水平差异显著性;大写 字母代表 α=0.01 水平差异显著性。

2.5 不同 pH 值对菌丝生长的影响
试验结果表明: 值在 4~10 的范围内, pH 菌丝均能良好生长, pH=4 除 处理组外, 其他组生长速率没有显著差异, 但各 pH 值对菌丝疏密程度及颜 色有明显影响。其中,pH=6、7、8 三处理组无显著差异但对 pH=4 处理组 生长速率有极显著差异,pH=5、9 处理组对 pH=4 处理组生长速率有显著 差异,所以菌丝生长最适 pH 值是在 pH=6~8。 (表 4)
表 4 pH 值对病原菌菌丝生长的影响

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菌落直径

pH 值
4

菌落特征(6d) (6d/mm) 43.7aA 菌落形状规则、边缘整齐,菌丝较密、较长、浅 红褐色,未产孢。

5

51.0bAB

菌落形状规则、边缘整齐,菌丝较密、较长、红 褐色略带紫色,未产孢。

6

55.0bB

菌落形状规则、边缘整齐、中部隆起,菌丝较密、 较长、红褐色,未产孢。

7

53.3bB

菌落形状规则、边缘整齐、中部隆起,菌丝较密、 较长、红褐色,未产孢。

8

55.3bB

菌落形状规则、边缘整齐、中部隆起,菌丝较密、 较长、浅褐色,未产孢。

9

50.7bAB

菌落形状规则、边缘整齐,菌丝较密、较长、浅 褐至灰白色,未产孢。

10

48.3abAB

菌落形状规则、边缘整齐,菌丝较密、较长、灰 白色,未产孢。

注:差异显著性使用 LSR 法计算,小写字母代表 α=0.05 水平差异显著性;大写 字母代表 α=0.01 水平差异显著性。

2.6 不同碳源对菌丝生长的影响
从菌落 5d 生长直径来看(图 4),在供试的含有不同碳源的 Czapek 固体 培养基上, 该菌在只含有葡萄糖或麦芽糖做碳源的培养基中生长状况最好, 显著优于在只含有乳糖、蔗糖、D-果糖、D-甘露糖或 D-木糖的培养基上的 生长状况,而在只含有 D-甘露糖做碳源的培养基上生长状况最差,显著差 于在只含有其他六种糖类培养基上的生长状况。 (表 5)
表 5 不同碳源对病原菌菌丝生长的影响 碳源 葡萄糖 菌落直径(5d) 29.3aA 菌落特征(5d) 菌丝致密,红褐色,平铺,菌落不规则形,底部 黑褐色,周围菌丝灰白色,未产孢。

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乳糖

25.7bAB

菌丝疏松,浅褐色,平铺,菌落圆形,周围辐射 状菌丝灰白色,未产孢。

麦芽糖

29.7aA

菌丝致密, 浅褐色至褐色, 平铺, 菌落不规则形, 底部褐色,周围菌丝灰白色,未产孢。

蔗糖

23.0bB

菌丝致密,红褐色,平铺,菌落不规则形,底部 黑褐色,周围菌丝致密、灰白色,未产孢。

D-果糖

23.0bB

菌丝致密, 浅褐色至褐色, 平铺, 菌落近圆形形, 底部褐色,周围菌丝灰白色,未产孢。

D-甘露糖

18.7cCB

菌丝致密, 褐色, 平铺, 菌落近圆形, 底部褐色, 周围菌丝灰白色,未产孢。

D-木糖

23.0bB

菌丝致密, 褐色, 平铺, 菌落近圆形, 底部褐色, 周围菌丝灰白色,未产孢。

注:差异显著性使用 LSR 法计算,小写字母代表 α=0.05 水平差异显著性;大写 字母代表 α=0.01 水平差异显著性。

图 4 不同氮源的对病原菌菌丝生长的影响

2.7 不同氮源对菌丝生长的影响
从图 5 可以看出,在供试的含不同氮源的 Czapek 固体培养基上,该菌

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在只含有肌氨酸做氮源的培养基上菌丝生长状况最好,极显著优于在只含 有其它六种氮源的培养基上的生长状况;在只含有色氨酸或蛋白胨做氮源 的培养基上菌丝生长状况较好,极显著优于只含有硝铵酸、磷酸二氢钾、 L-苯丙氨酸或磷酸二氢铵的培养基上的生长状况。 (表 6)

图 5 不同氮源对病原菌菌丝生长的影响 表 6 不同氮源对病原菌菌丝生长的影响 氮源 硝酸铵 菌落直径(5d) 24.7aA 菌落特征(5d) 菌丝致密, 浅褐色, 平铺, 菌落圆形, 底部褐色, 周围整齐、菌丝灰白色,未产孢。 硫酸铵 22.3aA 菌丝致密, 浅褐色, 平铺, 菌落圆形, 底部褐色, 周围整齐、菌丝灰白色,未产孢。 色氨酸 35.7bB 菌丝致密,褐色,平铺,菌落圆形,底部褐色, 周围整齐、菌丝灰白色,未产孢。 肌氨酸 45.7cC 菌丝较疏松,褐色至黄褐色,平铺,菌落圆形, 底部褐色,周围菌丝辐射状、黄褐色,未产孢。 。 蛋白胨 36.0bB 菌丝致密,褐色,平铺,菌落圆形,底部褐色, 周围整齐、菌丝灰白色,未产孢。 L-苯丙氨酸 27.7aA 菌丝致密,褐色,平铺,菌落圆形,底部褐色, 周围整齐、菌丝灰白色,未产孢。

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磷酸二氢铵

28.0aA

菌丝致密,褐色,平铺,菌落圆形,底部褐色, 周围整齐、菌丝灰白色,未产孢。

注:差异显著性使用 LSR 法计算,小写字母代表 α=0.05 水平差异显著性;大写 字母代表 α=0.01 水平差异显著性。

2.8 菌丝致死温度测定
经过 45℃ 恒温水浴 10min 处理的病原菌菌丝生长状态良好,5d 菌落平 均直径达到 41mm,且生长过程及菌落平均直径均与 CK 组并无明显差异 (CK 组菌丝 1d 后开始生长, 菌落平均直径为 42mm) 经过 50℃ 5d ; 恒温水 浴 10min 处理的病原菌生长较差,5d 菌丝生长直径仅为 14mm,约为 CK 的 1/3, 且在培养第 4d 才开始生长, CK 晚两天, 较 说明 50℃ 恒温水浴 10min 处理对菌丝生长产生了较大影响;55℃ 、60℃ 、65℃ 70℃ 和 恒温水浴 10min 处理组菌丝 5d 不生长,说明该病原菌菌丝致死温度应该是 55℃ 。

2.9 病原菌产孢诱导及病原菌鉴定

图 6 分生孢子梗

图 7 细而伸长的分枝端生球形膨大物

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图 8 分生孢子长圆柱形、3 隔 4 细胞

图 9 分生孢子由粘液保持在一起成束

病原菌在 PDA 培养基平板上的菌落形态为:菌丝生长速度为 55mm (6d) ;菌落形态为较规则圆形、红褐色、边缘为灰白色,较整齐;菌丝生 长旺盛,较密、棉絮状、中部稍微隆起,菌落背面有黑褐色色素,菌丝稠 密或疏松呈放射状;未产孢。 (如图 2) 诱导产孢显示: 病原菌在散尾葵叶组织 PDA 培养基上能少量产生孢子, 在散尾葵植株活体嫩叶接种处的病斑上能刮下大量分生孢子;而其他处理 组均未观察到孢子产生。可能原因为:1、该病原菌只能在寄主上通过孢子 繁殖;2、当前使用的培养基缺少某些营养元素或者某些营养元素比例不能 提供该病原菌产生孢子的条件。 在显微镜下观察散尾葵叶枯病病原菌孢子梗及分生孢子的特征是:分 生孢子梗直立,无色,规则和重复二叉或三叉分枝(图 6),每端有 2 到 3 个 小梗,部分有细而伸长的分枝端生球形膨大物(图 7) ;分生孢子无色至微 绿色,长圆柱形(图 8) ,单个着生但通常由粘液保持在一起成束(图 9) , 每个分生孢子 3 隔 4 细胞(图 8) ,大小为 24.1~48.5(42.6)μm×2.3~3.6 (3.1)μm。 结合对病原菌菌落及菌丝的观察结果,通过真菌形态学的比对,鉴定 出该病原菌为帚梗柱枝菌(Cylindrocladium quinqueseptatu Figueredo)[9]。

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结论与讨论
该病原菌在 PDA 固体培养基上菌丝生长状态良好, 但未能观察到孢子

产生。 该病原菌菌丝生长对 pH 值适应范围广, pH=4~10 范围均能生长, 在 在 pH=6~8 时生长最好;菌丝在 20~37℃ 均能生长,最适温度范围在 25~ 30℃ 之间,温度低于 15℃ 菌丝不生长,其致死温度在 50~55℃ 之间。该菌 对葡萄糖或麦芽糖的利用率较好,其次是乳糖、蔗糖、D-果糖、D-木糖和 D-甘露糖;其对肌氨酸的利用率明显优于色氨酸、蛋白胨、硝铵酸、磷酸 二氢钾、L-苯丙氨酸和磷酸二氢铵。 通过试验及相关资料显示,该病原菌为真菌门半知菌类,丝孢纲,丝 孢目,丝孢科,帚梗柱孢属中的帚梗柱枝菌(Hughes-Tubaki-Barron 分类系 统)[10][11][12]。

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散尾葵叶枯病病原菌鉴定和生物学特性研究

该属真菌还常引起水稻叶鞘腐败病(Rice sheath rot)等,水稻叶鞘腐败 病(Rice sheath rot )的病原为稻帚枝霉(Sarocladium oryzae (Sawada) W. Gams.
et Webster) 病部产生的分生孢子梗圆柱状, 1-2 回分枝, 。 有 每次分枝 3-4

根,在分枝顶端着生分生孢子。分生孢子单胞无色,圆柱形至椭圆形, 大小 3-20×1.5-4(μm)。病菌生长温限 10-35℃,菌丝生长和产生孢子适 温为 25-30℃,适宜 pH 值为 3-9,其中 pH5.5 最适。与本试验的获取病 原菌有较大差异。 据 邓 玉 森 [13] 等 报 道 , 帚 梗 柱 枝 菌 ( Cylindrocladium quinqueseptatu Figueredo)在华南地区除危害散尾葵外,还能引起桉树焦枯病(Eucaly puts dicback) ,本试验菌株能否引起桉树焦枯病(Eucaly puts dicback)仍有待做 进一步研究。

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致谢
大学本科的学习生活即将结束,在此,我要感谢所有教授我知识的老 师,学院给予我关心和帮助的领导,以及几年来共同学习的同学们,是你 们在我的成长中给了我鼓励和帮助。 本文能够顺利完成,首先需要感谢张荣意老师在我试验期间的悉心指 导和严格要求,让我在试验操作技能上得到很大进步,在此我向张老师致 以深深的敬意。同时也感谢一直帮助我的吕娟师姐、黄丽师姐和刘海师兄 的全力帮助。

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参考文献
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