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大孔树脂固定化脂肪酶及在微水相中催化合成生物柴油的研究


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2 卷 1 期  2 20 0 6年 1月 

生 物 工 程 学 报  C i s Jun l fBo cn l y hn e o ra o i e o g   e    th o

V0 . 2 12  

No.   1

>J n ay 2 0   a u r  0 6

大 子 树 脂 固定 化 脂肪 酶 及在 微 水相 中催化 合成 生物 柴油 的研 究  L
I m o iia i n  f Li a e o   a r p r u  Re i  a d is m b lz to o   p s   n M c o o o s sn n   t  App i a i n n l to  i  S nt e i o  Bi d e e i  Lo c y h ss f o is l n w Aq e us uo   M e i  da

高 阳,   谭天伟 , 聂开立,   芳 王  
GAO Ya g,T   n AN T a — e  ,NI   iL  n   ANG  a g   in W i E Ka— ia d W F n 

北 京 化工 大学 生 命 科 学 与技 术 学 院 , 京  102  北 009
Clg  i c neadTcnl y,Bin  n e i  Ce i lT ho g ,Bi g10 2 ,C/a oeefLeSi c n ehoo l o f e g eigU irt o hmc  e nl j v syf a c o y ei  009 hn  j n

摘  要  以 不 同 大 孔树 脂吸 附 法 固 定化 假 丝酵 母 9  2 9 15脂 肪 酶 , 微 水 有 机 相 中 的 应 用 表 明 非 极性 树 脂 N A是 最 佳 的 固 定  在 K 化 栽 体 。 分 别 以正 庚 烷 及 磷 酸 盐缓 冲液 作 为 固 定化 介 质 , 现 在 正 庚 烷 介 质 中树 脂 N A 的 固 定 化 效 率 能 够 迭 到 9 .8 , 发 K 8 9 % 与  采 用磷 酸 盐缓 冲 液 作 为介 质 相 比 , 固定 化 酶 的 水 解 活 力 和 表 观 酶 活 回 收 率 分 别 提 高 了 4 0 .7和 3 4 .3倍 。考 察 了在 微 水 相 中 固  

定 化 酶催 化合 成 生 物 柴 油 的催 化 性 能 , 果 表 明 , 给 酶 量 为 19 :( 始 酶 粉 与 树 脂 的 质 量 比 )p 结 在 .2 1 初 ,H值 为 74 体 系水 含 量 为  .,
1 % ( 与油 的质 量 比) 反 应 温 度 为 4 ℃条 件 下 , 定化 酶 具 有 最 佳 的 催 化 能 力 ; 正 庚 烷 为 介 质 固定 化 脂 肪 酶 催 化 合 成 生  5 水 , 0 固 以 物 柴 油 , 用 三 次流 加 甲醇 的 方 式 , 采 单批 转 化 率 最 高 迭到 9 、 % , 续反 应 1 73 连 9批 以后 转 化 率 仍 保 持 为 7 . % 。 02   关 键 词  大孔 吸 附 树 脂 , 固定 化 , 肪 酶 , 物 柴 油  脂 生
中 图 分 类 号  Q 1 .  842 文献 标 识 码  A   文 章 编 号 1 0 —0 1 2o o —14 0  0 03 6 (o 6) lO 1 —5

Ab t a t L p s  r m  n i a s s r c   i a e fo Ca d d   p.9 — 2   s i 9 1 5 wa  mmo i z d b   h sc l d o p i n o t  c o o o sr sn .T e r s l   h we   b l e   y p y ia   s r t   n o ma r p r u  e i s h   u t s o d i a o e s t a h   o p l r r s n NKA Wa   h  b s  a r r u e   n l w a u o s me i h t e n n oa  i  t e   s t e e t c ri   s d i   o   q e u   d a.9 9 e 8. 8% o   e r e o   mmo i z t n c n b   fd g   fi e bl a i   a   e i o a h e e   h n t e a s r t n p o e u e wa   e f r d i   h  p s n e o   e t n c iv d w e   h   d p i   rc d r  s p ro me   n t e r e c   f h p a e.T e y r lt   c ii   n   h   p a e t o o e h  h d oy i a t t a d t e a p r n   c vy a t i   c v r   flp s   d r e   n r sn i   e t n   s4. 7 a d 3. 3 t s h g e  h n t a   fl a e a s r d i   o i m  c i t r o e y o  i a e a s b d o   i  n h p a e wa   0   n   4   i   i h rt a   h to  i s   d o b   n s d u v ye o e me p e p o p a e b f r e s e t ey.Th   a a yi  r p r e   f i h s h t  u e ,r p c i l v e c t l t p e t s o   mmo i z d l a e f rp d c in o   id e e  n lw a u o s me i   c o i b l e  i s   o   r u t   fb o i s li   o   q e u   d a i p o o
we   t d e e r su id.I mmo i z d l a e d s l y d t e hg e t a t i   h n t e c u e e z me r sn w i h  ai  a   . 2:  a d t e b l e  i s   ip a e   h   i h s c i t w e   h   r d   n y / i   eg t r t w s 1 9 1 n   h   i p   vy e o

w t  o tn( ae/ i w i t a o a  5 a 4  ̄  n e  H 7 4 s l ae w sa sr d o   K  n h pa e t p d c   a r ne t w tr l e h  t )w s1 % t 0 C u d rp   . .A  i s  a  d ob   n N A i  e tn     r u e ec o  g ri   p e o o
b o is 1 h   a c   o v r in r t  a   a h 9 3% w e     h e se   t a o y i p tc lw s u e id e e .t e b th c n e o   a e c n r c   7. s e h n a t r — t p me h n l ss r o o   a   s d.Af r 1   o s c t e e  o t   9 c n e ui   e v b t h s h   o v ri n r t  ma n d 7 2% . ac e .t e c n e so   e r a e i e   0.   Ke   r s ma r p r u   d o t n r sn mmo i z t n l a e y wo d   c o s a s r i   i ,i o o p o e b l a i , i s ,b o is l i o p id e e 

R c ie e ev d:J l  3 0 5;Ac e td:S p e e   7, 0 5. uy 1 ,2 0 cpe e tmb r 2 2 0  

1l w r w ssp r d b   e ga t f m teN t nlH g   e h o g  e a h a d D vl m n 8 3 r rm N .0 2 A 10 0 、 a o a 1s o   a u pt   y t   rn  r  h  ai a i T c nl y R s r   n   ee p e t( 6 )P ga e( o 2 0 A 5 4 3 ) N t n l j k o e h s o o   h o ec o o i   N t a S i c  o n a o  f hn ( o 2 1 6 0 ) N t n   eerhPoet o teT nhFv .er l ( o 2 0 B 4 l 0 )( o 2 0 B 7 B 80 )a d a r   c n eF u d t n o C i N .0 7 0 2 、 a o a R sa   r c  r h   e t i ya  a N .0 4 A 1 B 5 N .0 4 A 1 0 -2 n   ul e i   a il c j f    e Pn
C mmis nPoetb  io e ( .0 0 9 . o si   rjc ySnp c No 2 2 5 )  o
* Co rs o d n   uh r e :8 — 0 6 41 6 1 E mal w a @ mal b c . d C   re p n ig a t o .T l 6 1   4 6 9 ; — i :t t n i . u t e u. U

国 家 高 技 术研 究 发 展 计 划 项 目 ( o 20A 543 ) 国 家 自然 科 学 基 金 ( o 2 160 ) 国 家 “ 五 ” 关 项 目 ( o 20 B 4 10 ) N . N .0 2 A 10 0 、 N .0 70 2 、 十 攻 N .04 A 11 5 ( 0 1  
2 0 B 7 B 80 ) 中 石化 ( o 2 2 5 ) 助 项 目。 0 4 A 1 0 .2 及 N .0 0 9 资  

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高 阳等 : 孔 树 脂 固 定 化 脂肪 酶及 在 微 水相 中催 化 合 成 生物 柴 油 的研 究   大  

脂 肪 酶 ( C . . .) 一 类 特 殊 的 酰 基 水 解 酶 , E 3 1 13 是  

( ) 正庚 烷 中 固定 化脂 肪 酶  :2 m 假 丝 酵  2在 10 g

多被用 来催化 一些酯 类合 成和转 化反 应 。随着世 界 
范 围 内 能 源 短 缺 和 环 境 优 化 的需 要 , 物 柴 油 ( 脂  生 即

母脂 肪 酶 、5 m 大孔树 脂 与 5 L正 庚烷 混合 均 匀 , 20 g m  
室 温过夜 。抽 滤 , 用正 庚烷淋洗 , 温干燥 。 室   12 2 固定 化脂肪 酶 催化合 成 生 物柴 油  : .. 基本 反  应体 系 为 5 m 0 L具 塞 锥 形 瓶 中 , 入 1g大 豆 油 , 加     195t 3 .t L甲醇 ,m 3 L正 烷 ,5 t 10t L去 离 子 水 , 2 0 g 约 5m  
以磷 酸 盐 缓 冲 液 为 介 质 固 定 所 得 固 定 化 脂 肪 酶 ,  

肪 酸单 酯 ) 的应 用成 为关 注和研 究 的热点 , 中生 物  其 酶 法合成 生 物 柴 油 已成 为生 物 柴 油 研 究 的 重要 方  向n ] 其途 径就 是 利 用动 植 物及 废 弃 物 油脂 , 0, 经脂  肪 酶 的催化进 行酰 基转移 反应 。但 游离酶 在反应 过  程 中容 易结块 , 能使用 一次且 造成 产 品分 离 困难 , 仅  
使 得 固 定 化 成 为 必 需 ] 根 据 脂 肪 酶 独 特 的 理 化 特  。

4 c 条件下 磁力搅 拌反 应 1 0I = 2~2 h  4。 1 23 脂肪 酶水解 活 力的测 定 : .. 采用 经 典 的橄榄 油  乳 化法  。酶 活单位 定义 为在 4  ̄ p 8 0条件 下  0C, H . 每 mn催化 产生 1 m l 肪酸 的酶量 定 义为 一个 酶  i t o脂 t 活 单位 ( )  u。

性, 将酶 固定化 在 大孔 聚合物 等疏水 性载 体上 , 不仅  可 以提 高酶 在反应 体 系中 的扩 散效 果和热 力学 稳定  性, 调节 和控 制酶 的活性 与选择 性 , 并且有 利 于酶 的 
回收 和 产 品 的 连 续 化 生 产  。  

表观酶 活 回收率 按 下 式 计算 : 观酶 活 回收 率  表


本 文利 用几种 疏水 大孔树 脂 吸附法 固定假 丝酵  母 9 .2 915脂 肪酶 , 过 固 定 化 条 件 的 优 化 , 通 比较 了  不 同树 脂 的固定化 效 率 和 固定 化 酶 的催 化 效 果 , 并  在微水 体 系中利 用大 豆 油合 成 生 物 柴 油 , 考察 了给  酶量 、 温度 、H值 、 系 水 含 量 、 p 体 甲醇 流 加 等 因素 对  固定化 酶催 化性 能的影 响 。  

固 定 化 酶 表 观 活 力/ 定 化 时 加 入 的 总 酶 活 力 × 固  

1 0% 。 0  

1 24 蛋 白质 含 量 的 测 定 : 白质 含 量 分 析 采 用  .. 蛋
Bafr ¨ 以牛 血 清 蛋 白 为 标 准 蛋 白 。 rd d法  , o  

酶 固定 化效 率按 下式计 算 : 固定化 效率 =( 始  初 酶 粉 或酶 液总蛋 白 一残 液 总蛋 白)初始 酶 粉 或酶 液  /
总 蛋 白 ×10 。 0%  

1 材 料 与 方 法   
1 1 材 料  .

12 5 产 物脂肪 酸 甲酯含 量 的测 定 : 用 气 相色 谱  .. 采
法分 析 , 用 G .0 0气相 色谱 仪 , B 1t 利 C2 1 D .h 毛细管 柱 

假丝 酵母 ( add p 9 .2 ) 肪 酶 , C n ia s . 9 15 脂 实验 室  自行 发 酵 ; 孔 树 脂 N A 9 A .、H13 D 00和  大 K . 、 B8 0 、 42 N A 南 开大学 化工 厂馈 赠 ; K , 大豆 色拉 油 , 临 门牌 , 福   市 场 购 置 ; 榄 油 ( 学 纯 ) 其 它 试 剂 ( 为 分 析  橄 化 , 均
纯 )北京 韦斯化 学试剂 公 司 。 ,  
1 2 方 法  .

( .5 m×3m× ./ A i n)高纯 氮 作载 气 , 02m 0 0 1 m, g et , z l 二 
阶程 序升 温 , 温 由 10I到 3 0C, 温 速率 1  ̄/ 柱 0c = 0 ̄ 升 0C  mn 由 30C 3 0C, 温速率 5C mn i ; 0  ̄到 5  ̄ 升  ̄ / i。利用氢 火  焰 离 子 检 测 器 , 测 器 温 度 3 5I, 化 室 温 度  检 7  气 c =
3 0c  7 I =

12 1 固 定 化 脂 肪 酶 : ..   ( ) 磷 酸 盐 缓 冲液 中 固 定 化 脂 肪 酶 :5 m 假   1在 10 g

2 结 果   
2 1 固定 化载 体的选 择  . 2 1 1 固定化 载体 对脂 肪酶 水解 活 力 的影 响 : .. 固定 

丝酵母 脂 肪 酶 溶 解 在 5 L0 1m l   H . m   . o L p 7 4磷 酸盐    / 缓 冲液 中 ,4 0/ i 心 3 i 20 r n离 m mn除 去杂 质 , 吸取 4 L m  上清酶 液并 加 入 2 0 g大 孔 吸 附 树 脂 , 温 过 夜 。 5m 室  

化 载体 的物理 化学性 质 是影 响固定 化效率 和 固定化 
酶催 化能 力的 重 要 因素 。从 表 1中 可 以看 出 , 于  对
比表 面 积 相 当 的 大 孔 树 脂 , 极 性 系 列 树 脂 的 固 定  非

抽滤 , 相 同缓 冲液 淋洗 , 用 室温 干燥 。不 同 p H值 条  件 下酶 的固定化 分别 采用 不 同 p H值 的磷酸 盐 缓 冲 
液 处理 。酶在不 同 介质 中 固定 化进 行 对 比实 验 时 ,  

化效 率相对 较 高 , 且 随 着 树脂 孔 径 的 增 大 固定 化  并 效率 逐渐 增大 。  

略去离心 步骤 。  
表 1 不 同 树 脂 对 脂 肪 酶 固 定 化 效 果 的 影 响 
Ta e 1 Efe to  e i o  n o iz in  fHp s   bl    f c   fr sn  n ima bl at i o o  ae

* 10 0 % o  p a e te z me r c v r   a   ittd t  4 2   fa p r n   n y   e o e y W Sd cae   1 0 0 o 3

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C i s J u a  i e n l y 生 物 工 程 学 报 h e  o r lfBo c o g ne n o th o
,   皇0一 a∞   > 『  皇o 1

2 0 , o. , o 1 06 V 1 2 N . 2  

脂 肪酶 被 固载在 多 孔 载 体 以后 , 固定 化 酶催 化  活性 的高 低 与 酶 所 处 的微 环 境 密 切 相 关 。结 果 表  明, 由于弱极 性或 非 极性 树 脂 与 非极 性 底 物 油脂 分  子存 在较 强 的吸附作 用 力 , 蛋 白进行 催 化 时 酶分  酶 子 与微环境 中底 物 的相 互 作 用得 以增 强 , 以及 产物  能够 及时 排除 , 从而使 得酶 活力得 以提 高 。   2 12 固定化 载体对 酶酯 交换 活 力 的影 响 : ..  在微水  有机 相体 系 中 , 载体 N A9以及 D 00易遭 有 机溶  K一 42 剂 正 己烷 的腐 蚀 , 然 D 0 0固载 酶后 酯 交 换 活 力  虽 42 最 高 , 考虑 固定化 酶不利 于 回收利用 而不 予选择 。 但   由图 1 以看 出 , K 可 N A固定 化酶 催化 活 力高 于 A 一 B8  
和 H 0 , 能 是 由 于 N A 的平 均 孑 径 大 于 A 一 13 可 K L B 8和 

在水溶 液介 质 中酶分子 表面 更 多亲水性 强 的氨 基酸 
残基暴 露 给介质 , 酶蛋 白以一 种 紧密 的构象存 在 ; 而 

在低极 性 的正庚烷 ( g 1 P=4 0 中 , o .) 可能 是 酶分 子 活  性 中心附 近的疏 水域 更 易 与 介 质发 生 作 用 , 过所  通
谓 的“ 界面活 化机 理 ” 酶分 子 的空 间构 象 以开 放 的  , 形 式存 在 , 性 中心 暴 露 出来 十 分 利 于催 化 反 应 的  活 进行 , 从而 酶 的催 化 活力较 高  。   另一方 面 , 图 2可见 , 用磷 酸盐 缓 冲液作介  从 利 质 固定 化 脂 肪 酶 催 化合 成 生 物 柴 油 , 化 率 在 4 h 转    以内仅达 2 %, 0 而利用 正 庚烷 作介 质 固载 酶生 物 柴  油转 化率 就可 达 7 % , 0 酶酯 交 换 活力 能 够 极大 地 提 
高。  

H0 , 13 因而 内传质 阻 力较 小 而有 利 于 酶蛋 白与底 物 
的接触 , 的酯 交换 活力 较高 。 酶   另外 , 由于 N A固载酶后 固定 化效 率 和 表观 酶  K

活 回收 率较 高 , 后续 实验 均采用 N A作 为 载体 。 K  
,  c 甚 0 o   a匹 o 兰 u

∞ ∞ ∞  

∞ ∞ 们 ∞ 加 m    O

f1 /1  


_ 一 Aq e u  du (u e) . uo s me im b f r  



口 一 N rqeu  d m(et e o. uos i hp n) a me u a  

f1 ,1  


◆ - AB8 —  一

H1 3 —  0

D 0 0—  42

NK   A

图 2 不 同 固 定化 介质 对 脂 肪 酶 酯交 换 活 力 的影 响 
Fg.2 Ef c    o p ig me i  n i tr sei c t n a tvt  i   f to c u ln   da o  nee tr ai   ci i e f i f o y

图 1 不 同树 脂 对 脂 肪 酶 酯 交 换 活 力 的 影 响   
F g. 1 Efe to  e i   n i tr se i c t n a t iy i   f c   fr sn o   n e e t rf a i   c i t   i o v

f i o mmo iie  ia e b l d lp s   z

f i o mmo iie  ia e b l d l s  z p

23 固 定 化 酶 合 成 生 物 柴 油 的 催 化 性 能  . 

2 2 固 定 化 方 法 的 比较  .  

23 1 给 酶量对 固定化 酶 活性 的影 响 : 图 3的结  .. 从 果 可 以看出 , 酶粉 与 树 脂 的质 量 比为 19 : 粗 .2 1时 ,  

分 别 在不 同极性 的 固定 化介质 磷酸盐 缓 冲液和  正庚 烷 中 固载脂 肪 酶 , 果见 表 2 在 正庚 烷 中不仅  结 ,

生 物柴 油 的转 化率 相对 最高 ; 是 不断增 加给 酶量 , 但   转 化率 反而下 降 。原 因可能是 载 体上偶 联 的酶蛋 白  
随着给 酶量 的增大 而增 加 , 给酶量 越来 越多 , 但 造成  的空 间位 阻效 应 就越 大 , 固定 化 酶 的相 对 活力 不 断 

获得 了较 高 的固定 化效 率 (89 % )并 且 水解 活力  9 .8 , 和表 观酶 活 回收 率分 别提 高 了 40 .7和 3 4 .3倍 。这  可能 与介 质极性 的改 变使得 酶分 子 的空 间构 象改变 
有关 。  
表 2 不 同 固定 化 介 质 对 脂 肪 酶 固 定 化 效 果 的 影 响 
Ta e2 Efe to  o l g  e a o i m o iz to o   p s  bl    f c  fc upi m di  n m n bl a n  l a e i i f i

10 0 % o   p ae te z me rc v r  s d cae  n h p a e. fa p rn   n y   e o ey wa  ittd i  e tn  

脂肪 酶可 以在疏 水 的界面进 行活化 , 水底物 、 疏   有 机试剂 等 的存 在 可与酶 活性 中心周 围 的疏 水域 相  互作 用 , 而 暴 露 出 活性 中 心 使 得 酶 活 性 增 加  。 从  
图 3 给 酶 量 对 固定 化 酶 活 性 的影 响 
Fg.3 Ef c  fe z me la n   n i i   f to  ny  o digo  mmo iie  ia e e blzd l s  p

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高 阳等 : 孔树 脂 固定 化 脂 肪 酶 及 在 微 水 相 中催 化 合 成 生 物 柴 油 的 研 究   大  

降低 。因此存 在一最 佳给 酶量来 满足 实验需 求 。  

2 34 反应 温度 对 固定化 酶 活性 的影 响 : 6给 出 .. 图  
了温 度对 固定化 酶活 性 的影 响 , 果显 示 固定 化脂  结 肪酶 的最适 作用 温度 为 4  ̄ 反应 温 度高 于 4 ℃以  0C, 5 后生 物柴 油的转 化率 迅 速 下 降 , 明 酶失 活 相 对较  说 快。  

23 2 H值 对 固定 化 酶 活 性 的影 响 : 肪酶 在 固  . . p 脂
定 化 过 程 中经 历 的缓 冲 液 中 的 表 面 离 子 状 态 可 以 在 

有机 溶剂 中维持 , 即脂 肪 酶 表现 出“ 忆 ” 记 效应 。从  图 4可 以看 出 , p 74的 条件 下 固定 所 得 酶 的酯  在 H . 交换 活 力 最 高 。这是 由 于 只有 在 特 定 的 p H值 下 ,   酶分子 上 的活 性基 团才能 处于最 佳 的离子 状态 。  

由图 4可 知 , 在偏 酸性 条 件下 的酶 活 力高 于 在  偏 碱性 条件 下 的 酶 活 力 , p 在 H值 超 过 8以后 酶 活 
开始大 幅下 降 。这 与 Wi o s m等 的结论 相一 致 , d 可能  是干燥 过程 使 酶 周 围 环 境 的 p H值 再 次 上 升 , 生  发 了碱催 化 的 p消 除反应 ¨ 酶蛋 白中胱 氨 酸部 分 降  一  , 解而使 酶失 活 。  
图 6 反 应 温 度 对 固 定 化 酶 活 性 的 影 响 
F g.6  Ef c  fr a t n tmp rtr   n i i f to  ci  e e au e o  mmo iz d lp s   e e o bl e  ia e i


坌  

2 35 甲醇 对 固定 化酶 活性 的抑 制 作用 : .. 甲醇等 低  碳醇 因其强极 性 和强亲 水性对 酶蛋 白有 很强 的破坏  能力, 能够影 响酶 的稳定 性和 活性 , 对酶 促反应 有着 

∞  

踟  

8   玉 

很 强 的抑制作 用 。可 以采用 在反应 过程 中分段 加入  甲醇 的方法来 消 除过量 的低碳 醇对 酶催 化 的抑制作 
图 4 p 值 对 固 定 化 酶 活 性 的 影 响    H
Fg.4 E e to   i   f c  fpH  n i o  mmo iie  ia e blzd l s  p

用  。  

采 用理论 最佳 油醇 摩 尔 比( : )将 相 同质 量 的  13 ,

甲醇平 均分 1 、 次 2次 、 或 4次 均 匀 加 入 反应 体  3次 23 3 体 系水 含量对 固定化 酶 活性 的影 响 : 有机  .. 在 相反 应体 系 中为使 酶分 子 表 现 出最 大 活 力 , 在 一  存
个最 佳含 水量 , 些 “ 需水 ” 酶分 子 表 面 的亲 水  这 必 与 基 团相互作 用 , 变酶 分子 内氢键 , 改 使酶 分子结 构变  得 松散 , 酶的活性 构象 处于最 佳状 态 。从 图 5可见 ,   当水含 量 为 1 %时 固定 化 酶 催 化 活 力 最 高 。继 续  5 增加 水含 量产物 转化 率反 而下降 , 酶活性 不 断降低 ,   可能是水 含量增 加 有利 于 水 解反 应 的进 行 , 于转  对 酯 反应来 说 , 活性 降低 。  


系 中, 由图 7可知 , 流加 甲醇 可以较好 地 改善 甲醇 的  抑 制作 用提 高转 化 率 。流 加 次数 增 多 , 甲醇 对 酶促 

反应 的抑制 越 弱 , 化 率 提 高 , 流 加 次 数 为 3次  转 当 时 , 物柴油 的转 化率 达到最 高 , 是 当流加 次数 大  生 但 于 3次 , 转化 率反 而降低 。  

舀 
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殳 

U  

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2  

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4 

Ad ng tme   fme h n   di  i s o t a ol

图 7 甲醇 流 加 次 数 对 固 定 酶 活 性 的 影 响   
Fi g.7 Efe to d i gtme  fmeh n lo  mmo iie  ia e   f c  fa d n  i so  t a o  n i blz d l s   p

2 36 固定化脂 肪酶 的操作 稳 定性 : 正 庚烷 介 质  .. 在
图 5 体 系水 含 量 对 固定 化 酶 活 性 的 影 响 
Fg.5 Ef c  fwae  o tn n ra t n s se o   i   f to   trc ne ti e ci   y tm  n e o i mmo iie  ia e bl d l s   z p

中将脂 肪酶 固定 在树脂 N A上 , 微水 正 己烷 中采  K 在 用 三 次流加 甲醇 的方 式 合 成 生物 柴 油 , 一 批 次反  每 应 后 过滤 出固定 化 酶继 续 进行 下 一 批 次 的反 应 , 结 

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霉 口 一  o   。s 若 u J

C i s Jun lfBo cnl y 生 物工 程 学报 hn e o r   ieh o g e  ao t o
[   3]

2 0 , o.2 N . 0 6 V 12 , o 1  

果见 图 8 固定化 酶 连续 反 应 1 。 9批 以 后 , 物 柴 油  生

I   ,Ch n B, E u h  e a . P o u t n o   i is lf e fo o s M e  g c iM  t1   rd c i   fb o ee  u l rm  o d  

的转化 率仍 然保 持 为 7 .% , 0 2 固定 化 酶 的酶 活 为初  始值 的 8 . %, 示 出 固定化 酶具 有 良好 的操作 稳  51 显
定性 。  

t g cr e n  l h l s gi m b i dl a .JM l aa B: r ye dsa da o o ui   o iz  i s i l i c   n m le po   o C t      l
E n c 0 1 1 ( ) 5 —5   mT  ̄/,2 0 , 6 1 :3 8

[   M ta P r o ,r aM a e ok , rs Wet   t .Pe a t n 4] at s es n I n   l n sa E nt h e e a i  s i d   j   1 r ri   p ao
o l a s o  u   i  o g n c sl e t . E z m   a d f i s  f r s po o n r a i  ov ns n y e n  M i o il c ba   r

Tcn l y,0 2 3 6 : 3 e o g 2 0 , 1( ) 8 3—8 1 h o 4 

[   5]

B si a a t  A , S b q i o P , Ar s n P e  a . A sn l  s p d au ul   l mi     t 1 o   ig e t   e pr ctn i u i a i , mmo i zt n, a d y ea t ai  o  l a s va i f o bl ai i o n  h p re i t v a n f i s   i  po it r ca  d o p in o   t n l  y rp o i s p o t . ot h a  ne f i a s r t   n sr gy h d o h bc u p rs Bi e n a l o o c l

;   三  

Bon 19 ,s 5 : 8 i g,9 8 s ( ) 4 6—4 3 e 9 

[   6]

J s   , P o ,Glr  Mu o , o i  e n e - u e t e 1 . o6 M l a mo o a i l f z GIr F m6 d z L n e t a r  a  
I tr c a a s r t n o   l a s o   v r  h d o h b c s p o t ne f i a l d o i   f i s   n ey p o po y r p o i  u p r  

l  
㈣ 姗    
譬口 蓉   N o 罾  l l o ll   J   ^I u

姗  
[   7]

(ot ey S pb a s) i m b i t n h p r t a o  a d ca cl e a e d ? d : m o iz i , yea i t n n     l o a cv i

s bl t n o  h  p n fr   f l a s J un/o   o clr t iz i   f t o e   m o i s . ora f M l u   a i o a e o po e a
C tlssB : E zm ̄ / 2 0 1 ~ 2 2 9 — 2 6 a ay i   ny c, 0 2, 9 0: 7 8 

1  

3  

5  

,  

9   I  l   l   l7 l I 3 5    9 

P d o   d   Ol er Gi l a M  Ale , Hezr F d   Cato. e r C e i i v a, z d   e vs ii     e s   r I mmo i s t n t de   d aay i  r p r e   f mirb a  i a   b l a i  s i s a  c tltc p o et s o   co i l s i o u n i l po o t sy e e dv n l e z n   c p lm e . B c e c / En ie r g no tr n   iiyb n e e o oy r o i h m/a g ei   n n

Re yc e a a   c l  ss ys

Co v ri nrt  nes   e o a


_ .  一A t i o imoizd ny e cit fm bi   zm   vy le e

J un l 20 , 1 :3— l o ra ,0 0 5( ) 6 7  

图 8 固定 化脂 肪 酶 的操 作 稳 定 性   
Fi g.8 T   p rto a tbit  fi   heo ea in lsa l y o mmo iie  ia e i blzd l s  p

[8] NeK ( 开 立 ) WagF 王 芳 ) T     i L聂   , n  ( ,a n

( 天 伟 ) i ie 谭 .Bo e l d s 

poutnb  oizdl a .Moe   hmcln ur( 代  r ci  yi ble ps d o m i io dr Ce i   sy 现 n aI t d
化 工 ) 2 0 ,3 9 :5—3  ,0 3 2 ( ) 3 8

综上 , 大孔 吸附 树脂 是 固定 化 假丝 酵 母 脂 肪 酶 

[   9]

W a a e N , O a Y ,M io d Y  ta . I lt n a d ie t c t n o   n b  t  n a  e 1   o s ai    d ni ai   f o n i f o k ie ia   p o u ig mi ro g n s   c lu a  c n i o s a d l a n  l s po rd cn   c o r a i ms u tr l o dt n   n   i p o r e   f c u e e z me . g r p t so   r d   n y s    e i
15  38

的优质 载体 , 正庚 烷 介 质 中 固定 化 效 果 显著 。非  在
极性 树 脂 N A 固定 化假 丝 酵 母脂 肪 酶 在微 水 有机  K 相中能 够 有 效地 催 化 大 豆 油 脂 与 甲醇 的酯 交 换 反  应 , 于生物 柴油 ( 对 即脂 肪 酸单 酯 ) 的生 物 合 成具 有  很大 的应用潜 力 。   R F R N E ( 考文献 ) E E E C S参  
V j S i a a o iWaaa e ko S g a   ta .E zm t   ui hm d ,Y m   t b ,A i u i r e 1   n   ha   ny a c i
l o oy i ac h lss o  bo is l u l rd c in a d p l a o  o   h    fr i e e f e p o u t   n  a p i t n f t e d o ci

Bil C m , 9 7, 1: 3 3 — o  h e 17 4 1 5  

【O  l]

Brdo d M . A r p d a d s n i v   e o   o   e q a t ain o   afr    a i  n   e s ie m t d fr t   u i t   f t h h n t o mir ga q a t iso   r ti  t iig te p n il   fp ti  y   c o r m  u i e  fpo en u i zn     r cpe o  r en d e n t l h i o bn ig.An   o h mit , 1 7 7 : 4 — 2 5 i dn l a Bic e sr y 9 6, 2 2 8 5 

【1  1]

W id m  s o RA , s  F, i sBa r sM R . n y ce t rse f ain Ro a M Ar   ru   e E z mi  ne e tr c t   i i o o as lb rtr   d pl t c   t de   t mm o i zd l a  rm  fft ,a o ao a   i ? a su iswi i y n o sl h ble  i s f i po o

融 卸   ari s B t h o g   n   i n ie / 18 , 9 9 : r z . i e n l ad B eg e r 9 7 2 ( )  hu o c o y o n r g, i
18 0 1— 1 8   05

r c 0   0 0  poes g 如删 z , D H盯 c e t n t i r si . ai   l c “   0  k Z 耐 ” B:    
Eny t 2 0 l ( zma/ 0 2,7 3—5 c, ):13— 12 3 4 

[ 2  D n ( I ) LuL 刘 柳 ) D n  董 贤 )e a .S d n 1] egL X  ̄利 ,i (   , ogx( t   1 t y0  u
etrf a in r a t n o at  cd   h r c an e t rb  mmo i z d s ii t  e i   fft a i ss o t h i  se   y i e c o c o y   bl e  i

[   2]

Kal rc  J e e ,Th rtn r- i h a g r E o s  Eg e t i a s o  b oe h oo y e g r .L p s  f r itc n lg o


la  o  a ias . i s f m C n d p9 po r d 9—15 M dm hmc   ut ( 代  2 . oe C i I s r 现 e a n y l d
 

C r n O ii nB t h ooy, 0 2 1 ( ) 30—3 7 u et pn ni i e n l r   o  o c g 2 0 , 3 4 :9 9 

化工 ) 0 2 2 ( ) 3 ,2 0 , 2 9 :0—3  3

《 物 工 程 学 报 》 入 “ 方 数 据— — 数 字 化 期刊 群 ” 生 加 万 的声 明 
为 了 实 现 科 技期 刊 编 辑 、 版 发 行 工 作 的 电 子 化 , 进 科 技 信 息 交 流 的 网 络 化 进 程 , 刊 现 已 入 网 “ 方 数 据 —— 数 字 化  出 推 我 万

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