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实验十一 多管发酵法测定水中大肠菌群


综合实验) 实验十一(综合实验) 多管发酵法测定水中大肠菌群
一、实验目的 1、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。 2、了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。 二、实验原理 发酵法: 又称多管发酵法或三步发酵法 1) 初发酵(推测试验) : 将不同稀释度的水样,分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中(3 倍或 1 倍乳 糖液) ,经 37 ?C 培养 24 h,观察产酸产

气情况,培养基内加有溴甲酚紫作为 PH 指示剂,细 菌产酸后,培养基即由原来的紫色变为黄色,以初步判断是否有大肠菌群存在。 2)平皿分离(证实试验) 水中除大肠菌群外,尚有其它细菌可能引起糖类发酵,因此需要进一步证实。 将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基,37 ?C 培养 24 h,根据菌 落特征(带核心的、有金属光泽的深紫色菌落) ,挑取可能为大肠菌群的菌落制片, 经革兰氏染色,进一步证实是否为大肠菌群。 3) 复发酵试验(完成实验) 将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入 1 倍乳糖培养液中,经 37 ?C 培养 24 h,产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。 产酸、产气分别记为阳性反应,不产酸、产气则记为阴性反应; 根据阳性管数量,查表求得水体大肠菌群的数量。 三、实验材料 1、培养基: 乳糖蛋白胨发酵管(内有倒置小套管) ,三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管(瓶) (内有 倒置小套管) ,伊红美蓝琼脂平板,灭菌水。 2、仪器或其他用具: 载玻片,灭菌带玻璃塞空瓶,灭菌吸管,灭菌试管等。 四、操作步骤 1.水样的采取 实验室提供水样 2.河水的检查 (1)初(步)发酵实验 水样的稀释: 10-1 与 10-2 接种:分别吸取 1ml 10-2 、 10-1 和原水样接入装有 10ml 普通浓度乳糖蛋白胨发 酵管 ;另取 10ml 原水样接入装有 5ml 三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管 ,混匀后,37 ℃培养 24 h,24 h 未产气的继续培养 48 h。 (2)平板分离 将经 24 h 和 48 h 培养后产酸产气的发酵管,分别划线接种于伊红美蓝琼脂平 板上,再于 37 ℃培养 18~24 h,将符合下列特征的菌落进行染色镜检。 深紫黑色,有金属光泽; 紫黑色,不带或略带金属光泽; 淡紫红色,中心颜色较深。 (3)复发酵试验 将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌株重复初步发酵试验。并根据初发酵管试验 的阳性管查表,即得大肠菌群数。

10ml×100 × 3× × 1支 支

1ml×100 × 1× ×

1ml×10-1 × 1× × 1× ×

1ml×10-2 × 各3支 支

图 1 多管发酵测定水中大肠菌群的操作步骤和结果解释 五、思考题 1.实验结果报告 河水水样:阳性结果记“+”,阴性结果记“-”。 查表 6 获得每升水样中总大肠菌群是多少? 2.思考题 (1) 何谓大肠菌群,它主要包括哪些细菌属? (2) 为什么 EMB 培养基的琼脂平板能够作为检测大肠菌群的鉴别平板?


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