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纤维素降解菌的筛选与诱变育种


第 38 卷 第 3 期 2010 年 6 月

福州大学学报 (自然科学版 )
Journal of Fuzhou University (Natural Science)

Vol 38 No. 3 . Jun. 2010

文章编号 : 1000 - 2243 ( 2010 ) 03 - 0450 - 0

6

纤维素降解菌的筛选与诱变育种
高珍娜 , 吕文静 , 谢 航 , 林 娟
(福州大学生物科学与工程学院 , 福建 福州  350108)

摘要 : 采用羧甲基纤维素 (CMC)平板初筛和 50 ℃ 培养 , 筛选到一株纤维素酶活力较高的耐高温霉菌 M Y菌株 , 其 CMC培养基最适 pH 为 6. 0, 培养温度为 40 ℃, 最佳产酶时间为 5 d. 以 M Y菌株为出发菌株 , 分别采用紫外 线和硫酸二乙酯诱变 , 以透明圈直径与菌落直径的比值 ( HC 值 ) 提高 30%以上或菌落形态发生明显变异为筛 选指标 , 共筛选到 97 株突变株 ; 通过测定粗酶液 CMC酶活力 , 从中筛选出 29 株 CMC酶活力提高 30%以上的 菌株 ; 结合突变菌株的传代稳定性实验 , 最后筛选得到 1 株性能优良的霉菌 M Y004 突变株 , 其 CMC 酶活力比 原始菌株 M Y提高了 80. 6%. 关键词 : 纤维素降解菌 ; 筛选 ; 育种 ; CMC 酶活力 中图分类号 : Q939. 9   文献标识码 : A

Screen in g and breed in g by in duced m uta tion of cellulose - degrad in g stra in s
GAO Zhen - na, L Β W en - jing, X IE Hang, L I Juan N

( College of B iological Science and Technology, Fuzhou University, Fuzhou, Fujian 350108, China )

纤维素是地球上最丰富的可再生生物聚合物 , 占全球植物总干重的 30% ~50% , 是地球上分布最广 、 [1] 11 含量最丰富的碳水化合物 . 据不完全统计 , 全球每年通过光合作用产生的植物物质高达 1. 55 × 10 t, 这些有机物所占的总能量目前是全世界每年消耗能量总和的 10 倍 . 另外 , 人类活动产生的废弃物中也含 有大量的纤维素 , 如农业废物 (稻草 、 稻壳 、 麦秆 、 花生壳 、 玉米芯 、 棉籽壳 、 甘蔗渣等 ) 、 食品加工废物 (果皮 、 果渣等 ) 、 木材废物 (木屑 、 树皮等 )以及城市废弃物 (垃圾 、 废纸等 ) , 而其中有 80%以上尚未被 [2] 利用或未被合理利用 (如直接焚烧 ) , 全世界每年因此造成的直接经济损失达数十亿元 . 如果能有效地 利用生物转化技术将这些纤维素转化为简单的糖类 , 再转化成燃料 、 食物和化学制品 (如糖 、 乙醇 、 饲料 蛋白等 ) , 不仅可以变废为宝 , 而且对解决人类目前所面临的能源短缺与环境污染等问题具有重要意义 . 生物降解是高效利用纤维素的关键 , 然而目前所筛选的产纤维素酶菌株的酶活性普遍偏低 , 耐高温能力 较差 , 难适应工业化生产的需要 . 因此 , 选育高产纤维素酶的耐高温菌株成为目前纤维素降解菌选育研究 的热点 .
收稿日期 : 2009 - 12 - 09 通讯作者 : 林 娟 (1970 - ) , 副教授 , E - mail: ljuan@ fzu. edu. cn 基金项目 : 福建省科技厅重点资助项目 (2009N0035) ; 福建省教育厅科研资助项目 (JA07024) ; 福州大学科技发展基金 资助项目 ( 2007 - XQ - 15 )

Abstract: A mold strain M Y w ith high cellulase activity and temperature - resistance was screened by cultured on carboxymethyl cellulose ( CMC ) p late and at 50 ℃ The op tim al conditions forM Y strain . p roducing cellulase were as follow: pH of CMC m edium 6. 0, cultivating temperature 40 ℃, cellulase p roducing tim e 5 d. U ltraviolet ray ( UV ) and diethyl sulfate were app lied to m utate M Y strain, re2 spectively 30% increasing of HC value ( ratio of diam eters of clearing zone to colony ) and colony . morphology w ith obvious variation were used as screening indexes, and 97 m utants were selected. Sub2 sequently, carboxymethyl cellulase ( CMCase ) activity of each m utant was determ ined and 29 strains w ith 30% increasing of CMCase activity were screened. Finally, M Y004 m utant was obtained for its CMCase activity increasing by 80. 6% after inoculated 12 generations . Keywords: cellulose - degrading strains; screening; breeding; CMCase activity

第 3期

高珍娜 , 等 : 纤维素降解菌的筛选与诱变育种

?4 5 1 ?

1  材料与方法
1. 1   样品采集

土样分别采自福州闽侯根雕厂的树根土样 , 福建龙海榜山的食用菌栽培基质 , 福建农林大学的甘蔗 田土样 , 垃圾堆土样 , 菜园土样 , 水稻田土样 , 牛粪堆肥等 . 1. 2   培养基
1 )纤维素刚果红培养基
[3]

. K2 HPO4 0. 5 g; M gSO4 0. 25 g; 羧甲基纤维素钠 1. 88 g; 刚果红 0. 2 g; 明

胶 2. 0 g; 琼脂 20 g; 蒸馏水 1 000 mL; pH6. 0. 2 ) CMC 培养基 . (NH4 ) 2 SO4 2 g; KH2 PO4 1 g; M gSO4 ?7H2 O 0. 05 g; NaCl 1 g; 羧甲基纤维素钠 15 ~ 20 g; 蒸馏水 1 000 mL; pH6. 0, 分装 1 00 mL /250 mL. 固体培养基添加 20 g琼脂 . 1. 3   主要仪器设备 高速冷冻离心机 ( Z 323 K型 , 德国 HERMLE LABORTECHB IK公司 ) ; 可见分光光度计 ( V - 1200 型 , 上海美谱达仪器有限公司 ) ; pH 计 ( PHS - 3C 型 , 上海精密科学仪器有限公司 ) .
1. 4   实验方法 1. 4. 1   紫外 ( UV)诱变
[ 4] 6 7 吸取 6 mL 孢子悬液 (浓度为 10 ~10 个 /mL )于带有转子的培养皿中 , 经紫外灯 ( 15 W , 30 cm ) 照射 1、2、3、4、5、6、7、8 m in 后 , 分别吸取 0. 2 mL 稀释液涂布于纤维素刚果红培养基上 , 每个稀释度作 3 个

平行 . 用黑塑料袋和报纸包好后 , 于 40 ℃ 下培养 4 d后计数 , 计算致死率和正变率 , 并绘制致死曲线以选 择最佳诱变剂量 . 用不经紫外线照射的孢子悬液作对照 . [5] 1. 4. 2   硫酸二乙酯 (DES)诱变 6 7 - 1 分别吸取 8 mL 孢子悬液 (浓度为 10 ~10 个 /mL ) , 32 mL、0. 1 mol?L 磷酸缓冲液 ( pH7. 0 ) , 0. 4 - 1 mL 无水乙醇和 0. 4 mL 硫酸二乙酯充分混匀 (DES终浓度为 1% ) , 置于 40 ℃, 180 r?m in 摇床中分别处 理 10、20、30、40、50、60、70、80 m in 后 , 吸取 1 mL 液体用 0. 5 mL、25%硫代硫酸钠终止反应 , 稀释到 - 1 - 2 - 3 10 、10 、10 , 分别取 0. 2 mL 涂布于纤维素刚果红培养基 , 在 40 ℃ 下培养 4 d后计数 , 计算致死率和 正变率 , 并绘制致死曲线以选择最佳诱变剂量 . 用不经 DES处理的孢子悬液作对照 . 致死率计算公式 : 对照每毫升 cfu 数 - 处理后每毫升 cfu数 致死率 % = × 100 对照每毫升 cfu数 正变率计算公式 : 处理后每毫升正变株 cfu 数 正变率 % = × 100 处理后每毫升 cfu数
1. 4. 3   纤维素酶活力的测定 1. 4. 3. 1   葡萄糖标准曲线的制作

以葡萄糖含量 (mg)为横坐标 , OD540为纵坐标 , 绘制葡 萄糖标准曲线 . 葡萄糖含量与 OD540之间的线性方程为 y = 0. 246 6 x, 相关系数 r = 0. 99 (见图 1 ) . 1. 4. 3. 2   粗酶液的制备 将发酵液在 5 000 r?m in L 下离心 5 m in, 吸取上清液 适当稀释后作为粗酶液备用 . 1. 4. 3. 3  CM C 酶活力测定 吸取 0. 5 mL 粗酶稀释液于具塞比色管中 , 加入 1. 5 mL - 1 0. 5% CMC - 柠檬酸缓冲液 ( 0. 1 mol?L , pH4. 8 ) , 于 50 ℃ 水浴精确反应 30 m in 后取出 , 立即用沸水浴灭活 , 按 [7] DNS比色法测定还原糖含量 . 以灭活的酶液作为空白 .
- 1 [6]

图 1  葡萄糖标准曲线
Fig 1  Standard curve of glucose .

?452?
1. 4. 3. 4   酶活力单位定义

福州大学学报 (自然科学版 )

第 38 卷

在上述反应条件下 ( 50 ℃, pH4. 8 ) , 酶液每分钟水解底物生成 1μmol葡萄糖的能力定义为 1 个酶活 力单位 ( I ) . U 还原糖含量 (m g) × 000 × ( 1 n - 1 酶比活力 = I ?mL ) U 180. 16 × × 5 30 0. 式中 : 180. 16 为葡萄糖分子量 ; 30 为反应时间 , m in; 0. 5 为酶原液的体积 , mL; n 为酶液稀释倍数 .

2  结果与讨论
2. 1   耐高温纤维素分解菌的筛选

经过 CMC 平板初筛和 50 ℃ 培养 , 筛选到 1 株性能优良的霉菌 M Y菌株 , 在纤维素刚果红平板上形成 (透明圈直径与菌落直径的比值 )为 1. 78. 的透明圈清晰 , HC 值 目前纤维素生物降解主要采用高温耗氧堆肥的方式 , 温度一般控制在 45 ~65 ℃, 此时不仅是木质纤 [ 8, 9 ] 维素降解的最适温度 , 同时也可以杀死绝大部分的寄生虫 、 虫卵 、 孢子和病原菌 , 保证堆肥的无害化 . 然而 , 自然界中能够在此温度范围内降解纤维素的菌很少 , 因此 , 研究该温度范围内的微生物活性及其降 解性能十分有意义 . 2. 2   培养基 pH 和培养温度对 MY 菌株生长的影响 以菌落直径大小为指标 , 比较培养基 pH 和培养温度对 M Y菌株生长的影响 , 结果见表 1. 在 CMC 平 板上 , 相同温度下菌株的生长速度是 pH6. 0 > pH5. 0 > pH7. 0 > pH8. 0; 而在相同 pH 值情况下 , 生长速度 是 40 ℃ > 35 ℃ > 45 ℃ > 50 ℃. 因此 , 在后续实验中 , 采用 pH6. 0 的 CMC 培养基和 40 ℃ 恒温培养 . 表 1  CM C 培养基 pH 和培养温度对 MY 菌株生长的影响 Tab. 1  Effects of pH of CM C m ed ium and tem pera ture on the growth of MY stra i n
培养基 pH θ /℃
35 5. 0 40 45 50 35 6. 0 40 45 50
d平均菌落直径 /mm

48 h 8. 3 9. 5 8. 9 1. 8 9. 1 11. 8 9. 6 2. 3

72 h 24. 8 28. 6 21. 3 8. 9 27. 2 32. 7 23. 8 9. 2

培养基 pH

θ /℃
35

d 平均菌落直径 /mm

48 h 6. 0 9. 2 3. 8 1. 1 3. 2 8. 7 1. 6

72 h 21. 1 24. 0 19. 4 7. 8 18. 1 26. 7 14. 3 6. 2

7. 0

40 45 50 35 40 45 50

8. 0

×

2. 3  MY 菌株 CM C 酶活力随培养时间的变化

由于霉菌 M Y菌株的孢子在水中无法分散 , 大多漂浮 在无菌水表面 , 尝试采用不同浓度琼脂水进行稀释涂布计 数 , 结果发现 , 0. 1%琼脂水线性最好 , 因此改用 0. 1% 琼脂水制备孢子悬液 . 7 将 M Y菌株按每瓶 1. 2 × 个孢子接种到 CMC 液体 10 - 1 培养基 ( 100 mL )中 , 40 ℃、120 r?m in 摇床培养 , 其 CMC 酶活力随培养时间的变化曲线如图 2 所示 . 由图 2 可知 , M Y菌株的 CMC 酶活力随着培养时间的 延长而逐渐提高 , 在第 4 ~5 d 时 CMC 酶活力达到最高值 , 因此在诱变育种时培养时间采用 5 d.
图 2  M Y菌株的 CMC酶活力随培养 时间的变化曲线
Fig 2  Curve of CMCase activity of M Y strain . varying w ith culture tim e
[ 10 ]

第 3期
2. 4  MY 菌株的诱变育种 2. 4. 1   诱变剂量的确定 2. 4. 1. 1   紫外诱变

高珍娜 , 等 : 纤维素降解菌的筛选与诱变育种

?4 5 3 ?

紫外诱变的致死率和正变率如图 3 所示 , 其中正变菌株为 HC 值提高 30%以上的菌株 . 由图 3 可知 , [ 11 ] 当紫外线照射 2、3 m in 时致死率分别为 77. 4%和 88. 3% , 7 m in时接近 100%. 根据文献报道 , 在致死 率 70% ~80%内 , 菌株出现正突变的机率较高 . 然而 , 本实验结果表明 2、3 m in 的正变率只有 0. 09%和 0. 05% , 而 7 m in的致死率虽然高达 99. 1% , 但正变率却达到 0. 30%. 因此 , 确定诱变剂量为紫外线照射 7 m in.
2. 4. 1. 2   硫酸二乙酯诱变

硫酸二乙酯诱变致死率和正变率如图 4 所示 . 在 10 ~50 m in 内致死率为 70% ~80% , 正变率随着处 理时间的延长而增加 , 在 40 m in时正变率最高 , 为 0. 09% , 此时致死率为 86. 6%. 因此 , 确定诱变剂量为 硫酸二乙酯处理 40 m in.

图 3  紫外线诱变剂量的确定
Fig 3  Deter ination of mutation dose of UV . m

图 4  硫酸二乙酯诱变剂量的确定
Fig 4  Determ ination of mutation dose of diethyl sulfate .

2. 4. 2   突变菌株的筛选

以 HC 值提高 30%以上或菌落形态发生明显变异为筛选指标 , 共筛选到 97 株突变株 , 其中紫外诱变 筛选到 63 株 , 硫酸二乙酯诱变筛选到 34 株 . 将突变菌株按每瓶 1. 2 × 个孢子接种到 CMC 液体培养基 10 中 , 40 ℃、120 r?m in 摇床培养 5 d, 测定粗酶液 CMC 酶活力 , 最后筛选出 29 株 CMC 酶活力提高 30% 以上的菌株 , 对其进行编号并计算相对于原始菌株的酶活增长率 , 结果见表 2. 在筛选过程中发现 , 部分 菌落形态明显突变的菌株虽然 HC 值不高 , 却有较高的产酶能力 , 例如菌株 M Y008、 Y013; 而且许多 HC M 值较高的突变株其 CMC 酶活力普遍偏低 , 如 M Y002 菌株 . 因此在筛选时 , HC 值只是筛选指标之一 , 应 同时观察菌株是否有产生其他变化 , 最终通过测定酶活来准确判断其产酶能力的大小 . 表 2  突变菌株复筛结果 Tab. 2  Rescreen in g results of m utan ts
菌株编号
M Y001 M Y002 M Y003 M Y004 M Y005 M Y006 M Y007 M Y008 M Y009 M Y010 M Y011 HC 值 4. 17 5. 00 4. 50 3. 43 1. 17 1. 40 1. 28 1. 00 1. 40 1. 38 4. 80
- 1 7

菌落特征 透明圈大且明显 透明圈大且明显 透明圈明显 菌落较大 , 透明圈明显 菌落形态变异 菌落形态变异 菌落形态变异 菌落形态变异 菌落形态变异 菌落形态变异 透明圈大 , 呈半透明

CMC 酶活力 / I ?mL U 0. 176 0. 170 0. 185 0. 231 0. 213 0. 203 0. 228 0. 263 0. 222 0. 182 0. 231

-1

酶活增长率 / %
36. 4 31. 8 43. 4 79. 1 65. 1 57. 4 76. 7 103. 9 72. 1 41. 1 79. 1

?454?
  (续表 2 ) 菌株编号
M Y012 M Y013 M Y014 M Y015 M Y016 M Y017 M Y018 M Y019 M Y020 M Y021 M Y022 M Y023 M Y024 M Y025 M Y026 M Y027 M Y028 M Y029 HC 值 4. 00 1. 33 2. 00 2. 67 2. 80 1. 30 2. 75 2. 71 3. 00 2. 40 2. 35 1. 43 2. 82 2. 46 1. 50 1. 42 2. 64 3. 43

福州大学学报 (自然科学版 )

第 38 卷

菌落特征 透明圈大 , 呈半透明 菌落形态变异 菌落形态变异 透明圈大且明显 透明圈大且明显 菌落形态变异 透明圈大且明显 透明圈大且明显 透明圈大 , 呈半透明 透明圈大 , 呈半透明 透明圈大 , 呈半透明 菌落形态变异 透明圈大且明显 透明圈大 , 呈半透明 菌落形态变异 菌落形态变异 透明圈大且明显 透明圈大且明显
-1

CMC 酶活力 / I ?mL U 0. 212 0. 275 0. 209 0. 251 0. 270 0. 204 0. 174 0. 170 0. 192 0. 179 0. 233 0. 239 0. 198 0. 249 0. 222 0. 210 0. 176 0. 186

-1

酶活增长率 / %
64. 3 113. 2 62. 0 94. 6 109. 3 58. 1 34. 9 31. 8 48. 8 38. 8 80. 6 85. 3 53. 5 93. 0 72. 1 62. 8 36. 4 44. 2

   : 原始菌株 CMC 酶活力为 0. 129 I ?mL 注 U

; HC 值 =透明圈直径 /菌落直径

2. 4. 3   突变菌株的传代稳定性实验

将上述 29 株突变株传代 , 并分别测定第 6、8、10、12 代的 CMC 酶活力 , 结果见表 3. 计算各菌株的 偏差平方和 , 其数值大小代表各代酶活的波动性 , 可以直观反映菌株传代稳定性 , 数值越小说明菌株传代 稳定性越高 , 反之亦然 . 由表 3 可知 , 绝大多数突变株随着传代次数的增加 , 产酶能力不断下降 . 综合比 较 , 菌株 M Y004 传 代 稳 定 性 较 好 , 在 传 代 12 代 时 仍 能 保 持 较 高 的 酶 活 , 其 CMC 酶 活 力 为 0. 233
I ?mL U
- 1

, 比原始菌株 M Y提高了 80. 6% , 可作为后续发酵产酶的生产菌株 .

表 3  突变株传代稳定性实验 Tab. 3  Exper i en ta l results of in ocula tion stab ility of m utan ts m
菌株编号
M Y001 M Y002 M Y003 M Y004 M Y005 M Y006 M Y007 M Y008 M Y009 M Y010 M Y011 M Y012 M Y013 M Y014 M Y015 CMC 酶活力 / I ?mL U
-1

第 1代
0. 176 0. 170 0. 185 0. 231 0. 213 0. 203 0. 228 0. 263 0. 222 0. 182 0. 231 0. 212 0. 275 0. 209 0. 251

第 6代
0. 165 0. 132 0. 148 0. 231 0. 176 0. 107 0. 101 0. 200 0. 074 0. 134 0. 158 0. 171 0. 261 0. 204 0. 188

第 8代
0. 158 0. 134 0. 143 0. 228 0. 168 0. 108 0. 134 0. 206 0. 080 0. 129 0. 162 0. 185 0. 222 0. 206 0. 215

第 10 代
0. 147 0. 128 0. 141 0. 230 0. 179 0. 105 0. 110 0. 197 0. 075 0. 132 0. 156 0. 191 0. 198 0. 203 0. 206

第 12 代
0. 137 0. 131 0. 146 0. 233 0. 177 0. 101 0. 098 0. 198 0. 072 0. 129 0. 159 0. 176 0. 194 0. 207 0. 201

偏差平方和
9. 25 × 10 1. 22 × 10 1. 34 × 10 1. 32 × 10 1. 22 × 10 7. 67 × 10 1. 18 × 10 3. 20 × 10 1. 73 × 10 2. 10 × 10 4. 20 × 10 1. 02 × 10 5. 37 × 10 2. 28 × 10 2. 26 × 10
-4 -3 -3 -5 -3 -3 -2 -3 -2 -3 -3 -3 -3 -5 -3

第 12 代菌株酶 活增长率 / %
6. 2 1. 6 13. 2 80. 6 37. 2 - 21. 7 - 24. 0 53. 5 - 44. 2 0 23. 2 36. 4 50. 4 60. 5 55. 8

第 3期
   (续表 3 ) 菌株编号
M Y016 M Y017 M Y018 M Y019 M Y020 M Y021 M Y022 M Y023 M Y024 M Y025 M Y026 M Y027 M Y028 M Y029

高珍娜 , 等 : 纤维素降解菌的筛选与诱变育种

?4 5 5 ?

CMC 酶活力 / I ?mL U

-1

第 1代
0. 270 0. 204 0. 174 0. 170 0. 192 0. 179 0. 233 0. 239 0. 198 0. 249 0. 222 0. 210 0. 176 0. 186

第 6代
0. 156 0. 199 0. 176 0. 131 0. 177 0. 164 0. 128 0. 224 0. 195 0. 182 0. 215 0. 108 0. 173 0. 180

第 8代
0. 152 0. 191 0. 174 0. 134 0. 165 0. 147 0. 207 0. 216 0. 200 0. 177 0. 207 0. 101 0. 173 0. 182

第 10 代
0. 152 0. 180 0. 171 0. 128 0. 164 0. 143 0. 194 0. 191 0. 200 0. 180 0. 203 0. 105 0. 176 0. 177

第 12 代
0. 147 0. 177 0. 171 0. 131 0. 158 0. 134 0. 197 0. 188 0. 197 0. 174 0. 200 0. 098 0. 174 0. 176

偏差平方和
1. 12 × 10 5. 47 × 10 1. 88 × 10 1. 24 × 10 7. 31 × 10 1. 30 × 10 6. 03 × 10 1. 91 × 10 1. 80 × 10 4. 04 × 10 3. 25 × 10 9. 22 × 10 9. 20 × 10 6. 48 × 10
-2 -4 -5 -3 -4 -3 -3 -3 -5 -3 -4 -3 -6 -5

第 12 代菌株酶 活增长率 / %
14. 0 37. 2 32. 6 1. 6 22. 5 3. 9 52. 7 45. 7 52. 7 34. 9 55. 0 - 24. 0 34. 9 36. 4

3  结语
通过 CMC 平板初筛和 50 ℃ 培养 , 筛选得到 1 株性能优良的霉菌 M Y出发菌株 ; 通过进一步培养条件 优化 , 确定 M Y菌株的最适 CMC 培养基 pH 为 6. 0, 培养温度为 40 ℃, 最佳产酶时间为 5 d. 对 M Y菌株分 别采用 7 m in紫外线照射和 40 m in 硫酸二乙酯处理 , 通过测定 CMC 酶活力和传代稳定性实验 , 最终获得 1 株 CMC 酶活力较高的 M Y004 突变菌株 , 其 CMC 酶活力比出发菌株提高了 80. 6%. 参考文献 :
[ 1 ] A rnold L D , M ichael N , David W. Cellulose, clostridia and ethanol [ J ]. M icrobiology and Molecular B iology Review s, 2005, 69 (1) : 124 - 154. [ 2 ] 张平平 , 刘宪华 . 纤维素生物降解的研究现状与进展 [ J ]. 天津农学院学报 , 2004, 11 ( 3 ) : 48 - 54. [ 3 ] 王淑军 , 扬从发 , 陈 静 . 用于降解秸秆的纤维素酶产生菌的筛选研究 [ J ]. 粮食与饲料工业 , 2001, 12: 21 - 23. [ 4 ] 沈 萍 , 范秀容 , 李广武 . 微生物学实验 [M ]. 3 版 . 北京 : 高等教育出版社 , 1999: 124 - 126. [ 5 ] 兰时乐 , 李立恒 , 王 晶 , 等 . 微波诱变结合化学诱变选育纤维素酶高产菌株的研究 [ J ]. 微生物学杂志 , 2007, 27 ( 1 ) : 22 - 25. [ 6 ] 张惟杰 . 糖复合物生化研究技术 [M ]. 2 版 . 杭州 : 浙江大学出版社 , 1999: 38. [ 7 ] 李日强 , 辛小芸 . 天然秸秆纤维素分解菌的分离选育 [ J ]. 上海环境科学 , 2002, 21 ( 1 ) : 8 - 11. [ 8 ] 孙晓华 , 罗安程 . 家禽养殖场废弃物处理技术的研究进展 [ J ]. 环境污染治理技术与设备 , 2003, 4 (7) : 18 - 21. [ 9 ] 朴 哲 . 高温堆肥的物质转化与腐熟进度关系 [ J ]. 中国农业大学学报 , 2001, 6 ( 3 ) : 74 - 78. [ 10 ] 崔正忠 , 肖玉珍 . 检测孢子菌类稀释平板改进方法的研究初报 [ J ]. 东北农业大学学报 , 2000, 31 ( 1 ) : 32 - 35. [ 11 ] 王 璞 , 田 沈 , 王 丹 , 等 . 高耐毒性酿酒酵母的紫外诱变选育 [ J ]. 可再生能源 , 2007, 25 (3) : 31 - 34.

(责任编辑 : 郑美莺 )


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