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质粒DNA 小提中量试剂盒


四、操作步骤 平衡 DNA 吸附柱(此步骤可提高硅胶介质吸附 DNA 效率,可在使用本试剂盒当天任何时间操作 )
在 DNA 吸附柱-MD(置于 2 ml 离心管中)中加 500 μl Buffer BL,室温 12,000×g 离心 1 min,弃废液,将 DNA 吸附柱-MD 放回 2 ml 离心管中。

质粒 DNA 小提中量试剂盒

一、产品简介
采用 SDS 碱裂解法,结合硅胶膜选择性吸附 DNA 的方法,适合 4-16 ml 细菌培养物中提取多至 80 μg 质粒 DNA。纯化的质粒 DNA 适合用于酶切、PCR、测序、转化和转染等分子生物学实验。
从 1-4 ml 细菌培养物中提取质粒 DNA,请选择质粒 DNA 小量提取试剂盒 Cat#DK301。

细菌收集、裂解和中和
实验准备:第一次使用前,将试剂盒携带的 RNase A1 全部加入 Buffer P1 中。 检查 Buffer P2 是否析出白色沉淀,如有沉淀在 37℃放置数分钟,沉淀溶解后恢复至室温使用。 1. 用干净的 2 ml 离心管,室温 12,000×g 离心 1 min,收集 4-16 ml 细菌(可以离心后弃上清,加入菌液再离心; 如此重复,直至收集所有菌液);弃尽上清。 2. 加入 500 μl Buffer P1(含 RNase A1) ,Vortex 震荡或者用 Tips 充分悬浮细菌。

二、试剂盒组成和储存
组成内容 RNase A1


DK302-01 (50 次) 120 μl 30 ml 30 ml 30 ml 40 ml 19 ml 16 ml 50 套 50 个 15 ml 1份

3. 加入 500 μl Buffer P2,缓慢翻转离心管混合均匀,直至溶液呈浅黄色透亮状。 4. 立即加入 700 μl Buffer P3,缓慢翻转离心管混合均匀,形成紧实的大团状凝集物后(约摇晃 15 次) ,快速剧 烈摇晃 3 次使凝集物呈松散状;室温 12,000×g 离心 5 min。 ▲如果离心上清为浑浊状或者有细小的悬浮颗粒, 将离心管放入冰水浴中 静置 5min,12,000×g 离心 5 min。

Buffer BL Buffer P1 Buffer P2 Buffer P3 Buffer WA Buffer WB
§ §

DNA 结合
5. 吸取≤650 μl 步骤 4 中的离心上清,转入 DNA 吸附柱-MD 中;室温 12,000×g 离心 1 min,弃废液,将 DNA 吸附柱-MD 放回 2 ml 离心管中。 6. 重复步骤 5,直至处理完步骤 4 中的离心上清。

DNA 吸附柱-MD 1.5 ml 离心管 TE
* ※

说明书
§

RNase A1: 50 mg/ml, -20℃长期保存;第一次使用前将RNase A1全部加入Buffer P1中,于4℃保存。 Buffer WA和Buffer WB,使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇或者95%乙醇,混合均匀。 TE:10 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, pH 8.0(25 °C)。

洗涤
实验准备:第一次使用前, 按试剂瓶所示体积 在 Buffer WA 和 Buffer WB 中加入无水乙醇或者 95%乙醇。 7. 在 DNA 吸附柱-MD 中加入 500 μl Buffer WA ,室温 12,000×g 离心 1 min,弃废液,将 DNA 吸附柱-MD 放



除RNase A1和Buffer P1(已加入RNase A1)外,其他组成成分于室温储存。

三、注意事项
1. Buffer P3 和 Buffer WA 含刺激性化合物,避免沾染皮肤、眼睛和衣服、谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛, 立即使用大量水或生理盐水冲洗沾染处,必要时寻求医疗咨询。 2. 使用后应及时盖紧试剂瓶盖子,以免影响下次使用效果。 3. 操作步骤 2,充分悬浮细菌,无可见的块状菌团,不然会影响裂解效果。 4. 操作步骤 3,缓慢翻转离心管,以免机械力打断基因组 DNA 而导致最后纯化的质粒 DNA 中有基因组 DNA 污 染,同时避免打断质粒 DNA,保持其完整性。 5. 操作步骤 3,溶液呈透亮后,需立即加入 Buffer P3,避免质粒 DNA 长时间暴露于 Buffer P2(含 NaOH,强 碱性环境)中完全变性为单链 DNA 后无法复性恢复为超螺旋状态。 6. 操作步骤 4,形成紧实的大团状凝集物前需缓慢摇晃离心管,避免机械力打断基因组 DNA 和质粒 DNA;之后 快速剧烈摇晃 3 次将凝集物打散,有助于充分释放质粒 DNA,从而提高产量。 7. 操作步骤 10,室温放置 1-2 min,有助于提高 DNA 洗脱效率,从而提高产量。

回 2 ml 离心管中。 8. 在 DNA 吸附柱-MD 中加入 500 μl Buffer WB ,室温 12,000×g 离心 1 min,弃废液,将 DNA 吸附柱-MD 放 回 2 ml 离心管中。重复此步骤。 9. 室温 12,000×g 离心 2 min。

洗脱
实验准备(可选) :65℃预热 TE 或者去离子水。 10. 将 DNA 吸附柱-MD 转入试剂盒携带的 1.5 ml 离心管中,向 DNA 吸附膜的中央加 100-300 μl TE 或者去离子 水,室温放置 1-2min,室温 12,000×g 离心 1 min。
▲65℃预热 TE 或者去离子水,可以提高洗脱效率。 ▲离心结束后将 1.5 ml 离心管中的 洗脱液 加到吸附膜的中央,重复此步骤,可 以提高洗脱效率。


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