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BAC克隆及复杂基因组文库技术


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1 生物技术 8 6  - 簖  ( )1 :
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r />B AC克隆 及复杂基 因组文库技术 

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李 一 琨 
( 山 走 掌 生 命 科 学 学 院 , 州 , 12 5  中 广 507 ̄

B C( 菌人 工染 色体 ) A 细 克隆 技 术是 复 杂 基 因组 研 究中不可缺 少的I具 , 有关 基  因组 研 究的许 多技 术 彝 是 由 B AC 为 基础 发展 起 来 的 , 包括 大 片鹱 基 因组 文 库 的构  建、 重叠群 的构建、 基 因洲序 及 圉位 基 因克隆 等 , 又产 生植物 转基 因的 B 奎 后 AC克詹  载体 , 在人 类、 枷 、 糟 等 基 因组 研 究 中已广 泛应 用 . 得令 人 瞩 目的 成 就 , 这 动 植 取 该文 
将就这 些研 究技术 及进展 作一 埭述 。   关 键词 :A B C克 主堡, 詹, 基因组, 擅生挂岱  


l B   AC 克 隆载体 的形 成 背 景  
作 为遗 传学 科研 究 的 重要 内容 , 因 组  基
文 库 的 概 念 旱 在 七 十 年 代 就 已 提 出 ( l k  Ca e r 等 ,9 6 L ,9 8年 Ma it 17 )】 1 7 ] nai 计 了 随 机 片  s设

行 克 隆外 源 D NA 的 位 点 选 择 : 个 携 带 有  一 细 菌 噬 菌体 C s 位 点 的 S cI 段 ( 0 b ) oN a  片 4 0 p  插 人 到 质 粒 的 S cD a  NA 的位 点 选 择 : 个 携  一

带 有 细 菌噬菌 体 C s 位 点 的 Sc oN a l片 段 
( 0 b ) 人 到 质 粒 的 S c 位 点 , oN 位 点  40p 插 aI Cs

段克 鹰 的方 案 。在此基础 上文库 载 体 的发展  经 历 了三个 阶段 ( 1 , 二 代 载 体 的代 表  表 )第 为 YAC、 AC及 B P AC 等 , 著 的 特 点 为容  显 载极大、 分离较 难 、 合性 等 , 近 发展 形 成  嵌 最 的 BB I AC及 T AC等 作 为第 三 代文 库 载 体 ,   不仅 具有 第二 代载 体 的所 有特 征 , 而且 具 备 
了植 物 的 转化 功 能 。 文 介 绍 的 B 本 AC载 体 就 

的 重要 性在 于它可被  噬蕾体 末 端醇 切 割 为  粘末端 , 因而能象 传统 的粘 粒 一样 在 克 隆 后  包 装 、 染 而成 为平 均 容 量 4 k 转 0 b的 高 效 克  隆 载 体 , 时也 为指纹 图谱 的 构建 带 来便 利  同
条 件 ; 一 个 包 含 有 细 菌 噬 菌 体 Pl x 位 点 另 l P o   的 4b 2 p片 段 插 人 到 C s 与 克 隆 位 点 间 的  oN

Ca位 点 , l 其中 [x o P位 点在 体 外 P C e蛋 白 Ir   及 Lx o P寡聚棱 甘酸 的作 用下 有 C s 类 似  oN 的 功 能 , 且引起 环化 及保 证载 体 的 单 体 形  并
式 。 载 体 上 的 rp oi 基 因 控 制 复 制 的 起  e E、 r S

是在 这个 不断的发展 过程 中 , 尤其 是 在 YAC   和 P 载 体优 缺 点的 基础土 逐 步 形 成和 完善  1
起来 的 。  

2 B   AC克 隆载体 
Hi a i (9 2  ̄ 掏建 的 B r k 等 19 ) J o AC克 隆载 
体 一 AC 0 L 是 在 大 肠 杆 菌 F 因 子 质 粒   B 18

使 而 pr p r aA、 aB基 因维 持 质 粒 的 低 拷 贝 数  ( ~2个/ 1 细胞) B   AC载 体以氯 霉素抗 性 基 
因 为选 择 标记 , 为进 一 步 方 便 克 隆 的 筛 选 ,   Ku 等 ( 9 2  在 p O l质 粒 上 的 克 隆 位  n 19 ) F S 点 引 人 p M 3 的 lc 基 园 片 段 成 为  GE Z aZ p AC-[c 体 以进 行 蓝 白斑 筛 选 。 j —  B -a载 Mei a J 1 9 ). 同 时 加 人 了 L c报 告 基 因 和  E( 9 7 _等   a

-p O1 l MB   基础 上掏建 的 。插人到 质粒 S l 3 a   I位 点 9 b 7 p的 合成 寡 棱 扦 酸 片 段 包含 T  
s6启 动 子 片 段 , 十 克 隆 位 点 ( n p 两 HidⅢ 、  

B mHI 以及其 它一些稀 有酶 切位 点 , 以进  a ) 用

n o标 记 , 者使得 可 通 过 G4 8选 择 转 化  e 后 1
子 

收 稿 日期 .0  0 — 2  1 9一 5 5

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裁 体  构建年甩 宿主





术 

8卷 6 期 

槛蕃毋瓶竟隆虢体殛特 点  
嵌台性 DNA 制 备 植 物 转{ 能 力  艺

窖 裁 ( 、 罄 定 性  妯 



定条 件 的制 约 , 步 成 熟 的 凝胶 场 电苏分  逐

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B m}   ● Ⅱ

离 和部 分酶 切 给消 化技 术带 来新 的生 机 。 、 二  
大 肠 杆 菌 率 身 基 因 组 织 只 有 4 , 制 很 大  Mb 复 的B AC 似 乎 不 可 能 ; 、 激 法 转 化 限 制 大  三 电 片 段 ONA 进 人 大 肠 杆 菌 。作 为 基 因 组 文 库 

、 、 …

 

—叫 f  

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的 重要 补 充 部 分 . o t ( 叠 群 ) C ni 重 g 的构 建和  染 色 体 步考 一样 己 成 图位 基 因克 隆 的基 础 。  

所谓 B AC重 叠 群 就 是 指 用 D NA 分 子 标 记  筛选 B AC文库 而 分离 到 的一 系 列重叠 克麈 ,  
两 个克 隆之 间的 空 隙可 以通 过染色 体步 查或 
RARE( e   s i a tr s r ci n e z m e [   Re A a ss n   e t ito   n y )]  

技 术来填 补 。 期 BA 克隆 的应 用是在 特异  早 C
啪 E  

区阃 的文库 构 建上 , 人类构 建 的 2 2 如 、2号特  异 染色体 B AC文库 。 叠群 的构 建需要 大量  重 的工作 , 困难 主要 集 中于 每~ 走 步 中末端 探  针 的获 得及 走 步 的方 向 , 端 特异 搽 针 的分  末

囤 

B AC戴 体 的第 一 次掏 蔓 

3 B   Ac 文 库 及 区 段 C ni ( o t 重  g

叠群 )  
大 片 段 的 核 基 因组 D NA 需 要 经 过 消 化  成 为 一 定 长 度 的 片 段 , 要 的 操 作 方 法 有 几  主

离 早期是 采 用 质粒 拯 救E和反 向 P R  。   C [两种 
在 YAC 上 广 泛 应 用 的 技 术 , 期 又 发 展 了  后 Vetrte( ly 等 ,l 9 ) 或 TAI —   coet Ri e 9 0  L P R( i C L u等 . 9 5 L 法 , 1 9 )9   而 两 步 ” 交 法  杂

种 : 、 切 点 限制 性 酶 的部分 消化 ; 、 一 多 二 限制  性 内切 酶 与 甲基化 酶 同时作 用 ; 稀有切 点  三、
限 制 性 酶 的 使 用 , Nol识 别碱 基 为 8个 ) 如 t(  

( k mua等 , 9 7 L Na a r 1 9 )] 使 用 大 大 减少 了  的   走 步过 程 中杂 交 阳性 克隆 的 数 且, 含 有 高  给 度 重复序 列 的 B AC文库 研究 工作 带来便利 。  

或 S i 识 别 碱 基有 1 f Z(   3个) 这足以产生足够  , 大 的 DNA 片段 。酶 解产物 在脉 冲场凝 胶电  泳上 分 离 后用 低融 点琼 脂糖 回收 , 外源 D   NA 片段 同裁 体 之 间的连 接 产物 电激 法转人大肠  杆 菌 受 体 菌 , 交 筛选 阳性 克隆 。B 杂 AC文库 
插 人 片 段 在 1 0 3 0 b 不 如 YAC 文 库 的  0 ~ 0k ,

4 B   AC 文库 快 速 鉴 定 
虽 然能 够 容 载 较 大 的外 源 片段 (  ~  1O O 3 0 , 相对于 整 个 生 物基 因 组来说 , 0 )但 比如 人  类基 因组 估 计 约有 3 0 MB, 平均 B 00 在 AC插 

大 , 能 原 因有 : 、 片 段 D A 的售 备 受  可 一 大 N I

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李 一琨 :AC克 隆及复 杂基 因组 文库 技术  B 人 片 段 为 l 0b并且 插 人 事 为 8  的 条件  lk 4
下 , 盖整 个 基 因 组文 库 需 要 3 20 覆 , 0 0个  

3  

主 中复 利稳 定 , 般保 持抵 拷 贝 ( ~2个/ 一 1 每  细 胞 ) 因此 减少 了质粒 所 携带 D , NA 片段 的  重 组 , 外 源 片 段 保 持 稳 定 , 证 实 鸡 的  使 巳 B AC 克 隆经 过 1 0代 传代 后 没有 发 现插 入  2
片 段 的 变 化 ( i a rR.19 )l ; 、 Zmre  9 5 E] 五 YAC   Z  

B AC 克隆 。要 获得感 兴趣 的克 隆 , 棘要 进 行  文 库 筛 选  B AC 克 隆的 筛 选 主要 有 三 种形  式 : 、 R( 一 HD 高密度 影 印膜 ) 杂交 筛选 , 备  制
全部 B AC 克 隆 D NA , 高 密 度 列 阵 格 点 布  以 在 尼 龙 膜 上 , 个 克 隆 都 有 固 定 的 x、 座  每 Y

克 隆 中普 遍 存 在 2  ~ 4  的 嵌 合 现 象 使  0 0 其成 为 Y AC 丈库 的 最 大 缺 路 , 这主 要 是 由 
自连 接 和 同 源 重 组 形 成 的 。 B 而 AC 克 隆 中 几 

标, 然后 用杂 交方法 筛选 ; 、o rh r 二 S u ten杂交  缔选法 , 一平板组成的样品池经过 D   每 NA 翻 备、 电泳、 转膜后 进行 杂 交和放 射 自显影 ,   确 定 了阳性克 隆的样 品池后 再通过 菌落原位 

乎不 存在嵌 合 现象 , 要原 因有 下面两 点 : 主 第 


是 基 于 遗 传 背 景 的 研 究 程 度 , 大 肠 杆 菌  在

中 巳可  获 得 重 组 缺 陷 的 菌 株 , 母 中 目 前  酵

杂 交 或 行 列 杂 交 确定 阳性 克 隆; 、 C 筛  三 P R
选 , C 筛选 既快 速 又 准确 , 良好 的 行列  PR 而 榉 品 池 组 合 是 筛 选 的 基 础 。S uc i “ h i 等[  h f 9 7 使用的 两步 P R 鉴定技术 值得 一提 ,  9) 1 C   它 可使 工作者 在一 天内找到所需 的克 隆 .首  先将 9 , 0 6 0 0个 克隆分 为 十组 , 即每 组 9 6 0 , 0  个 , 一步的 P R 是针 对每组的 9 6 0混合  第 C ,0 池 DNA 进 行 , 二 步 的 P R 针 对 4 B   第 C D AC DNA 混 全池 进 行 , 0 1 0个 9 6孔 平板 的 横 向  及 纵 向样 品  混 合 池  别为 第 一 及第 二组  分 合. 而每 块 9 6孔板的横 向及纵 向为第三 及第 
四 组 合 . 样 就 可 通 过 5次 扩 增 结 果 快 速 鉴   这
定朔 性 克隆 。  

还 没有 很 好 地解 决 , 因为 重 组惨 复 本 来就 是 
真 校 基 因 的 一 种 保 护 反 应 , 组 缺 陷 很 可 能  重

会诱 导真 核 基因的 另一 种替代 方 式带来 新 同  题 。 二 是酵 母不具 备类 似大 脑杆 菌的  第 免疫  性  只 允 许 一 个细 胞 接受 一 个 外 谭 D   即 NA 分子 ; 、 六 低颡 率的 “ 共克 隆  给物理 图谱 构建  和经 典遗 传 图谱与物 理 图谱 间的转 换带 来极  大 的优 越 性 ; 、 隆到 B 七 克 AC藏 体上 的外 谭  片 段 可 以 直 接 进 行 测 序 以 获 得 末 端 序 列  B AC发 展 的早 期 就 巳构 建 了 人的 部分 B   AC
基 因 组 文 库 (hz y S i a等 , 9 2 , 目 前 巳 构  u 19 ) 到

建 的 完整 B AC 丈 库 的 有 水 稻 ( m 等[】 Ki ”,  
1 9 ) 高 梁 ( o 等  】 、 ( a L 等 [ l 95 、 w o )牛 Ci   】, 5  19 ) 9 5 ,以 及 人 类 全 基 因 组 ( m 等 [ 】 Ki 1, 6 

5 B   AC克隆载体 的优 点与发 展 
B AC克隆虽然 没有 Y AC克 隆的容藏 量 
大   前 者 为 1 0~ 3 0 b 后 者 为 l 0~    0 0k , 0

1 9 ) 在 此基 础上牛 豆 、 96 。 拟南 芥 、 西红 柿和 莴  笋 等也 构 建 了部分 B AC文库 。  

i 0 k ) 但 其有 很多 优越 性 : 通 过 电 激  00b , 一、 法将 大质粒 转化 大肠 杆菌 比酵母 的转化 率提  高 了 l一 l 0倍 , 0 0 这就 大 大缩 小 了用于 构 建 

6 具 有 植 物 转 化 能 力 的新 型    
BAC 载 体 
第二 代 载体 的研究 工作者 梦寐 以求 的就  是 如何将 克 隆有外 源大 片段 的载体 直接送 人 
列 植 物 细 胞 中 去 研 究 它 的 表 型 转 变 , 不 必  而

文库 所 需的 D NA 量并 特 别适 合于 那些 目的 
D NA 资 源有 限的 文库构 建 ; 、 交筛 选 文  二 杂 库 对 于 细胞 中存 在的 单 拷 贝 p AC 载体 都  B 是 可行的 ; 、 三 YAC是 以线 性 分 子 存 在 , 面  B AC载 体是 以环 登超螺 旋状 态存在 , 这就 使  得 其 分 离操 作起 来 相对 窖易 , 使用 常 规的 碱  裂解 即可 敛 到 ; B 四、 AC 载体 在 大肠 杆 菌 宿 

通 过 繁 琐 的亚 克 隆 至 常规 的植 物 转 基 因 载 
体 。 植 物 基 因 工 程 中 对 Ti 粒 的 研 究 表 明 , 质   v i 及 T- D r区 - NA 区 边 界 是 T- DNA 转 移    ̄

和 整合 必 不 可少 的 元件 , 界 区各有 一 个 高  边 度 保 守 的 2b 5 p正 向 重复 序 列 , 中 右 边 界  其

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术 

8卷 6掰 

又至 为重 要 , 的缺 失直 接导致 T D 它 — NA 转  化 功 能 的 丧 失 , 其 靠 近 的 另一 十 2 b 与 6 p驱 
动 子序 列 ( oD) 定 转 化 的 效 率 。 决 实验 证 明 只 

NP T一 Ⅱ及 HYG 特 异 探 针 杂 交 的结 果 表 明 

获得 r完整 T— D NA 区转 移的 植株 , 同时 为 

了评价 转基 因植 株 的稳 定性 , 分离 群的性  R1
状 分柝 同样 符 舍盂 德 尔遗 传分 离 规律 。这对  于 植 物 转 基 因 工 程 中 外 源 片 段 的 限制 ( <  2 k ) 疑是 一 次 巨 大 的 飞 跃 , 且 他们 还  4b 无 而
验 证 了 Ti 粒 T— D 质 NA 转 移 理 论 的 正 确 

要 在 左 右 边 界 存 在 的 情 况下 , 中间的 T 其 —  D NA 序 列 都 可 转移 并整 舍 至植物基 因组 。 因  此 受 Ti 粒 T— D 质 NA 区 转化 能力 的影 响 ,   新 一 代 的 载 体 应 运而 生 。B -B I AC和 TAC   ( 耀 光 _ , 9 5 即 是 这 方面 的代 表 , 们  刘   _ 19 ) 它 的 共 同特 点是 不 仅 可 作 为大片段 D NA 的克  隆 载 俸 , 且 也 能 成 为大 片段 D 而 NA 的植 物 
转 基 因 载 体 。其 中 B - B I AC( 双功 能 B   即 AC

性。 同上 述 B AC及 P AC等载 体 的改造相 比 ,  
YAC 载 体 植 物 转 化 能 力 的 改 造 要 困 难 的 多  f eh r  等 ,9 7 t] 后 者 在 两 次 转 化 过  G ra dA 19 ) ,   程 中 利 用 酵 母 的 同 源 重 组 体 系 , 酵 母 的 两  在

载 体 系统 ) 在 B 是 AC 克隆 载体 的基础上通 过  插 人 T— DNA 边 界 区( od r 改造而 成 , b re ) 可  通 过 根 瘤 农 杆 菌 直 接进 行 植物 转化 ( 4 , 图 )  s c 基 因来 诼 于 枯 草杆 菌 , aB 赋于载 体正选 择  特性 , 是 高 浓度 蔗糖 ( 2 ) 养基上可 以 它 >   培  

臂上 引人 植 物 选 择 基 因 GUS H 、 YG 及 N T P  等, 以及 能在 酵 母 中进 行 拷 贝数扩 增 的着丝 
粒功能 启 动子 p GM 。 eh r  等 通 过 微 弹  G r adA

法 将 YAC 改 造 体 轰 击 烟 草 悬 浮 细 胞 系 , 遗  憾的 是 目前 还未 有 获得 大 片 段 D NA 转基 因  植株 的正 式报道 。这 类载 体 不仅 简化 了圈位  基 因 的克 隆 过 程 , 且 把 目的 基 因向 转基 因  而
植株 的互 作性 研 究迈 进 了一大步 。  

分 解 蔗 糖 以 杀 死 生 长 中 的细 菌 。Ha i.   mB n o
等 - 1 9 ) 一 次 将 插 入 1 0 b人 类 蒸 因  ] 96第  ( 5k 组 外 源 片段 的 双 元 BB I AC 载 体 导 人 烟 草 ,  
H】I l r   血

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圉 1 植物转化能力的新型 B C载体  A

7 问题 与 展望   
分子 生 物 学 的研 究对象在从低等生 物向 

还 存 在有 稳 定性 差 、 易分 离 及转 化 辜低 等  不 特 点, 无疑 为后者 的解 决提 供 了前 提 , 但 尤其 

是具有植 物转 化能 力 的第 三 代载体 成功地解 
决 了突变 型与 野生 型 闻 的互朴 实验 。这些新  技 术、 思 维 不 仅 业 已成 为 当今 载体 改造 工  新 作 的热 点 和 前沿 , 且 必将 为二 十一 世纪 生  而
命 科学发 展注 人 新 活力 。  

高 等 生 物 不 断 的 发 展 中, 了适 应高等 行物  为
基 因组 庞 兀 , 织 复 杂 及作 用机制 精细 等方  组
面 的 特 点 , 的 研 究 方 法 层 出不 穷 。 新 图位 基 因  克 隆 ( p b s dco ig 即 是 其 中 的 一 种  ma ~ a e ln ) n 新 策 略 , 主 要 是 分 离 那 些 定 位 于 遗 传 图 谱  它

而 编 码 产 物未 知 的 重要 表达功能 基因 。圈位 

参 考 文献 
L ] lr = 1 Cak L-C r o ,J eI 9 6 9 l l 1 ab n ,C  ,17 , t —     J 9 0 [ ] r a【   r c  2 Hi k stB ueB-un   o gJK,e t  
Sc LUS^  1 9 9 2,8 8 9 9I 7 4— 8 7 79  

基 因 克 隆的重 点集 中于 高密度分 子标记物 理 
图谱 的 获 得 及 大 片 段 克 隆文库的构建 , 前者  主 要 是 通 过 RAP s D -P R 及 AE P  D、D C Ls 等获得 , 而人 工 染 色 体 系统 簸体的构 建虽 然 

po  a1 e d rcN t A.   a

3 KI u J hz y J m   S lu aH-  

扣n     - 【 【 u li c s g P J e a.N c  ̄A i   e d

Re s,l 2, 99 2O: 。自 1 3— 1 8   05

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李 一 琨 : AC 克 隆 及 复 杂 基 因 组 文 库 技 术  B


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L 6 KI     ,B r n B W .¥a a   】 j m u J ie     r ]p k T.e  t Ge o c . ta   n m*   s
I 9 3 .】 9 6. 4 2 3— 2l   a
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r ]      .Wh g r     G n mis 9 5 2 } 7 — 6 :   L uY F Ri   F n R e o c .1 9 , 5 6   4 8 
h  Na a u a S .A s S wa S .O h i   . j  ̄ m z  a a   m do N  

r 7 Lu Y G,NoJi   .Al d 。v T… t 】 T e 1] 【     r rM ho £ T    n h 
P a IJur a ,1 9 7( : 51 3 8 l n o n l 9 5, 2) 3 — 5   FI Ca o 8l r!M  .Ann F Ca dc  H  er_ n tcL  t i P o   t A一       , cNal    
S U S , l 9 9 99 — 9 7   “ A g 6, 3: 75 9 9

Ge e . i 9 2 4 n t 9 7. 5  61 一 6   _ 20

1 ̄ h i   l u h A, z m  Y s i  e a S cJ i     uJ A. ohk K. t 】 e e   7  i   .G n ,19 . 9
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1  ̄J m , . e i c O e o c .】 9 , 2 2 : 1   Zm e R V r n r  G n mi 2 rd   s 9 7 4 ( )2 7  


L 9 Geh  ̄ A. e e 1 J ra Jf y^ M . rnL K  9 . 1 6 . fr Kae     1 7 1 ( ) 9  
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2 6 2 

( 接第 2 页 ) 上 1  

EXTR ACTI ON  OF I TR ACELLULAR   N GLUCOS E 

I OM   S ERAS EPR ODU CED  BY  STR EPI0^ Y_ ES AⅡ UG 4 4   1   C   . 6
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Qi  u n u n   n Ch a g a g
( p ‘ ‘ ae rm抖   日删  t唧   I .   I,o   曲 _ t Ⅲ目 帮 .W w = . 3 0 8  川 t h ̄406l

Bahr m . Gabr e a i il  
f 口‘   D印   删 ∞  螂 . . ^ Ⅳ 曲 曩   {  o   a Gaa i6 0   B… f Gal  l ̄. 2 0  J  

So e po sb ltc t  r l a e he l o e s g1 r s   e e s a ihe  f r h  s e t d m   s i iii s o e e s  t  g uc s  io  ̄e o c w r  e t bls d o  t e a c e   l

s r i  te t my e  I t an s r p o c s M UG 4 4 . wh n a c r b n d t e t n  t   y o y   n   i h p e — — 6 e   o n i e   r a me t wih l s z me a d h g   r s 
s e  a   e n a p i d t   he c ls 91 9 ur s h s b e   p le   o t   e l. .2   o  he t t le z m a i  c iiy w a   ou   n t   ft   o a  n y tc a tv t   s f nd i  he

e t a t n   h   il   o   n y   e o e i g wa   7 . A  h r a t e t e t( 0 . O n   x r c .a d t e y e d f r e z me r c v r n   s 8   t e m l r a m n 7 ℃ 1 mi )   a p id t   e l  s nso   n t   r s nc     g a     i n : a t rl i  ih l s z m e p l   o c lssu pe ins i   he p e e e ofM   nd Co e os fe  yss w t   y o y  
a d h g   r s u e . d t r i d a p r i lp ii a i n o   x r cs(h   pe ii  c i iy w a  3  n   ih p e s r s e e m ne     a ta  urfc t o   fe t a t t e s cfc a tv t   s .

2 5 rgp o en . 7 U/   r ti )  a
Ke   o d : t e t m y e . gl o e i o e a e e z m e e t a to   l s z m e yW r s sr p o cs uc s   s m r s . n y   x r c in yo y  

( 接第 4 上 4页 )   量和酶的使用量 。根 据 P R结 果 , C 只需 提 取  1 个菌 落 D 1 NA 分 子和 酶 切 分 析 , 即可 得 到  个 目的基 因 片段 与三 个 不 同 载 体 的 重 组  D NA 分 子 , 不 是 5 而 0个 菌 落 。   本 方法 尤 其 适 用 于 大 载 体 与 小 片 段 基 因  的 克 隆 。本 实 验 室 利 用 该 方 法 成 功 地 将 只 有  04 . Kb大 小 的 牛 自 细 胞 介 素 2基 因 连 人 了  p C l这样 的 相 对较 大 又 无 蓝 白筛 选 的 载  Sl 体上 。本方法 的确是一 种快 速 、 简便 、 靠 重  可


组 D NA 的 鉴 定 方 法 

参 考 文 献 
Lj   - a b o k E  F i h T   J S n r o - .F r c , .Ma it . M o c [r  J s n i as l ua   ̄
Cl n n o i g, ALa ou a o y M   h r t r  且【 I 8   - 90

L2 P  W ak r  A By J  J le ,K me,e  1 Vioo ta  r lgy, l 9 1 1:   2. 9   9
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J n H ong L iY uan D eng i         Guohua YuK angz   hen  
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To i e nt f   e oT b na     d r i r c 1 i nt DN A  ua l   a s m o e t a   w o o   hr e d s W he   he i   y l us l Y t kc   r   h n t   r t e   av . n t  n

s r  e tDN A  r g e t i q ie s a l rt n t   e t r 1 f a m n  s u t   m le  ha   he v c o . t m o edifc l  o i ntf   her C 1      r   fi u t t  de iy t  e oT l bn n  i a t DN A . i   hi  p r w e ha   d n iid e m b a t DN A  ih   o   n t s pa e     ve i e tfe  r c o n in   w t i f ur hou s n r bY PCR   
d r c l 丘 o t a s om a t . ie ty m  r n f n s 

Ke   o d : e e r c l i nt PCR  y W r s g n   e oi bna .


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