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关于组培


植物组织培养 定义:在无菌条件下利用人工培养基对植物组织、原生质体、悬浮细胞和植物器官的培养;

与农业的关系: ——是转基因技术不可或缺的组成部分,为转基因提供受体及转化细胞的筛选和再生; ——采用花药培养技术可缩短杂合体纯合化所需时间; ——利用花药培养制种可获得出均匀一致的单性群体; ——克服远缘杂交的受精前后障碍,通过体细胞融合可制造细胞杂合体; ——

通过茎尖培养消除病毒,建立无毒原种; ——通过离体诱导不定芽或促进腋芽生枝,对植株进行快速繁殖; ——通过人工种皮包被体细胞胚制造人工种子;

一个组织培养实验室的面积的大小和装备程度取决于两个因素:一是所要进行的实验的性 质;二是所能得到的经费的多少。然而,一个标准的组织培养实验室应当具备下列工作所必 须的设施:1)玻璃器皿、塑料器皿和其他实验室器皿的清洗和贮存;2)培养基的制备、灭 菌和贮存;3)植物材料的无菌操作;4)将培养物保持在温度、光照和湿度的可控条件下; 5)培养物的观察。 为此须配备多间房间,分别用于仪器清洗和贮存、培养基的制备、培养 室等等。

技术 仪器清洗:新器皿只有在彻底清洗之后才能应用,使用特制的洗涤剂浸泡做够的时间(12h 以上)再用自来水冲洗、蒸馏水漂洗;若要重新利用装有污染组织或培养基的玻璃器皿,极 其重要的一环是不开盖即把它们放入高压锅中灭菌;将洗净的器皿置于烘箱内在约 75℃下 干燥后,贮存于防尘橱。 灭菌:培养基的污染来源有培养容器、培养及本身、外植体、接种室的环境、在接种和继代 时用于操作植物材料的器械及培养室的环境; 其中所有的灭菌方法包括干热灭菌法、 湿热灭 菌法、过滤灭菌法、化学灭菌法和紫外灯辐射等。

组培的一般步骤 Ⅰ将植物组织块置于一个有螺丝盖的玻璃瓶中,注入含有几滴活化剂的浓度适当的消毒液, 使材料完全浸没在消毒液中,盖上盖,把玻璃瓶置入超净工作台上。在消毒期间须把玻璃瓶 摇动2~3次; Ⅱ消毒处理后, 将瓶盖打开,将消毒液倒出,注入适量的无菌蒸馏水,再盖上盖,摇动数次, 将水倒掉,如此重复3~4次; Ⅲ将材料取出,置于一个已经灭过菌的培养皿中; Ⅴ在对植物材料进行消毒处理的同时,对所要使用的器械进行消毒,方法是把它们蘸入9 5%酒精中,取出后再置于酒精灯火焰上灼烧,待冷却后即可使用,所有操作器械往往需要 在每次使用前消毒一次; Ⅵ使用这些消过毒的器械(如解剖刀、解剖针、打孔器、剪刀、体位显微镜等)由已经过表 面消毒的材料切取适当的外植体; Ⅶ将培养容器的盖打开,将外植体接种到培养基上,把瓶口置酒精灯火焰上烘烤数秒钟,然 后迅速用瓶盖封严。


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