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不同产地茯苓中萜类成分的HPLC指纹图谱研究


【 药学研究 】

菌核 , 其主要化学成分为多糖 、三萜 、脂肪酸 、甾醇 、酶等 。 有研究表明 , 其所含的大量三萜类物质具有免疫调节 、抗肿 瘤 、抗炎等作用
[1 ]

人工栽培以来 , 湖北 、安徽均建立了 GAP示范产地 , 成为茯苓 讨不同产地茯苓药材指纹图谱的异同点 , 提供茯苓的鉴别指 标。
1  材料与方法

的主产区 。本实验以英山 GAP产地的茯苓为主要研究对象 , 探

色谱工作站 , 超声提取器 。甲醇 、磷酸均为分析纯 , 乙腈为色 谱纯 , 水为重蒸水 。 茯苓药材为湖北 、安徽 、天津等市场商品 , 共 15 个样品 ,

见表 1。经鉴定均为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核 。
112   色谱分析条件

相 : 乙腈 2 15% 磷 酸 水 溶 液 进 行 梯 度 洗 脱 , 见 表 2; 流 速 : 0 μ 110m l/m in; 柱温 : 30 ℃; 检测波长 : 243nm; 进样量 : 20 l。
113   供试品溶液的制备
   基金项目 : 湖北省科学技术委员会攻关项目 , [ 2002AA304A04 ]    作者简介 : 许腊英 ( 1952 2) , 女 , 湖北中医学院药学院教授 。

111   仪器与试剂

   茯苓为多孔菌科植物茯苓 Poriacocs ( Schw1 ) W olf 的干燥 。传统认为茯苓以云南为道地产区 , 但发展 μ 色谱柱 : Scienhome C18 ( 250mm ×416mm , 5 m ) ; 流 动

2007 年 9 月第 9 卷第 3 期             湖北中医学院学报 sep tember12007, Vol19, No13 Journal of Hubei College of TCM

?41?

不同产地茯苓中萜类成分的 HPLC指纹图谱研究
许腊英 , 万   , 付文强 , 毛   , 胡   , 李   芳 翼 静 凯
(湖北中医学院药学院 , 湖北 武汉 430065)

   摘要 : 目的   比较不同产地茯苓中萜类成分的 HPLC指纹图谱 。方法   用高效液相色谱法分析 10 批英山 GAP 产

地的茯苓药材 , 建立共有模式 , 并和其它产地茯苓药材的指纹图谱进行比较 。结果   英山 GAP 产地茯苓药材的指纹 图谱稳定性好 , 不同产地茯苓药材的指纹图谱中典型色谱峰较一致 , 但峰面积存在差异 。结论   所建立的指纹图谱可 用于茯苓药材的质量控制 。 关键词 : 茯苓 ; 高效液相色谱 ; 指纹图谱

D I NEX高效液相色谱仪 , 170u可见紫外检测器 , PeakNet O

mutual mode of HPLC fingerp rint is set up after ten batches of poris from Yingshan County are analyzed by HPLC w ith the com 2 parison to that from different habitats Results: The HPLC fingerp rint of terpeniod on poria from Yingshan County show s stable . quality The characteristic peak in fingerp rint of different habitats is accordance, but the peak area is different Conclusions: . . The HPLC fingerp rint can be used for the quality evaluation of poria cocos . Ke y wo rd s: Poria cocos; HPLC; Fingerp rint

中图分类号 : R282171      文献标识码 : A      文章编号 : 1008 - 987X (2007) 02 - 0041 - 02

The S tudy o n F inge rp rin t A tla s o f D iffe re n t Ha b ita ta Po ria Co co s’ Te rp e no id by HPLC
XU Naying, et al ( The School of Pharmacology, Hubei Collge of TCM , W uhan, Hubei, 430065 )

Ab s tra c t: O b je c tive: To compare the fingerp rint atlas of different habitat poria cocos’ terpenoid by HPLC1M ethods: The

密称定 , 置具塞锥形瓶中 , 精密加入甲醇 30m l, 称定重量 , 超 声提取 30m in, 再次称重 , 用甲醇补足减失的重量 , 过滤 , 取 μ 续滤液用 0145 m 微孔滤膜滤过 , 即得 。
表 1  茯苓药材来源 样品编号
1 - 10 11 12 13 14 15

2  结果

211   稳定性试验

将茯苓药材均匀粉碎 , 过 80 目筛 , 取茯苓粉末 110g, 精
产地或收集地 湖北英山 GAP产地 湖北罗田 湖北罗田 安徽岳西 天津 (产地不详 ) 北京 (产地不详 ) 表 2  梯度洗脱条件 乙腈 ( % )
50 60 70 95

时间 (m in)
0 10 35 60

015%磷酸溶液 ( % ) 50 40 40 5

?42?

湖北中医学院学报                2007 年第 9 卷第 3 期 个 , 分 别 出 现 在 7123、 8151、 9172、 10129、 11105、 13146、 14108、 在 90%以上。 其中 , 保留时间为 4216min的色谱峰分离较好 , 保留时 的相对保留时间及相对峰面积 , 其中相对保留时间的 RSD 值均 小于 014% , 但有些特征峰相对峰面积的 RSD 值较大 。 良好 。
3  讨论 21413   指纹图谱相似度评价 : 采用中位数方法计算指纹图谱 01974、 01981、 01971、 01989、 01992、 01971、 01946。结果表 01940, 说明英山 GAP产地不同批号间茯苓药材的成分一致性 311   样品提取溶剂 、时间和方法的选择 312   流动相的选择
53 2 1 55

取同一供试品溶液 , 分别在 0、 2、 4、 6、 8、 12、 24h 进行检 测 , 记录各共有色谱峰保留时间和峰面积 , 通过分析 , 24h内共有 峰的相对保留时间的 RSD 值均小于 015% , 相对峰面积的 RSD 值 均小于 310% , 表明常温下供试品溶液在 24h内保持稳定。 值均小于 310% , 说明本方法具有较好的重现性 。 记录 60m in的色谱图 , 即得 (见图 1、图 2 ) 。
214   茯苓萜类高效液相色谱指纹图谱的分析 212   精密度试验 213   重现性试验

取同一供试品溶液 , 连续进样 6 次 , 各色谱峰的相对保留时

间及相对峰面积的 RSD 值均小于 210% , 表明仪器精密度良好。

取同一批号的供试品 5 份 , 分别按供试品溶液制备方法制

备 , 进行检测 , 各色谱峰的相对保留时间及相对峰面积的 RSD

图 , 供试品溶液在上述色谱条件下 60m in 后无特征峰出现 , 故

及相对峰面积   根据 15批供试品的高效液相图谱所给出的相关参数 ,
15批样品指纹特征相互间较为吻合 , 其中共有的典型色谱峰共 20

21411  指 纹 图 谱 的 制 备  分 别 精 密 吸 取 15 批 供 试 品 溶 液

μ 20 l, 注入高效液相色谱仪 , 考察 120m in内供试品溶液的色谱

间的 RS = 0115% , 相对峰面积的 RS 小于其它面积 , 比较稳定 , D D 共有模式 (见图 3 ) , 并进行相似度评价 , 1 - 10 号样品的指纹 明不同批号的英山 GAP产地茯苓药材指纹图谱的相似度均大于 法以及提取时间 , 结果表明以甲醇为溶剂超声提取效果较好 , 且提取时间为 30m in和 60m in 得到的色谱图无明显变化 , 故选 择甲醇超声提取 30m in。 作流动相进行比较 , 由于茯苓的甲醇提取物成分较多 , 在等梯度 条件下难分离且出峰时间较长 , 故选择梯度洗脱。选择乙腈 015%磷酸作为流动相时基线漂移较小 , 峰形有显著改善 , 而且在 313   不同产地批纹图谱比较

21412  指纹图谱特征峰的标定及 15批样品的特征峰的相对保留时间

且相对峰面积较大 , 故选择保留时间为 4216min的色谱峰为参照峰。 该色谱条件下所得色谱图中各特征峰分离度较好 , 特征峰较多 , 故选择乙腈 - 015%磷酸作为流动相进行梯度洗脱。 山 GAP产地茯苓的质量稳定性良好 。 参考文献 : 的指纹图谱进行比较 , 图谱中色谱峰数量及位置均大致相同 , 罗田产地与英山 GAP产地茯苓指纹图谱的特征峰峰面积之间有 差异但不明显 , 安徽及其它产地茯苓的指纹图谱中保留时间为 异显著 , 其峰面积明显高于 GAP产地茯苓 。结果表明不同产地 的茯苓中萜类成分非常相似 , 某些成分差异显著 , 通过这些特 征可对茯苓药材进行鉴别 , 10 批比英山 GAP 基地茯苓的采收 贮存时间差异较大 , 但所得指纹图谱一致性仍然很好 , 说明英
22161、 25159、 52183m in的色谱峰与英山 GAP产地茯苓相比差
[2]   王少军 , 段启 , 曹君 , 等 1茯苓皮中三萜酸类成分 HPLC 指纹图 [3 ]   杨冉 , 李建军 , 屈凌波 , 等 1 茯苓萜类的高效液相色谱指纹图 [1 ]   张思访 , 刘静涵 , 蒋建勤 , 等 1茯苓的化学成分和药理作用及开发

图谱与其共 有模 式的相 似度 值分别 为 01962、 01990、 01959、 笔者考察了甲醇 、乙醚两种溶剂和超声提取法 , 加热回流 根据文献 [2 - 3 ]选择了甲醇 - 水、乙腈 - 水、乙腈 - 015%磷酸 对 GAP产地茯苓指纹图谱的共有模式和 5 批其它产地茯苓
利用 [ J ] 1中华实用中西医杂志 , 2005, 18 (2) : 2272 1 230 谱研究 [ J ] 1中草药 , 2004, 35 ( 3) : 273 2 1 275 谱的方法学研究 [ J ] 1 中药新药与临床药理 , 2005, 16 ( 1 ) :
(收稿日期 : 200 ⑹ - 12 - 05   编辑 : 郑晓屏 )

16168、 18128、 18180、 20146、 22161、 23124、 25159、 26179、 29118、 40124、42160、51112、52183min。 共有峰面积占总峰面积的百分比均

以保留时间为 42160m in 的色谱峰为参照来计算各特征峰


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