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桉树组织培养中的玻璃化现象及其克服措施


安徽农业科学.Journal of Anhui A西.Set.2009.37[27):12930.12988

责任编辑夏静责任校对傅真治

桉树组织培养中的“玻璃化"现象及其克服措施
马济民
(成都农业科技职业学院,四川成都611130)

摘要[目的]分析桉树组织培养中的“玻璃化”现象发生的原因,

探索克服或减少“玻璃化”现象的措施。[方法]以巨按品种广林9为 试材,基本培养基为:琼脂3.o%。,糖30%o、NH;5.0ml、Ca“10ml、水为自来水,针对组织培养中出现“玻璃化”现象设11个配方处理,研 究改变培养基中琼脂、蔗糖、NH?和ca“含量以及水质情况对克服按树组织培养中的“玻璃化”的影响。[结果]研究提出一些克服或 减少桉树组织培养中玻璃化现象的措施:配制培养基时固化剂的合适用量一般在3.5‰;培养基中蔗糖含量可适当增加10%t左右,以降 低培养基的渗透势,阻遏培养材料过量吸收水分;培养基中Ca含量可增加1.5 ml、NH;含量可降低2.0 mol/L;煮制培养基时最好用自
来水。[结论]该研究为克服桉树组织培养中“玻璃化”现象提供科学依据。 关键词桉树;组织培养;玻璃化;措施 中图分类号S792.39 文献标识码A 文章编号0517—66ll(2009)27—12930一Ol n地nomenon ha the Tissue Culture of Euealyptas and Its Overcoming Measures MA Ji-min(Chengdu Vocational College of Agricultural Science and Technology,Chengdu,Sichuan 61 1 1 30) Abstract [Objective]The research aimed to analyze the generated cause of vitrification phenomenon in tissue culture of eucalyptus,and ex- with Guanglin 9 of euealyptus grandis variety as tested plore the mea.sures that would overcome or lcssen vitrification phenomenon.【Method
Vitrmcation material,the basic medium
set

was:agar

3.0‰,sugar 30‰,NHf
tissue
on

5.0 ml,Ca“10 nd,and
to

water

Was

tap

water,1l formula

treatments

were

up

aiming

at

the vitrification phenomenon occurred in quality
state in

Ca“and the
or

water

medium

chan舀ng the contents of agar,sucrose,NH;and conquering the vitrification in eucalyptus tissue culture.I Resdt Some measures of overcoming

culture

study the effect of

decreasing vitrification phenomenon in tissue culture of eucMyptus were proposed in the research as f0Uows:generaHy,the suitable dosage of hardener WaS 3.5%o when preparing medium:the sucrose content in medium could be increased about lO‰properly to reduce the osmotic potential of medium and ml,while
prevent

NH;content could be decreased by 2.0 mol/L;its better
Eucalyptus:Ti¥8UC

culture material from absorbing moisture excessively:tlle Ca content in medium could be increased by 1.5 to Use running water when cooking medium.[Conclusion]The study sup—
in tissue

plted scientific basis for overcoming vitrification phenomenon Key words

culture of eucalyptus.

culture:Vitrification:Countermeasures

桉树属于桃金娘科桉属,是世界上最重要的造林树种。 它具有速生、丰产、优质的特点,是目前工业纸浆生产的重要 原料,也是世界上造林推广最快和利用价值最高的树种之 一。桉树离体培养的研究始于70年代末,在巴西、澳大利 亚、南非、中国、新西兰、日本、泰国,印度以及欧洲不少国家 都成功的利用离体培养技术对桉树进行了大规模工厂化育 苗,桉树快繁育苗时间短、产量大,对优良品种的推广造林有 着及其重要的作用川。但是在快繁中出现各种各样的难题, 组培瓶苗分化过程中的“玻璃化”现象(玻璃化苗与正常苗 有显著差异,当植物材料不断地进行离体繁殖时,有些培养 物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水迹状,这种现象通常称为 玻璃化)就是其中之一。组培苗的“玻璃化”大大降低了生产 的数量和质量,同时也带了诸多不便,为解决这一难点,笔者 设计了该试验方案并就克服“玻璃化”现象的措施进行了探 讨。以期为桉树组织培苗生产提供参考建议。 l材料与方法 1.1试验材料巨桉(广林9)由宁南市林科所提供。 1.2试验设计针对巨桉(广林9)的玻璃化现象设有A、 B、C、D、E、F、G、H、CK。、CK2共10个处理,CK为对照。采用 对比法设计,每个处理3个重复(即继代3瓶),每瓶25株 苗。试验和培养基配方见表1。 将上述接种材料放置于温度为25~28℃、光照为前7—
10 1kt
A B c D E F G

襄l桉树组培苗培养基配方
Fig.1 试验编号
No.

The incdhlnl formula of

eucalypt tissue culture seedlings

培养基配方
Medium formLIla

0.30%琼脂+5.0lml/L NH;+3.00%槠+10ml/L Ca“+自来水 0.35%琼脂+5.0 3.00%糖+5.0 4.00%糖+5.0
5.0 moI/L 3.0mol/L 10Ⅱd/L mol/L

NH;+3.00%糖+10

ml/L

Ca“+自来水

mol/L moL/L

NH[+O.30%琼脂+10mL/L Ca2++自来水

NH?+O.30%琼脂+10彬L
ml/L

Ca“+自来水 Ca2++自来水

NH4"+3.00%糖+0.30%琼脂+10

NH;+3.00%糖十0.30%琼脂+10ml/LCa“+自来水

ca“+3.00%糖+5.0 1110I/L NH;4-0.30%琼脂+自来水 Ca“+3.00%糖+5.0mol/L HH?+O.30%琼脂+自来水
mo]/L

11.5 ml/L

0.30%琼脂+3.00%糖+5.0

NH;+10

I彬L ca“+蒸馏水
ml/L

H弧强

0.30%琼脂+3.00%糖+5.0mol/I。NH4"+10

Ca“+自来水

2结果与分析 2.1琼脂含量对巨桉“玻璃化”苗的影响由表2可知,在 其他元素保持不变的情况下,培养基中琼脂含量由0.3%增 加到0.35%,玻璃化苗平均数降低,与cK相比,玻璃化率 较低。 2.2糖含量对巨桉“玻璃化”苗的影响 由表2可知,在其

他元素保持不变的情况下,培养基中糖含量由3%增加到 4%时,玻璃化苗平均数降低,玻璃化率降低。
2.3

mt.浓度对巨桉“玻璃化”苗的影响由表2可知,在

其它元素保持不变的情况下,培养基中NH4+的浓度由5 moL/L降低到3 mol/L时,玻璃化苗平均数降低,与Cl(2相 比,玻璃化率较低。
2.4 000~1 500 1)【、湿

d为500~800 lx,待长出小芽时在转入l

度为70%左右下培养30 d后,再取出观察其“玻璃化”现象 发生情况和统计数据。
作者简介马济民(1977一),男,河南南IrmA.,讲师,从事园艺植物栽培 教学、科研和农业技术推广。 收稿日期2009-05-25

Caz+的用量对巨桉“玻璃化”苗的影响由表2可知,

在其他元素保持不变的情况下,培养基中Ca2+的用量由10 ml/L增加到11.5 ml/L时,玻璃化苗平均数降低,与对照 Cl(2相比,玻璃化率低。 (下转第12988页)

万方数据

安徽农业科学

2009年

有待挖掘。 2.6籽粒灌浆速率从表5可以看出,P88S/747有2个灌 浆速率高峰,其强势率高峰期为齐穗后10 d左右,约8月27 Et开始;弱势率高峰期在齐穗后38 d(约在9月26日)开始。 2个高峰相距大,为29 d。这表明该品种的灌浆类型属异步 灌浆型,灌浆后期的气候条件变化对结实率和粒重均有很大 影响。
表5齐穗后灌浆速率(30穗)
Table.5
The

3结论与讨论 (1)品种P88S/747属于大穗大粒型品种,该试验根据其 特征,采用小苗栽插,强化栽培管理,使品种特性得到充分发 挥。每穗实粒数高达205粒,千粒重29.3 g。但该试验因烤

田遇阴雨致使有效穗过低,最高苗达578.3万彬hmz,成穗
率仅为39.4%。因此,降低高峰值,提高成穗率成为沿江稻 区超高产栽培技术的难点。


(2)P88s/747最高叶面积指数出现在抽穗期,为1lO.1 m2/hm2,蜡熟期的叶面积指数为63.9,粒叶比从抽穗期的
增速//%
Increase

grain-filling speed

after

full heading

时间 (月一13)
8—22 8—27
9一i

鲜重-//s/30穗
Fresh

干莺

干鲜比//%

3.27 m#cm2大幅度上升至蜡熟期的27.52 mg/cm2,表明其

#30穗Dry weight/

!i婴!!塑吐!!立!生曲!
128.189 188.332 214.394 253.004 256.496 49.250 78.66l 115.043 143.539 154.399 173.705 191.032 198.410
215.862

!塑!!生吐!
38.42 41.77 53.66 56.73
60.20 62.84

干物质积累能维持较高水平,具有较强的生理功能。删7:钉
高效叶面积和有效叶面积比例较高,物质输出率为32.30%。 物质运转率为30.73%,具有较高水平。 穗后10 d左右,弱势率高峰在齐穗后38 d,2个高峰相距时

!鳇鲤


3.35 11.89 3.07 3.47 2.64 4.03 1.99 6.06
4.27

(3)P88S/747有2个灌浆速率高峰,其强势率高峰为齐

9-6 9—11 9—16 9—21 9—26 10—1 10—6

276,406
285.677 288.140

间较长,对于迟熟品种的水肥管理有较大参考价值。P885/ 747耐肥抗倒。其主茎粗约为0.8 cm,主茎伸长节间为6节, 从下往上分别为1.6、6.1、8.8、13.5、21.7、42.9。其特性主要 决定于品种遗传基因。 参考文献 [j]董习华.张士陆,张荣。等超级杂交稻组合的产量性状和jl莱叶形态分 析[J].安徽铀lp科学,2007,35(36):11789一11791.

66.87 68.86 74.92
79.】9

288.905 289.175

228.998

2.7其他特征主茎粗约为0.8 cm,主茎伸长节间从下往 上l~6节的长度分别为1.6,6.1、8.8、13.5、21.7、42.9
cm。

[2]王学会.超级杂交稻强化栽培体系研究[J].安徽农业科学,2啷,31
(5):810—811.

P88S/747在其整个生育期的几次大风中(9月),表现出极强 的抗倒能力。

[3]胡锋,曹新围,唐,J吗,等.超高产两系杂交中籼两优6326强化栽培技
术研究[J].安徽糖【k科学,2008,36(19):8030一81131.

-—卜一?卜—+——●一—卜—??卜-—●—?—卜——●—?+-+——?..-?—.--+-+—+—+?—卜-+-+?+-—卜---卜--?卜-—卜-—●?——●——■—-+——卜—+-+一+—+-+-?+———■呻-?卜斗--+_
(上接第12930页) 2.5水质对巨桉“玻璃化”苗的影响 由表2可知,在其他 使材料在培养基中不稳定,甚至下沉;太硬不利于养分的扩 散和吸收,使植物生长发育迟缓,甚至会使培养材料干燥 枯死一o


元素保持不变的情况下,水质由自来水变为蒸馏水时,玻璃 化苗平均数增高,CK。与CK相比,玻璃化率不降反升。
表2不同处理对巨桉“玻璃化”现象的影响 T曲Ie 2
Effect of

3.2适当增加培养基中蔗糖的含量适当增加培养基中蔗 糖的含量町有效克服桉树组织培养中玻璃化的现象。增加 l%左右,可有效降低培养基的渗透势,阻遏培养材料过量吸 收水分,造成水分胁迫。 3.3增加培养基中Ca等元素的含量、降低氨态氮的含量

different treatments
of eucalyptas

OH

phenomenon 0f vitrification

in tissue cultllre

Total number of
Treatment

Total number 0f

Vfl∞ification

匹坚!趔墨壁鲤!i型星
A B

巫!碰i星墼i塑趔i堕墅望堡
16

增加培养基中ca等元素的含量、适当降低氨态氮的含量可 有效克服桉树组织培养中玻璃化的现象。钙增加1.5 ml。氨 态氮浓度降低2.0
mol/L。

59 65 49 54 62 66 6l 65 45
55

21.333 13.333 34.666 28.000 17.333 12.000 18.666 13.333 40.000 26.666

lO .26 2l 13 9 14 lO 30 20




3.4煮制培养基时最好用自来水在水质方面,自来水比 蒸馏水更能克服桉树组织培养中玻璃化的现象。但在自来 水水质比较差的地方应在煮制培养基前1—2 d将水盛在容 器中,让其沉淀一下。 参考文献 [1]程广有.名优花卉组织培养技术[M].北京:科学技术文献出版社
2001.

E F G H
CKI CK2

3小结与讨论 试验表明,改变培养基配方可有效克服桉树组织培养中 “玻璃化”的现象。具体措施如下: 3.1合适的固化剂用量配制培养基时,选用合适的固化 剂用量,一般在0.35%。这样的培养基硬度适中,太软就会

[2]曹正孜,刘国E己实用植物组织培养技术教程[M].兰州:甘肃科学出版 社,1997. [3]罗士韦,许智宏.经济植物组织培养[M].北京:科学出版社,1998. [4]陈正华.木本植物组织培养及其应用[M].北京:高等教育出版社,
1986.

[5]王,J、箐,李玲.植物生长调节剂在植物组织培养中的应用[M].北京:化 学工业出版社.2001.

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