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中国狂犬病病毒遗传多样性分析


中国生物制品学杂志 2010 年 5 月第 23 卷第 5 期 Chin J Biologicals May 2010, 23 No. 5 Vol. 中国图书分类号 R373. 9 Q789 文献标识码 A 文章编号 1004-5503 (2010 05-0449-06 )

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【基础研究】

中国狂犬病

病毒遗传多样性分析
孟胜利 1 徐葛林 1 程满荣 1 舒祥 1 雷勇良 2 朱风才 3 周敦金 4 王定明 5 明贺田 6 吴杰 1 严家新 1 杨晓明 1
【 摘要 】 目的 分析中国狂犬病病毒 (RV 的遗传多样性, ) 为我国狂犬病的预防提供理论依据。方法 采用 RT-PCR 技术 扩增 26 株 RV N 基因, 并进行测序, GenBank 登录的序列进行比对, 与 构建进化树, 分析 RV 的基因分型和分组情况以及时间和 空间的动态进化。结果 中国 RV 分为 2 个大的进化分支 组 , (8 ) 分支Ⅰ包括 1 ~ 4 组, 分支Ⅱ包括 5~8 组, 组内核苷酸同源性 ≥ 93. 2%, 氨基酸同源性 ≥ 94. 3%; 组间核苷酸差异性 ≥ 8. 0%, 氨基酸差异性 ≥ 1. 7%; 运用贝叶斯中的马尔科夫链的蒙特卡 洛方法, 估计中国 RV N 基因核苷酸的平均碱基替代率为 1. 408 9 × 10-4 取代 / 位点 年, · 共同祖先出现在公元 968 年。结论 中 国狂犬病病毒株均属于基因 1 型狂犬病病毒, 存在跨地域、 跨宿主传播; 我国分支Ⅰ狂犬病病毒株与泰国、 越南、 菲律宾、 印度尼 马来西亚等东南亚国家分离的狂犬病病毒株起源相同; 分支Ⅱ的毒株在全球分布。 西亚、 【关键词】 狂犬病病毒; 遗传多样性; 分子流行病; 基因 N

Analysis of Genetic Diversity of Rabies Virus Isolates in China
MENG Sheng-li△, XU Ge-lin, CHENG Man-rong, et al (△Wuhan Institute of Biological Products, Wuhan 430060, China )
【Abstract】 Objective To analyze the genetic diversity of rabies virus (RV )isolates in China and provide a theoretical basis The N genes of 26 RV isolates were amplified by RT-PCR and sequenced, and the results were The available Chinese isolates of RV could be divided into two for prevention of rabies. Methods

compared with those reported in GenBank, based on which a phylogenetic tree was plotted, and the genotype, genome as well as dy- namic evolution in various times and spaces were analyzed. Results distinct clades, i.e. phylogroup clade Ⅰcomprising Chinese 1 ~ 4 groups and phylogroup clade Ⅱ comprising Chinese 5~8 groups. The intra-group homologies of nucleotides and amino acids were not less than 93. 2% and not less than 94. 3%, while the inter-group )analysis divergences were not less than 8. 0% and not less than 1. 7%, respectively. Bayesian Markov chain Monte Carlo (MCMC suggested that Chinese RV arose in 968 AD, and its annual mean nucleotide substitution rate for N gene was 1. 4089 × 10 -4 per site. Conclusion All the Chinese RV isolates are Lyssavirus genotype 1, which migrate among various regions and reservoir hosts. The isolates of phylogroup clade Ⅰ are in the same phylogenetic clades with those isolated in the countries in Southeast Asia, such as Thailand, Vietnam, Indonesia, Philippines and Malaysia, while those of phylogroup clade Ⅱ are found in many parts of the world. 【Key words】 Rabies virus; Genetic diversity; Molecular epidemiology; N gene

狂犬病病毒 (Rabies virus, ) RV 为单股不分节段 的负链 RNA 病毒, 病毒基因组约 12 000 bp, 编码 5 种结构蛋白: 核蛋白 ) 磷蛋白 ) 基质蛋白 ) (N 、 (P 、 (M 、 糖蛋白 ) (G 和多聚酶蛋白 ) 其中, 蛋白是最保 (L , N
2] 守的结构蛋白[1, 。由于 RV N 基因的保守性, 除了 用于常规检测的靶点之外, 还可用于基因分型, 分析

讨我国RV 的分组情况、 病毒起源时间以及预测其进 化的时空动态, 旨在为我国狂犬病的预防提供理论 依据。 1. 材料与方法 1. 1 毒株 本研究分析的参考毒株见表 1。 1. 2 引物设计及合成 N 基因全长 1 353 bp (71 ~ 1483 , ) 基于 PV 株基 因序列 , 在 线 引 物 设 计 软 件 GeneFisher http: // 由 ( bibiserv.techfak.uni-bielefeld.de / bibi / Tools_Primer_ Design.html 设计扩增 RV N 基因引物, ) 见表 2, 由上 海捷瑞公司合成。 1. 3 病毒 RNA 的提取及 RT-PCR 用 Trizol 试剂从脑组织中提取病毒总 RNA, 用

RV 的地域特征、 病毒起源、 宿主转换等时空进化[3~6] 。 本研究对 68 株中国 RV N 基因序列进行分析, 以探
基金项目: 国家 863 基金资助 (2007AA022402 . ) 作者单位: 武 汉 生 物 制 品 研 究 所 狂 犬 病 检 测 中 心(武 汉 1 430060 ; 浙江丽水市疾病预防控制中心 )2 (浙江丽水 323000) 3 江苏省疾病控制中心 ; (南京 210009) 4 武 ; 汉市疾病控制中心 (武汉 430022 ; 贵州省疾病预防 )5 控制中心传染病防治所 (贵阳 550004 ; 阜阳市疾病 )6 控制中心 (安徽阜阳 236006 . ) 通讯作者: 徐葛林, E-mail: xugelin@yahoo.com.cn

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随机引物 N6 进行 RT。 RT-PCR 方法参考文献 [7] 进行。PCR 产物经 1%琼脂糖凝胶电泳, GoldView 染 色鉴定。
表 1 中国狂犬病病毒株 Tab 1. Rabies virus isolates in China
毒株 FY16 JSL26 YUE1 N11 QC J Nu GX4 gk5 CQ92 H SH06 ZJD4 JSS62 LU Yue2 NC WH5 LH GX2 H69 gg4 HeF ZJCA1 ZJD3 ZJD11 GX304 GXN119 GX260 Hunan Wg12 Guizhou_A148 Hunan_Xx34 Henan_Hb10 Henan_Sq17 Jiangsu_Wx0 ) (H BD06 FJ002 FJ006 DRV NM925 HuNDN16 Yunnan_Md06 Yunnan_Zt07 CHVC06 HNDB33 HNDB18 分离地 安徽 江苏 广西 广西 湖北 宁夏 宁夏 广西 贵州 重庆 安徽 上海 浙江 江苏 河南 广西 江西 湖北 浙江 广西 安徽 贵州 安徽 浙江 浙江 浙江 广西 广西 广西 湖南 贵州 湖南 河南 河南 江苏 河北 福建 福建 吉林 内蒙古 湖南 云南 云南 云南 湖南 湖南 来源 犬 犬 犬 犬 人 人 人 犬 犬 犬 犬 犬 犬 犬 鹿 犬 犬 犬 犬 犬 犬 犬 犬 犬 犬 犬 牛 狗 牛 狗 狗 狗 狗 狗 人 狗 狗 狗 鹿 浣熊 狗 狗 狗 狗 狗 狗 分离年代 2005 2005 1997 1997 2006 1985 1986 1994 2006 1992 1989 2006 2008 2005 1993 1997 2004 2005 2006 1994 1969 2006 1989 2008 2008 2008 2004 2004 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2004 2006 2008 2008 1989 2007 2005 2006 2007 2006 2005 2005 GenBank 序列号 EU159376 EU159381 EU159385 FJ594278 EU159377 EU159387 EU159398 EU159386 / EU159388 EU159396 EU159394 / EU159384 EU159378 EU159399 EU159389 EU159380 EU159397 / EU159391 EU159395 / / / / DQ866117 DQ866111 DQ866114 DQ666308 DQ666291 DQ666318 DQ666297 DQ666301 DQ666320 EU549783 FJ561727 FJ561731 DQ875051 FJ415313 DQ515993 EU095330 EU275244 EU282381 EU008923 EU008921

续表 1 中国狂犬病病毒株 Tab 1. Rabies virus isolates in China
毒株 3AG GX219 GX195 Jiangsu Wx1 Guangxi_Yl66 Guizhou_Qx5 Guizhou_A101 Hunan_Wg22 Guizhou_A158 Jiangsu_Yc63 FJ001 FJ005 hubei070308 MRV HuNPN01 MN1025B Yunnan_Qj07 Yunnan_Tc06 (H Hebei0 ) HNDB28 HNDB11 CTN 分离地 北京 广西 广西 江苏 广西 贵州 贵州 湖南 贵州 江苏 福建 福建 湖北 河南 湖南 吉林 云南 云南 河北 湖南 湖南 山东 来源 狗 狗 狗 狗 狗 狗 狗 狗 狗 狗 狗 狗 牛 鼠 猪 浣熊 狗 狗 人 狗 狗 人 分离年代 1931 2003 2004 2001 2003 2004 2005 2004 2004 2004 2008 2008 2007 1989 2005 2007 2007 2006 2007 2005 2005 1956 GenBank 序列号 AF155039 DQ866113 DQ866112 DQ666321 DQ666287 DQ666296 DQ666289 DQ666310 DQ666292 DQ666322 FJ561726 FJ561730 EF611081 DQ875050 DQ496219 EU652445 EU275245 EU275243 EU267777 EU008922 EU008919 DQ787142

注: 黑体表示本研究所测序的毒株;/ : 序列暂未登录 GenBank

1. 4 基因测序及序列拼接 PCR 产物送上海捷瑞和南京金思特公司进行直 接测序。 1. 5 核苷酸替换模型的选择及系统进化树的构建 多序列比对用 ClustalX Version 2. 0 软件包[8]。 采用 jModelTest 0.1.1 中的分级似然比检验 (Hierar- chical likelihoodratio tests, hLRT) 选择适合目前序 , [9] 列数据的最佳碱基替换模型 。在确定核苷酸替换 模型后, 利用 TOPALi Software 构建 ML 进化树[10]。 使用 MEGA4 软件基于距离的邻近法 (Neighbor joining, ) NJ 构建系统进化树和基于独立特征的最大 简约法 (Maximum parsimony, ) MP 建立系统进化树, MP 进化树各分支单位 置 信 度 通 过 自 展 值 (Boot- strap 法检验, 1 000 个循环 ) 共 (Replicates , ) 自展值 > 70 认为构建的进化树较为可靠。 1. 6 N 基因选择压力分析 基于获得的 N 基因编码序列, 利用 HyPhy 软件 包, maximum likelihood SLAC (Single likelihood an - cestor counting; http: // www.datamonkey.org / ) 方法在 线计算 ω 值 (ω = dN / dS , ) 其中 dN、 分别表示非 dS 同义置换率和同义置换率, 相应位点可以分为 3 类, 即负选择位点 (ω < 1 、 ) 中性位点 (ω = 1 和正选择 ) 位点 (ω > 1 。 )

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表 2 试验所用引物 Tab 2. Primers used in this study
引物 RV1-F RHN-2 N128 N81
注: 基于 PV 株 ※:

意义 + + -

引物位置 3 ′UTR N N N

序列 ′- 3 ′ (5 ) GTACCTAGACGCTTAACAAC TCTGCTCTATCCTATCCGCAATG ATGTAACACCCCTACAATGG CAGTCTCCTCAGCCATCTC

碱基位置※ 1 ~ 11 584 ~ 562 55 ~ 74 1567 ~ 1586

用途 PCR / 测序 PCR / 测序 PCR / 测序 PCR / 测序

1. 7 分子钟检验及起源时间的估计 中国 RV N 基因进化速率以及共同祖先 (Most recent common ancestor, MRCA 利用 BEAST program ) (http: // evolve. zoo.ox.ac.uk / Beast / ) 进行马尔科夫 链的蒙特卡洛方法 (Markov chain Monte Carlo pro- cess 执行贝叶斯法分析。采用不相关松散对数正态 ) 分子钟 (Uncorrelated relaxed lognormal clock)模 型 , 总共运行 1 × 107 代,每 1 000 代进行抽样。用 Tracer v1.3 (http: // evolve.zoo.ox.ac.uk, ) 2003 分析 BEAST 抽 样产生的数据, burn-in 值为 1 × 106。 2. 结果 2. 1 最佳核苷酸替换模型及参数 分析结果表明, 最适于该数据集的碱基替换模 型为 GTR + I + G。对所有中国毒株 N 基因 1 353 bp进 行分析, 保守位点有 812 个, 变化位点有 541 个, 标 志性重要位点有 127 个。 2. 2 系统进化树的构建分析 利用 66 株中国街毒株与中国使用的人用疫苗 株 CTN、 3AG、 HEP-Flury 和 PV 株, 标准攻击毒株 CVS 及兽用疫苗株 SAD 和 ERA 株的 N 基因序列, 用 TOPALi Software 构建 ML 进化树, MEGA4 软 用 件构建 NJ 和 MP 进化树, MP 和 NJ 进化树的拓 ML、 扑结构相似, 这里只显示 NJ 进化树 (图 1 。结果显 ) 示, 目前中国分离的 RV 可以分为 8 个组 (中国 1 ~ 8 , 个大的进化分支, )2 分支Ⅰ包括 1 ~ 4 组, 分支Ⅱ 包括 5 ~ 8 组, 组内核苷酸同源性≥ 93. 2%, 氨基酸 同源性 ≥ 94. 3%; 个组组间核苷酸和氨基酸差异 8 性见表 3, 结果可见, 组间核苷酸差异≥ 8. 0%, 氨基 酸差异≥1. 7%。 各组在中国的地理位置分布表明, 中国 1 组所 包含的毒株最多, 分布的地域最广, 是我国优势流行 毒株, 它们流行于江苏、 河北、 浙江、 上海、 云南、 广 西、 贵州、 湖南、 江西、 安徽和湖北共 11 个省、 自治区 或直辖市, 又可以根据其地域性分为几个亚组 (未显 示 ; ) 中国 1 组组内核苷酸同源性在 95. 5% ~ 99. 9% 之间, 氨基酸同源性在 96. 4% ~ 100%之间。中国 2

组只有 2 株病毒 和 CQ92 , (J ) 尽管两地相隔很远, 分离时间相隔 7 年, 但两者核苷酸和氨基酸同源性 均高达 99. 3%。中国 3 组共有 3 株病毒 (N11、 GXN119 和 Yunnan_Tc06 , ) 核苷酸同源性在 94. 6% ~ 95. 5% 之间, 氨基酸同源性在 98. 7% ~ 99. 3%之间。 中国 4 组与我国的 CTN 疫苗株在同一组, 其组内核苷酸同 源性在 94. 0% ~ 100%之间, 氨基酸同源性在 98. 0% ~ 100%之间。 中国 5 组组内核苷酸和氨基酸同源性均 高达 100%。中国 6 组组内核苷酸同源性在 96. 6% ~ 99. 1%之间, 氨基酸同源性在 98. 0% ~ 98. 9%之 间 。 中 国 7 组 包 括 人 用 疫 苗 株 3AG 株 、 DRV 及 FJ005 / FJ006 等, 组内核苷酸同源性在 93. 2% ~ 99. 0% 之间, 氨基酸同源性在 94. 3% ~ 98. 7%之间。中国 8 组与中国兽用疫苗株在同一组, 目前在贵州、 河南、 湖南和江苏分离到这一组的毒株, 组内核苷酸同源 性在 99. 3% ~ 99. 4%之间, 氨基酸同源性在 98. 9% ~ 99. 1%之间。 为更进 一 步 分 析 我 国 RV 株 与 其 他 国 家 RV 株, 特别是与中国地理关系密切国家的毒株之间的 亲缘关系, 选取中国 8 个组中的部分代表株与其他 国家分离到的基因Ⅰ型 RV 株以及其他基因型毒株 N 基因, 构建 NJ 进化树 (未显示 。结果表明, ) 基因Ⅰ 型 RV 分为两个大组: 蝙蝠组和非蝙蝠组, 而非蝙蝠 组又可根据分离的地域不同分为: 亚洲组、 全球组、 北极和类北极组、 印度次大陆组等。中国 1、 3、 组 2、 4 均属于亚洲组, 其与分离于东南亚国家 (菲律宾、 泰 国、 越南、 马来西亚、 柬埔寨、 老挝、 印度尼西亚和缅 甸 的毒株同属于一组; ) 中国 5 组是分离于内蒙和吉 林野生动物浣熊的毒株, 从进化树上可见, 它们与分 离于韩国、 俄罗斯、 伊朗、 印度、 尼泊尔、 巴基斯坦的 毒株同属于北极和类北极组; 中国 6、 8 组属于全 7、 球组, 这个组的毒株目前在全球均有分布。 2. 3 N 蛋白序列比较分析 通过分析发现, 中国 RV N 蛋白序列中共有 21 个组特异性位点, 其中 13 个是组专一性位点。中国 1 组有 1 个组专一性位点氨基酸是 42 位的丝氨酸 (S42 ; ) 中国 2 组未发现专一性位点; 位的丙氨 426

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酸 (A426 是中国 3 组的专一性位点氨基酸; 位的 ) 90 天门冬氨酸 (N90) 是中国 4 组的专一性位点氨基 酸; 中国 5 组共有 3 个组专一性氨基酸位点, 分别 是 60 位 (L60 和 80(L80 位的亮氨酸以及 371 位 ) ) 的苏氨酸 (T371 ; ) 中国 7 组共有 5 个专一性氨基酸 位点, 分别是 114 和 448 位的天门冬氨酸 (N114) 、 322 位的异亮氨酸 (I322 、 位的精氨酸 ) 352 (R352 ) 和 401 位的甘氨酸 (G401 ; ) 中国 8 组共有 2 个氨基 酸专一性位点, 分别是 61 位的丝氨酸 (S61 和 95 ) 的缬氨酸 (V95 。见表 4。 )

2. 5 中国狂犬病病毒的进化速率和起源时间分析 用贝叶斯中马尔科夫链的蒙特卡洛方法 (Bayesian MCMC) 估计中国 RV N 基因核苷酸的平 均碱基替代率为 1. 408 9 × 10-4 取代 / 位点 年 · (95% 置信区间: 224 7 × 10-5 ~ 2. 369 0 × 10-4 取代 / 位点· 5. 年 。用相同的方法, ) 可以估计中国 RV 祖先出现的 时间为公元 968 年 (95% 置信区间: ~ 1589 年) -3 。 同时利用后验概率法, 推断出一个最大分支可信树 (Maximum clade credibility, ) 见图 2。 MCC ,

中国 1 组

中国 2 组 中国 3 组

中国 4 组

中国 5 组 中国 6 组 中国 7 组 中国 8 组

图 2 68 株中国 RV N 基因 MCC 树 Fig 2. MCC tree of N genes of 68 RV isolates in China 注: 关键分支点显示概率大于 70%及祖先序列出现的时 间 (TMRCA , ) 括号内为分化时间的 95%置信区间, 水平分支 代表分化时间 表 3 中国 RV N 基因组间核苷酸和氨基酸之间的差异性 ) (% Tab 3. Inter-group divergences of nucleotides and amino acids of RV N genes in Chinese RV isolates(% )
组别 中国 1 中国 2 2. 1 9. 9 12. 5 11. 9 13. 9 14. 0 16. 0 13. 6 13. 0 11. 4 14. 8 15. 2 17. 2 14. 7 11. 9 15. 9 15. 5 17. 4 14. 8 14. 8 13. 9 15. 8 14. 2 12. 2 13. 0 11. 0 9. 0 8. 0 8. 6 中国 3 中国 4 2. 3 2. 2 1. 7 1. 8 2. 7 中国 5 中国 6 2. 2 1. 9 2. 6 2. 6 2. 3 2. 7 2. 9 2. 7 2. 8 中国 7 中国 8 5. 2 5. 7 5. 5 5. 6 5. 3 5. 1 2. 7 2. 9 3. 1 3. 1 2. 8 2. 7 5. 6

图 1 中国株和疫苗株 N 基因 NJ 进化树 Fig 1. Neighbor-Joining phylogenetic tree of N genes of RV isolates and vaccine strains in China

中国 1 中国 2 中国 3 中国 4

2. 4 选择压力分析 通过计算得到 ω = dN / dS = 0. 053, 该值非常 小, 大约 20 次同源取代才会发生一次非同源取代。 在 α = 0. 1 水平下, 个氨基酸位点中未发现正 450 性选择位点, 220 个负性选择位点。 有

中国 5 中国 6 中国 7 中国 8

注: 左下是核苷酸的差异; 右上是氨基酸的差异性

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表 4 中国 8 组 RV N 蛋白特异性位点比较 Tab 4. Multiple alignments of nucleoproteins of the Chinese RV isolates at specific sites
组别 40 中国 1 中国 2 中国 3 中国 4 中国 5 中国 6 中国 7 中国 8 S S S S S C C C 42 S T T T T T T T 60 M M M M L M M M 61 N N N N N N N S 80 F F F F L F F F 90 T T T N T T T T 95 L L L L L L L V G 106 D D D D 110 E D E D E E E E 114 T T T T T T N T 位点 128 L L V L L L M L P 135 S A A S P S 179 V I V I V V V V 322 V V V V V V I V 352 K K K K K K R K 371 A A A A T A A A 379 L V V L V V V V 401 407 S S S S S S G S T T T T A T A T 426 S S A S S S S S 448 S S S S S S N S

注: 空白处表示在此位点该组不同毒株有两种以上氨基酸残基

3.

讨论 从构建的进化树分析可见, 中国的 RV 株可分

核酸酶的破坏, 同时该复合物具有高度的抗蛋白水 解酶特性; 蛋白参与调节病毒 RNA 的转录与复 N 制, 具有调控作用, 对病毒对宿主的适应起到非常重 [14] 要的作用 。 RV 其他结构基因编码的蛋白进行 对 分析也发现, 它们受到选择抑制作用[15]。已经知道 正性选择 (ω > 1 能够赋予蛋白质新的结构或功能, ) 有利于个体的生存和繁殖, 就病毒而言, 有利于病毒 的增殖并适应新的环境, HIV 结构基因 nef 中发 如 现多个位点受到正性选择[16,17], 这些正性突变有利 于病毒的生存, 但不利于人类研制疫苗或抗病毒药 物。目前尚未发现 RV 与诱导机体产生免疫应答的 两个主要蛋白 N 和 G 受到正性选择, 其均受到较强 的净化选择约束, 即负性选择, 这也是 RV 非常保守 以及狂犬病疫苗株可以多年不变的分子基础。 本研究表明中国的 RV 共同祖先大约出现在公 元 968 年, Bourhy 等 [2 ]对犬 RV 的起源研究相 与 符, 该研究表明犬 RV 于 1500 年前起源于印度次大 陆, 其中有一支经东南亚向我国传播。 而分离于中国 [18] 广西的 RV 至少可以分为 4 个组 , 比其他任何一 个省都要复杂, 属于两个进化分支的毒株都有, 因此 RV 在中国其中一条可能的传播路线是印度→东南 亚→中国广西→中国其他省。 本研究对我国吉林、 内蒙古、 河北、 北京、 河南、 山东、 湖北、 湖南、 浙江、 江西、 江苏、 安徽、 广西、 贵 州、 福建、 云南、 重庆、 宁夏、 上海等 20 个省、 自治 市、 区的样品进行了分析, 尽管所用样品未涉及到全国, 但基本可以反映中国狂犬病高发地区的流行特征, 由于中国 RV 的流行情况非常复杂, 还需在更大范 围内系统地开展狂犬病的分子流行病学研究, 分析 流行株与疫苗株之间的关系, 评价流行株与疫苗株 抗原性之间的差异以及 RV 在不同宿主之间的跨种 传播和跨地区传播的模式。

为两个大的进化分支: 中国 1、 3、 可作为一个大 2、 4 的进化分支 (中国分支Ⅰ , ) 均属于亚洲组的分支; 中 国 5、 7、 可作为另一个大的进化分支 6、 8 (中国分支 Ⅱ) 除中国 5 组属于北极和类北极以外, , 其他 3 组 均属于全球组。 中国 RV 各组毒株的分布地域特征已不明显, 有多个省 (自治区) 的分离毒株分组比较复杂, 其中 5 个省 (自治区) 分离的毒株分别属于 3 个组: 广西 (中国 1、 4 、 (中国 1、 6 、 (中国 1、 3、 云南 ) 3、 贵州 ) 4、 8 、 (中国 4、 8 和江苏 ) 河南 6、 ) (中国 1、 8 ; 4 个 6、 有 ) 省 (自治区) 分离的毒株属于 2 个组: (中国 5、 吉林 7 、 (中国 2、 、 (中国 4、 、 (中国 1、 ) 宁夏 4 福建 ) 7 浙江 ) 4 。中国 RV 已在省 ) (自治区 与省 ) (自治区 之间相 ) 互传播, 如中国 3 组只在云南和广西这两个相邻的 省 (自治区) 出现, 而且彼此之间的核苷酸同源性≥ 94. 6%, 氨基酸同源性≥ 98. 7%; 特别是从内蒙古 浣熊体内分离的毒株 NM925 和其相邻的吉林省分 离的毒株 MN1025B 的 N 基因核苷酸序列完全一 致, 这充分证明目前中国的 RV 存在省间传播, 但就 其传播模式及传播速度还需进一步分析。有研究表 明, 野生动物和家养动物的贸易、 迁移对病毒类疾病 [11] 的传播有重要影响 , 如由于人类狩猎使带有 RV 的浣熊从美国的福罗里达州迁移到弗吉尼亚州[12], 以及 1997 年发生在印度尼西亚 Flores 岛的流行[13] 。 通过分析发现, 中国 RV 处于较强的净化选择 约束下 (ω = 0. 053 , ) 表明 RV N 蛋白中的核苷酸突 变主要是同义突变, 且这些突变位点对维持蛋白的 功能起着关键作用, 一旦被替代, 将影响其功能。 RV 核蛋白与基因组 RNA 紧密结合, 形成组织结构严紧 的核糖核蛋白 (RNP 复合物, ) 可保护病毒 RNA 免受

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中国生物制品学杂志 2010 年 5 月第 23 卷第 5 期 Chin J Biologicals May 2010, 23 No. 5 Vol. ) clusters and multi-core desktops. Bioinformatics, 2009, 25 (1 : 126-127. [11] Fèvre EM, Bronsvoort BM, Hamilton KA, et al. Animal move- ments and the spread of infectious diseases. Trends Microbiol, ) 2006, 14(3 : 125-131. [12] Jenkins SR, Winkler WG. Descriptive epidemiology from an epi- zootic of raccoon rabies in the Middle Atlantic States, 1982-1983. ) Am J Epidemiol, 1987, 126(3 : 429-437. [13] Windiyaningsih C, Wilde H, Meslin FX, et al. The rabies epi- demic on Flores Island, Indonesia (1998-2003 . J Med Assoc ) ) Thai, 2004, 87(11 : 1389-1393. [14] Kissi B, Tordo N, Bourhy H. Genetic polymorphism in the rabies ) virus nucleoprotein gene. Virology, 1995, 209(2 : 526-537. [15] Delmas O, Holmes EC, Talbi C, et al. Genomic diversity and evo- lution of the lyssaviruses. PLoS One, 2008, 3(4 : e2057. ) [16] Crandall KA, Kelsey CR, Imamichi H, et al. Parallel evolution of drug resistance in HIV: failure of nonsynonymous / synonymous substitution rate ratio to detect selection. Mol Biol Evol, 1999, 16 (3 : 372-382. ) [17] Bielawski JP, Yang Z. Maximum likelihood methods for detecting adaptive evolution after gene duplication. J Struct Funct Ge- nomics, 2003, 3(1-4 : 201-212. ) [18] Liu Q, Xiong Y, Luo TR, et al. Molecular epidemiology of rabies ) in Guangxi Province, south of China. J Clin Virol, 2007, 39(4 : 295-303. (收稿日期: 2009-08-31 )

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【消息】

《生物技术药物研究开发和质量控制》 2 版 征订启事 (第 )
《 由中国药品生物制品检定所副所长王军志研究员主编 的 《生物技术药物研究开发和质量 控制》 一书自 2002 年 10 月首次出版以来, 在生物技术药物领域获得了广泛好评。应 科学出版社约稿和广大读者要求, 主编及编委们对原著进行 了补充和修订。 第二版仍分为上下两篇, 30 章。上篇系统地介绍了生 共 物技术药物的研制、 开发和非临床研究的全过程以及贯穿于 全过程的质量控制要点和技术要求, 同时在原有内容基础 上, 增加了生物技术药物药效学研究和临床观察的章节, 并 根据药效学研究基本原则, 结合生物技术药物特点作了详细 介绍。并在其他章节里补充了近年来相应领域的最新研究成 果, 下篇根据生物技术药物发展的趋势和热点, 做了相应调 并 整, 增加了 20 个新品种的质量控制研究方法与标准实例, 重点对质量标准和生物学活性测定等质控方法进行了阐述。 全书努力从生物标准化的视角出发, 将美国 FDA、 欧盟、 ICH、 WHO 等国际技术指导原则与我国生物技术产品由研发 至临床全过程质控研究的实践经验相结合, 综合反映了我国 特别是"十五"期间生物技术药物质量研究的成 近 10 年来, 果, 可作为广大从事生物技术药物研究开发领域的科研工作 者、 教师、 学生、 药品注册人员、 质量检定人员等的参考书。 本书售价为人民币 228. 00 元整, 为方便广大读者, 我们 提供现场或通过邮购方式购买该书, 具体方式如下: 现场购书: 北京天坛西里 2 号, 中国药品生物制品检定所 档案室, 可现场开具购书发票。 邮购方式: 请到当地邮局办理汇款, 汇款金额 = 书价 × 册数 + 全款 × 10%邮费, 汇款后请将汇款凭证及您的购买册 数、 购书人姓名、 地址、 邮编和开具发票的单位、 联系电话发 传真到档案室, 以便于及时联系, 保证书籍安全到达。 收款人姓名: 中国药品生物制品检定所档案室 收款人地址: 北京天坛西里 2 号 邮政编码: 100050 联系电话: 010-67095503, 67095324 联系人: 耿老师 崔老师 传真: 010-65113987


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