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中国兰的组织培养


中国兰的组织培养
中 国 兰 花 是 狭 义 的 兰 花 , 又 称 国 兰 、东 洋 兰 , 系 蕙 兰 属 ( Cymbidium) 中 的 部 分 地 生 兰 。 按 花 期 可 大 致 分 为 : 春 兰 ( C.gogeringii) 、 建 兰 ( C. ensifololiunm) 、 寒 兰 ( C. kanran) 、 墨 兰 ( C. sinense

) 等 , 其 味 幽 香, 花色淡雅, 具有很高的观赏价值。中国兰花组培再生植株,已有许多成 功 的 研 究 ,程 序 是 :从 外 植 体 / 种 子 开 始 、诱 导 形 成 原 球 茎 、原 球 茎 (根 状 茎 ) 大量增殖、分化出小植株、生根壮苗培养、驯化。许多种类还要经过根状茎 阶段,才能形成完整植株。 ( 1)外 植 体 。在 国 兰 组 培 中 , 受 技 术 、母 体 数 量 等 因 素 制 约 , 应 用 的 外 植 体 种类相对较少,使用较多、并较易获成功的是顶芽和腋芽,一般认为顶芽优 于腋芽。对复轴生长类型的洋兰更适合茎尖作为外植体。但对稀有名贵的国 兰品种而言使用顶芽等于损失了苗,代价太大。春兰、墨兰、建兰等均可用 苞叶未展开的新芽的茎尖诱导出大量的类原球茎, 类原球茎发育成根状茎后 ( 根 状 茎 为 地 下 的 变态茎之 一 , 横 生 的 肉 质 茎 , 具 有 明 显 的 节和 节间, 先 端 生 有 顶芽,节 上 通 常 有 退 化 的 鳞片叶 与 腋 芽 ,并 常 生 有 不定根)进 一 步 长 成 幼 苗 ; 茎 尖 及 侧 芽 带 1~ 2 个 叶 原 基 的 茎 圆 锥 成 活 率 高 , 中 间 部 位 侧 芽 成 活 率 较 高 , 从 长 l- 2 cm 、 苞 叶 未 展 开 的 新 芽 上 切 取 茎 尖 则 成 功 率 更 高 , 过 小 的 外 植 体 不 但 活 力 弱 , 而 且 分 裂 增 殖 的 部 位 少 , 过 大 的 外 植 体 , 诱 导 困 难 ,容 易 褐 化 死 亡 ; 种 子 , 兰 花 种 子 非 常 细 小 , 每 粒 种 子 长 约 1 - 2 mm , 直 径 0.1- 0.2 mm, 重 量 只 有 0.3- 6.5 g, 且 种 子 内 的 胚 多 半 不 成 熟 或 发 育 不 完 全 , 种皮致密、透性差或种皮中含有抑制物,难以在自然条件下萌发。以后发现 兰花种子萌发伴随着真菌感染的现象,从而用兰花根菌感染兰花的种子进行 萌 发 试 验 ,取 得 共 生 萌 发 方 法 的 成 功 , 现 在 种 子 的 非 共 生 萌 发 方 法 亦 获 成 功 , 并 成 为 兰 花 组 织 培 养 的 兴 趣 点 , 用 0. 1 m ol/ L 的 氢 氧 化 钠 浸 泡 多 花 兰 、 朵 朵 香 、 双 飞 燕 、 寒 兰 、 套 叶 兰 等 10~ 30 min ,萌 发 率 可 提 高 10 倍 以 上 。 风 兰 ( Neofinetia) 的 成 熟 种 子 用 肥 皂 水 洗 净 后 ,用 70 %的 酒 精 浸 泡 30 s 利 于萌发。这些预处理效果的生理机制虽尚难确定,但兰花种子用于组织培养 的前景极富吸引力。大部分的种子可通过无菌萌发的方式进行萌发,附生或 半 附 生 兰 和 气 生 兰 及 杂 交 后 代 的 种 子 萌 发 较 易 ,而 地 生 兰 种 子 的 萌 发 较 难 ;有 报道用春兰成年植株的根状茎成功诱导出完整植株。 ( 2)基 本 培 养 基 。中 国 兰 组 织 培 养 的 不 同 阶 段 对 培 养 基 要 求 不 同 ,如 用 于 原 球 茎 诱 导 增 殖 的 培 养 基 ,常 用 的 是 改 良 的 M S、 White、 VW、 Knudson C、 Kyoto等 。 春 兰 以 无 机 盐 浓 度 高 、 氨 态 氮 含 量 低 、 生 长 素 含 量 高 的 培 养 基 为 好 ;蕙 兰 、建 兰 等 则 以 无 机 盐 浓 度 较 高 ,生 长 素 含 量 较 低 的 培 养 基 为 宜 。对 于 培 养 基 中 无 机 盐 的 量 , 春 兰 ( C. goeringii) 要 求 要 少 , 惠 兰 ( C.faberi) 要 求 的 量 较 大 , 而 墨 兰 ( C. sinense) 则 不 敏 感 。 蔗 糖 作 为 培 养 基 的 能 源 物 质 和渗透调节剂, 对原球茎的生长影响较大, 因此一般情况下, 蔗糖是首选碳 源 , 且 不 同 浓 度 对 兰 花 组 培 的 作 用 不 同 。 浓 度 2 %蔗 糖 对 兰 属 原 球 茎 生 长 最 好 , 用 浓 度 2 %~ 3 % 蔗 糖 促 进 芽 的 形 成 , 而 根 的 分 化 和 生 长 则 用 浓 度 5%蔗 糖最适合。

( 3) 植 物 生 长 物 质 。 用 0. 5mg/ L NAA + 1. 0mg/ L BA 有 利 于 墨 兰 根 状 茎 的 增 殖 ; 培 养 基 中 添 加 2. 0mg/ L BA + 0. 2mg/ L NAA 时 ,建 兰 原 球 茎 既 能 增 殖 又 能 分 化 ,成 苗 率 较 高 且 根 系 健 壮 ; BA(1. 0 ~ 5. 0 mg/ L) 与 2 ,4- D(0. 5~ 2. 0mg/ L) 配 合 使 用 有 利 于 花 梗 诱 导 出 原 球 茎 ; 在 MS 培 养 基 中 , 当 细 胞 分 裂 素 / 生 长 素 的 比 值 为 3. 0 时 , 愈 伤 组 织 的 诱 导 率 最 高 , 可 达 60 %, 伤 组 织 诱 导 及 芽 苗 分 化 适 宜 的 BA 与 IBA 的 浓 度 分 别 为 1. 5mg/ 愈 L 、0. 5mg/ L , 而 添 加 IBA0. 1mg/ L 与 6 - BA0. 5mg/ L 的 1/ 2MS 培 养基对于外植体的继代增殖及壮苗生根较为有利。 ( 4) 培 养 方 式 与 条 件 。 春 兰 原 球 茎 生 长 与 分 化 成 苗 在 液 体 培 养 时 有 较 好 结 果 ,显 然 是 振 荡 培 养 通 气 好 , 原 球 茎 与 液 体 可 充 分 接 触 , 能 更 好 地 吸 收 营 养 ; 建兰用液体悬浮培养方式明显地促进原球茎的增殖速度和分化成苗程度并可 提高原球茎的增殖率; 在兰花的整个生产过程中, 利用半固体培养或液体培 养进行原球茎增殖, 利用固体培养分化和生根, 可增加繁殖系数, 降低污染, 减 少 成 本 , 有 利 于 大 规 模 生 产 。 培 养 条 件 : 培 养 温 度 在 ( 25±3) ℃最 好 , 培 养 室 相 对 湿 度 一 般 保 持 在 70 %~75 %最 适 。培 养 基 一 般 呈 弱 酸 性 , 中 国 兰 比 较 敏 感 , pH 值 以 5.1~5.4 为 宜 。 建 兰 原 球 茎 增 殖 较 为 适 宜 的 pH 值 是 5.0±0.2, 以 pH 值 为 5.0 最 佳 。 另 外 , 无 机 离 子 与 射 线 辐 射 对 根 状 茎 的 生 长 发 育 也 有 作 用 。在 培 养 基 中 加 入 低 浓 度 的 La( CH3COO) 3 , 可 促 进 墨 兰 根 状 茎 增 粗 , 加 快 顶 芽 生 长 。 应 用 低 剂 量 的 6 0 Co 射 线 对 墨 兰 根 状 茎 绿 芽 进 行 照 射 后 , 有 效 促 进 了 绿 芽 的 分 化 。高 压 静 电 场 促 进 舟 山 春 兰 愈 伤 组 织 的 生 长 。 中国兰花的组培虽已取得较大进展, 但相较于洋兰还有很多技术急需改进 和发展。如国兰的试管苗移栽后生长缓慢和开花迟的问题, 天然提取物在组 培中的作用, 兰花共生菌根及其应用都需要进一步研究。 1 实例 ( 1) 建兰的组织培养 ①材 料 与 方 法 : 用 永 福 素 为 材 料 。取 3- 7 ㎝ 长 ,生 长 健 壮 叶 片 尚 未 展 开 的 新 生 芽 , 用 自 来 水 冲 洗 干 净 。用 70% 酒 精 浸 泡 15s,再 用 无 菌 水 冲 洗 2 遍 : 然 后 用 ,0.1% 升 汞 灭 菌 10min, 最 后 用 无 菌 水 冲 洗 4 -5 次 : 在 无 菌 条 件 下 剥 取 茎 尖 组 织 和侧芽(腋芽)作为外殖体。 ②培 养 基 : 诱 导 原 球 茎 用 改 良 的 MS 大 量 元 素 、 量 元 素 减 半 ) NAA6mg/L +10% ( 微 + 椰 子 汁 , PH5.4 原 球 茎 增 殖 用 MS+NAA1-2mg/L + PH5.4 根 状 茎 分 化 出 芽 和 根 用 1/2MS+BA2mg/L+NAA0.2 mg/L+ 10 % 香 蕉 泥 , PH5.4 移栽基质用水苔 ③结 果 : 10 % 椰 子 汁 +0.1 % 活性炭,

原球茎的诱导。茎尖及侧芽外殖体在诱导原球茎的培养基中,温度 25±3℃ , 暗 培 养 , 120d , 可 诱 导 出 原 球 茎 。 外 殖 体 较 小 , 75 % 褐 变 死 亡 。 用 较 大 外 殖 体 ,适 当 降 低 培 养 的 温 度 .进 行 暗 培 养 可 以 减 轻 褐 化 。 原 球 茎 的 增 殖 培 养 。 把 诱 导 出 的 原 球 茎 转 到 增 殖 培 养 基 , 温 度 25±3℃,光 照 强 度 1000Lx,12h 的 条 件 下 进 行 培 养 。30d 后 观 察 根 状 茎 增 殖 了 6 倍 , 每芽分枝数达 8 个。 分 化 培 养 及 小 植 株 的 形 成 。 获 得 的 根 状 茎 转 入 根 状 茎 分 化 培 养 基 , 30d 将 约 后 , 根 状 茎 顶 端 开 始 分 化 形 成 芽 , 再 经 过 20d 左 右 , 芽 基 部 分 化 出 根 , 形 成 完 整 的 植 株 。 出 苗 较 快 , 整 齐 , 出 苗 率 较 高 达 148% , 植 株 根 系 健 壮 。 根 状 茎 的 分 割 不 可 太 小 ,培 养 群 体 不 宜 太 少 ,否 则 根 状 茎 生 长 不 良 ,甚 至 死 亡 。 试管苗的移栽。兰花试管苗适应外界条件的能力较差,移栽养护技术难度 较 大 。 小 植 株 形 成 后 再 经 过 30d-45d 的 培 养 , 当 试 管 苗 长 6-8 cm 有 3 片 真 叶 时 , 进 行 7d 的 室 温 炼 苗 。 移 栽 前 , 将 粘 附 在 根 系 上 的 培 养 基 洗 净 ( 注 意 不 可 伤 根 ),用 0.2% 甲 基 托 布 津 溶 液 浸 泡 15min,然 后 移 栽 栽 培 基 质 中 , 保 持 温 度 15-25℃, 空 气 相 对 湿 度 80% 左 右 的 条 件 下 进 行 养 护 , 并 定 期 施 用营养液。 ( 2) 彩 心 建 兰 簇 生 原 球 茎 形 成 组 织 培 养 ①材 料 方 法 选 取 当 年 新 长 出 的 长 度 为 2~ 4cm 的 新 芽 。 菌 处 理 后 剥 出 0. 5~ 1. 无 5cm 长 的 茎 尖 生 长 点 部 分 , 进 行 第 二 次 消 毒 , 直 接 接 种 在 培 养 基 上 培 养 . 一 个 月 后 , 将 外 植 体 转 移 一 次 , 待 簇 生 原 球 茎 形 成 后 , 每 隔 3~ 4 周 进 行 切 割 繁 殖 , 同 时 亦 可 进 行 分 化 培 养 , 培 养 室 温 度 25±2 ℃ , 光 照 12h /d, 光 照 强 度 2000~ 4000 lx. ②培 养 基 原 球 茎 诱 导 培 养 基 : MS+ 0. 2mg/L NAA + 3mg/L BA ; B 5 + 5mg/L NAA + 1mg/LBA 簇 生 原 球 茎 的 形 成 培 养 基 : MS+0. 2mg/L NAA + 2 . 2 mg/L BA + 1mg/L 4PU -30( 苯 基 脲 类 细 胞 分 裂 素 ) 。 芽 分 化 培 养 基 : M S+ 0. 2mg/L NAA + 2. 2mg/L BA + 1 mg/L 4PU -30.含 0. 3% 活 性 炭 成 苗 培 养 基 : 1 /2M S+ 0. 4mg/L BA + 0. 6mg/L NAA 以 上 培 养 基 中 均 添 加 10% 椰 子 汁 . 移栽基质:泥炭土 ③结 果 : 原 球 茎 的 诱 导 。 茎 尖 生 长 点 部 分 接 种 在 原 球 茎 的 诱 导 培 养 基 上 , 6周 后 , 有 的 外 植 体 基 部 开 始 膨 大 ,外 植 体 由 浅 白 色 变 成 淡 绿 色 的 突 起 , 逐 渐 形 成 球 状; 若不及时转移, 还会在有的外植体圆球茎周围长出灰白色毛状物. 簇生原球茎的形成。待培养6 周后, 将外形膨大的外植体切成2 小块, 三 周 后 ,, 外 植 体 , 在 其 四 周 陆 续 分 化 出 许 多 聚 集 在 一 起 的 簇 生 原 球 茎 , 将 簇 生 原 球 茎 分 割 成 许 多 小 块 , 如 果 将 一 部 分 转 移 到 BA 1mg/L 的 M S 培 养 基 中 , 2~ 3 周 后 , 可 以 分 化 出 许 多 小 苗 。

芽 的 分 化 。将 分 割 的 簇 生 原 球 茎 , 转 接 到 芽 的 分 化 培 养 基 上 ,在 连 续 照 明 下 , 小 苗 粗 壮 , 根 系 发 育 良 好 ,口 6 周 后 , 形 成 了 叶 芽 和 花 芽 . 花 芽 生 长 迅 速, 显现花蕾 , 继而可在试管内开花,成为试管微型兰花。 兰 花 试 管 苗 的 形 成 。 由 增 殖 的 原 球 茎 上 分 化 出 的 新 芽 长 到 4 ~ 6cm 时 , 从 茎 基 部 切 下 , 转 移 到 成 苗 培 养 基 , 2~ 3 周 后 , 可 形 成 许 多 粗 壮 的 白 根 , 当 长 出 3 或 4 片 叶 后 , 可 练 苗 驯 化 , 移 植 在 含 泥 炭 土 的 花 盆 中 , 1~ 2 周 后就可长成正常的兰花植株. ( 3) 建 兰 快 繁 ①材 料 方 法 : 取 1-2cm 新 芽 , 在 Vc 中 浸 泡 20min , 用 75 % 酒 精 漂 洗 0.5-1min , 再 用 0.1 % Hgcl 消 毒 5-6min, 无 菌 水 冲 洗 7-8 次 , 无 菌 条 件 下 剥 取 0.1 -0.2cm 茎 尖 , 种 。 养 条 件 为 温 度 昼 25℃夜 18-20 ℃ , 光 照 12h,光 强 1000-2000Lx。 接 培 ②培 养 基 诱 导 培 养 基 : MS+1 - 2mg/L NAA + 3-4 mg/L BA, PH5.6 , 增 殖 培 养 基 : 改 良 M S+1 - 2mg/L NAA + 2-3mg/L BA, PH5.6 芽 分 化 培 养 基 :改 良 MS+3mg/L NAA +4mg/L BA,PH5.6( 可 一 次 成 苗 ) 移 栽 基 质 : 苔 藓 : 腐 殖 土 : 壤 土 =1: 1: 1了 ③结 果 : ③ 原 球 茎 的 诱 导 。 茎 尖 接 入 诱 导 培 养 基 后 , 35d有 原 球 茎 突 起 , 50d诱 导 率 69% 功 原 球 茎 的 增 殖 。 原 球 茎 接 入 增 殖 培 养 基 后 , 70d增 殖 40倍 芽 的 分 化 一 次 成 苗 。 将 增 殖 的 原 球 茎 接 入 芽 分 化 培 养 基 , 70d 出 芽 , 80d 长 叶 同 时 有 2-3条 根 , 90d成 苗 。 驯化移植。将试管苗常规驯化后移栽基质,以不分株丛苗移栽最好。 ( 4) 中 国 春 兰 原 球 茎 的 诱 导 和 增 殖 中 国 春 兰 ( Cymbidium goeringii (Rchb. f . ) Rchb. f . ) 是 中 国 兰 花 大 家 族 中 品 种 最 丰 富 多 彩 的 一 个 种 ,也 是 繁 殖 最 困 难 的 一 个 种 之 一 ,一 般 繁 殖 系 数 很 低 ,最 多 1 年 2 - 3倍 ,而 那 些 名 贵 品 种 繁 殖 系 数 更 低 些 。 随 着 国 兰 野 生 资 源 日 益 稀 缺 ,加 快 国 兰 的 繁 殖 速 度 ,更 好 地 保 护 国 兰 品 种 资 源 ,是 我 国 兰 花 科学研究的重要任务。 ①材 料 方 法 : 。 中 国 春 兰 ( Cymbid ium goeringii (Rchb. f . )Rchb. f . ) 品 种 。 取 芽 或 种 荚 , 先 用 洗 洁 精 泡 洗 30min ,然 后 用 自 来 水 冲 洗 干 净 ,搁 燥 后 在 超 净 台 上 用 75 %酒 擦 洗 外 表 ,再 在 1 %升 汞 中 浸 洗 约 5 - 6min ,用 无 菌 水 反 复 冲 洗 3 4 次 ,搁 干 。 切 去 茎 芽 外 包 被 或 解 剖 种 荚 ,取 芽 尖 或 种 子 接 种 于 原 球 茎 诱 导 培 养基。 ②培 养 基 诱 导 培 养 基 : 1/ 2 MS +0. 7 %琼 脂 糖 + 30g 蔗 糖 + + 0. 01 %活 性 炭 ,pH 值 为 5. 4 - 5. 6 增 殖 培 养 基 : A号 , 1/ 2MS + 0. 1~ 0. 5BA + 0~ 0. 01NAA + 0 .7 % 琼脂糖(琼脂中不带电荷的中性组成成份,也译为琼胶素或琼胶糖,商店可

买 到 ) + 30g 蔗 糖 + 0. 1 %活 性 炭 ,pH 值 为 5. 2 - 5. 4; B号 , 1/ 2MS + 0. 1 - 0. 5BA + 0 -0 101NAA + 30g 蔗 糖 + 0. 1 %活 性 炭 ,p H 值 为 5. 2 - 5. 4。 ③结 果 : 原 球 茎 的 诱 导 。茎 尖 接 入 诱 导 培 养 基 后 ,4 - 6 个 月 诱 导 出 芝 麻 大 小 浅 绿 色 原球茎。 原 球 茎 的 增 殖 。原 球 茎 转 接 到 增 殖 培 养 基 A号 ,培 养 1 - 2 个 月 原 球 茎 长 至 米 粒 大 小 , 转 接 到 增 殖 培 养 基 B号 ,交 替 培 养 2 - 3次 ,原 球 茎 增 殖 速 度 加 快 ,形 成 由许多原球茎组成的指状大小原球茎团,原球茎增多可切割成数小块,置于 全 震 荡 培 养 箱 内 培 养 ,温 度 控 制 在 24 ℃- 26 ℃ , 转 速 调 至 80 -100rpm。约 15 - 20d ,几 乎 每 个 原 球 茎 上 可 长 出 3- 4 个 白 色 籽 麻 粒 大 小 原 球 茎 , 约 30 - 40 d ,原 球 茎 多 的 可 增 加 到 十 余 个 ,大 的 长 至 有 米 粒 大 小 ,这 样 分 割 继 代 培 养 多 次 , 原球茎增殖系数可大大提高。 从原球茎出发诱导芽的分化途径就比较多。 ( 5 ) 春 兰 (Cymbid ium goeringii) 继 代 的 根 状 茎 增 殖 诱 芽 春兰组培已到了诱导出根状茎阶段,并以根状茎出发增殖诱芽的方法,如 利用盆栽或野生状态下所取的根状茎要经过严格的消毒程序。 ①材 料 方 法 : 。 用 春 兰 继 代 、 生 长 均 匀 的 根 状 茎 为 接 种 材 料 。 (A)切 取 根 状 茎 端 部 1cm长 , 无 分 枝 小 段 ,用 于 根 状 茎 增 殖 ; (B)切 取 根 状 茎 端 部 1.5 - 2cm长 ,有 3 - 5个 分 枝 点 的 小 段 , 用 于 根 状 茎 诱 芽 。 全 部 用 100ml 三 角 锥 瓶 , 固 体 培 养 基 30 50ml/瓶 ,薄 层 液 体 静 置 培 养 10ml/瓶 。 ②培 养 基 根 状 茎 增 殖 培 养 基 : 固 体 培 养 基 。 1 /2MS (维 生 素 不 减 半 ) + NAA5mg/L +椰 乳 100g/ L+活 性 炭 3g/L +20g/ l糖 + 8.5g/L琼 脂 ; 液 体 培 养 基 。 同 固 体培养基不加琼脂。 光 照 : 全 光 (双 支 日 光 灯 12h/d) 根 状 茎 诱 芽 培 养 基 : 液 体 培 养 。 1 /2MS (维 生 素 不 减 半 ) +NAA0.2mg/L +BA2mg/L + 蔗 糖 20g/L ; 固 体 培 养 。 1 /2MS ( 维 生 素 不 减 半 ) +NAA012mg/L +BA2mg/L +糖 +琼 脂 8.5 g/L, 白 糖 30g/L 。 培 养 条 件 :培 养 室 温 度 为 25℃左 右 ,光 照 时 间 12h /d,培 养 时 间 为 3个 月 。 ③结 果 : 固 体 跟 液 体 培 养 比 较 ,就 根 状 茎 增 殖 而 言 ,固 体 培 养 优 于 液 体 培 养 达 8 倍 以 上 。 加 活 性 炭 对 增 殖 有 利 。 3个 月 的 诱 芽 , 可 达 80% 以 上 诱 导 率 。 ( 6) 西 藏 虎 头 兰 组 培 组 ①材 料 方 法 : 西 藏 虎 头 兰 (Cymbidium tracyanum L.Castler.) 种 子 。 取 人 工 授 粉 480 d 成 熟 尚 未 开 列 朔 果 , 经 自 来 水 洗 净 后 , 滤 纸 吸 干 水 份 , 在 超 净 工 作 台 上 , 置 于 10%次 氯 酸 钠 溶 液 中 消 毒 20 min ,用 75% 的 酒 精 表 面 消 毒 30 s, 再 以 0.1%的 升 汞 溶 液 消 毒 15 min, 最 后 用 无 菌 水 冲 洗 5~6 次 。 将 洗 净 的 成熟朔果置于灭菌滤纸上吸干水分, 用解剖刀切开蒴果, 将种子散落到培养 基上。

②培 养 基 种 子 萌 发 培 养 基 : S+100ml/L 洋 芋 汁 + 3.0%蔗 糖 + 0.6%琼 脂 , pH 5.2 M - 5.4。 培 养 温 度 25±2 ℃ , 光 照 强 度 为 40 molm 2 /s, 光 照 时 间 12 h/d。 (以下均同) 原 球 茎 增 殖 和 分 化 成 苗 培 养 基 : MS+6-BA 0.5+NAA 0 .2+100 ml/L 洋 芋 汁 + 3.0%蔗 糖 + 0.6%琼 脂 , pH 5 .2- 5.4。 生 根 培 养 基 : 1/2M S+IBA 0 .2+ 3.0%蔗 糖 + 0.6%琼 脂 , pH 5 .2- 5.4。 移栽基质:苔藓 ③结 果 : 种子萌发。种子接种到萌发培养基,培养 3 周左右, 可见虎头兰种子肿胀 继而呈乳白色原球体状; 继续培养 8 周后原球茎转绿, 有叶原基出现, 原球 茎 之 间 有 白 色 绒 毛 黏 连 , 萌 发 率 可 达 90% 以 上 。 原球茎增殖和分化成苗。 将带有叶原基的原球茎转移至原球茎增殖和分 化 成 苗 培 养 基 , 培 养 120 d 原 球 茎 长 出 小 芽 , 同 时 小 芽 的 基 部 又 有 新 的 原 球 芽产生。 生 根 培 养 。 将 较 大 的 无 根 苗 转 入 生 根 培 养 基 , 培 养 30 d 左 右 , 即 可 长 出 2- 3 条 约 1cm 长 的 根 ,诱 导 率 达 95%以 上 , 植 株 生 长 旺 盛 , 7 周 后 形 成 3 - 5 cm 的 小 苗 。 移栽。 将培养瓶置于温室中炼苗 2 周后, 从培养瓶中取出生根苗, 洗净 附 着 的 培 养 基 , 将 苔 藓 用 1 000 倍 多 菌 灵 溶 液 浸 泡 1 h, 挤 干 水 分 , 包 裹 出 瓶苗根部, 种植于育苗盘中, 保持适宜温度, 置于阴凉通风处栽培。在此期 间不浇水, 这样有利于新根生长和防止病害发生, 3 周后移入温室中栽培, 正 常 水 、 肥 、 药 管 理 , 成 活 率 可 达 95% 以 上 。


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