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甲胎蛋白AFP ELISA


甲胎蛋白 AFP ELISA
用途: 甲胎蛋白,简称 AFP,是由胎儿肝细胞合成、在胎儿血清中正常存在的一种特殊蛋白。 一般在妊娠后开始上升,至胎龄 16 一 20 周时达到最高峰,然后逐渐下降,至胎儿娩出 后 1 一 5 周完全消失。原发性肝癌患者,血清中 AFP 阳性率常明显升高,超过 400 微克 /升(放射免疫定量法),甚至达 1000 微克/升以上或呈进行性升

高。AFP 的检测不仅有 助于原发性肝癌的诊断,而且可以作为原发性肝癌的疗效考核标准,并可判断预后。此 外,还可作为原发性肝癌的普查方法,通过普查,早期治疗,可以改善预后,甚至获得 治愈。 近年有报道,在肝炎的病程中、如急、慢性肝炎和肝硬变时,伴随肝脏的修复和肝 细胞的再生, 也可产生和分泌 AFP, 血清中 AFP 也会升高, 但通常仅为轻度升高 (<400 微克/升),而且随访动态观察,AFP 水平常逐渐下降甚至消失。重型肝炎病入血清中 AFP 水平升高,常提示肝细胞再生活跃,抢救成活率较 AFP 阴性者高,预后良好。患生 殖系统胚胎性肿瘤如睾丸和卵巢畸胎瘤、消化道肿瘤、胰腺癌伴肝脏转移者,亦常出现 AFP 升高。 但亦有相反报道,认为慢性肝炎时,AFP 阳性表示病情有活动肝硬变时,AFP 长久 阳性且其血浓度居高不降者,往往有并发肝癌之可能。通常病毒性肝炎病程中,AFP 阳 性持续时间多较短暂,约 50%不超过 3 个月。 本试剂盒用于定性检测人血清中的甲胎蛋白 AFP 的浓度。 试剂盒组成: 酶标板(Coated Wells) 终止液(Stop Solution) 显色液(TMB Substrate) 阴性对照(Negative)

96wells 12ml 12ml 1 vial

酶联物(Conjugate Reagent) 零缓冲液(Zero Buffer) 阳性对照(Positive) Cutoff Calibrator

18ml 12ml 1 vial 1 vial

需要但未提供的材料 1. 可在 450nm 处进行读数的酶标仪; 2. 能精确吸取 10 -200?L 的移液器; 3. 可调多道(8)移液器(50-200?L); 4. 供可调多道移液器使用的试剂存放槽; 5. 洗瓶或洗板机; 6. 蒸馏水或去离子水; 7. 1 升的圆柱形量筒; 8. 血清移液器:1 和(10 或 25 mL); 9. 移液器枪头; 10. 纸巾; 11. 计时器,用以监控温育步骤; 12. 处理池和消毒剂(例如:0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水); 注意事项: 1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达

2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

到室温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 洗板不正确可以导致假阳性或假阴性结果。在加入酶联物或底物前确保尽量吸干孔 内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。 消除板底残留的液体和手指印,否则影响 OD 值。 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。 在储存和温育时避免强光直接照射。 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会 破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

标本收集: 1. 用无菌静脉采血程序采集的新鲜血清和正确保存的血清可用在本试剂盒上。不需添 加任何抗凝剂或进行预处理。避免使用溶血标本,脂质标本或微生物污染的血清。 2. 室温(20-25℃)下保存标本不要超过 8 小时。2-10℃保存血清,不超过 48 小时。 如耽搁的时间更长,请在-20℃或更低的温度下保存标本。标本避免多次冻融,这样 可能会损失蛋白活性,产生错误结果。 操作步骤: 试剂盒应平衡至室温再试验。 取出所需反应板。 1. 分别加入 20ul 阳性对照、阴性对照、Calibrator,20ul 血清于反应板孔中。 2. 每孔加入 100ul 零缓冲液。轻轻混匀 30 秒。室温 30 分钟。 3. 洗板:甩尽板内液体,用蒸馏水或者洗涤液(普通洗涤液,自配)洗涤反应板,并 去除水滴(在厚叠吸水纸上拍干);这样反复洗涤 5 次。 4. 每孔加入 150ul 酶联物。轻轻混匀 10 秒。室温 30 分钟。 5. 洗板:同 3。 6. 每孔加入 100ul TMB 显色液,轻轻混匀 10 秒钟,室温温育 10 分钟。 7. 每孔加入 100ul 终止液(Stop Solution)。轻轻混匀 30 秒;确定兰色变为黄色(重 要!)。15 分钟内在 450nm 处读 OD 值。 结果判断 1. Cutoff 值为 Calibrator 的平均值。 2. Index 值=样品 OD 值/Cutoff 的 OD 值 3. Index≥1 为阳性;Index 在 0.91-0.99 间为可疑;Index≤0.90 为阴性。


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