当前位置:首页 >> 农林牧渔 >>

斑点叉尾鮰病毒囊膜蛋白ORF6在昆虫细胞中的表达.pdf


第 !" 卷第 # 期 $%&% 年 # 月 '

水'产'学'报
( * , .) 02 +3 /4 0 ) + - //1 3 01) 2 ,

5 8 , # 67 !"! 68 ( :! $%&% 97

文章编号&%%% ;

%<&="$%&%#%# ; &%!" ; %<

@ 0 !#$" AB (&$!&8 ) $&%8 1 88 $%&%8 %<?="

斑点叉尾

病毒囊膜蛋白 ] B 在昆虫细胞中的表达 (J

黄锋涛& '熊海林& '曹胜波$ '熊传喜& '王'敏& ' 王卫民& '吴'兵& '刘玉林& '刘学芹&
"&8 华中农业大学水产学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室!湖北 武汉'"!%%#%% $8 华中农业大学动物医学院!湖北 武汉'"!%%#%#

摘要 为构建基于杆状病毒表达系统的 4 5新型亚单位疫苗将 4 5的囊膜蛋白基因 ) / 4 4 +<
HR Pb C 克隆至杆状病毒转座载体 U/J H] & 质粒中 并将阳性重组转座质粒转化进含穿梭载体 C P I 的感受态细胞 @ &%C P 获得重组子 LHG OF + < 在脂质体介导下将该重组子 HG O 2 H中 CP I ) /

转染 J 昆虫细胞获得重组杆状病毒 - F + < - F + < 感染的 J 昆虫细胞经超薄切片 Z > 4) / 4) / Z > 电镜观察可见重组杆状病毒呈多粒包埋 经间接免疫荧光 oNR QF 6RQT 检测 4 5 的 J L f7 R N I 4
) / 蛋白可以在感染了 - F + < 的 J 细胞中表达 研究表明 获得了插入 ) / 基因的 +< 4) / Z > +<

重组杆状病毒并且该基因可以在重组杆状病毒介导下在昆虫细胞中表达 从而为基于 4 5 4
) / 的杆状病毒亚单位疫苗研究奠定了基础 +<

关键词 斑点叉尾 病毒 ) / 蛋白 杆状病毒 昆虫细胞 表达 +< 中图分类号 [#?= 1>"&8 "&'''''''文献标识码'' 斑 点 叉 尾

病 毒 " P QQN H I gI ! KH 7PRJ L ZK 9J 养殖的一种重
" M '& $4 / $) +

的重组蛋白在昆虫细胞中得以表达! 并且验证具 有很好的免疫原性!许多产品已完成临床实验!并 很有可能通过美国 / -批准 *=+ ) @
) / 是 4 5的重要囊膜蛋白 *<+ ! 具有较好 +< 4

4 5 属于 "疱疹病毒 ! 由 j Q 于 &>#& 年 首 次 4 # N

报道

*&+

! 是严 重 危 害 斑 点 叉 尾

要病原 ) 该病毒主要感染斑点叉尾

.$"/ $4 鱼苗 ! 引起严重的急性出血性疾病 ! 并 + # '+ >%Y 的 鱼 苗 死 亡 ) 虽 然 ! 该 病 毒 可导致 "%Y ^

的免疫原性!是疫苗和诊断试剂研发的主要靶蛋 白) 本研究利用 C PR C P HF H 杆状病毒表达系统! 6F 在昆虫细胞中表达了 4 5 ) / 基因! 从而为基 4 +<
+< 于 ) / 基因的杆状病毒亚单位疫苗研制奠定

对成鱼的致病力较弱 ! 但成鱼仍可隐性感染 ! 并 成为传染源
*$+

)

我国于上世纪 ?% 年代从美国引进斑点叉尾
!目前许多地区开展了斑点叉尾

基础)

的养殖!并且

规模在不断扩大 流行和发病
*"+

*!+

) 尽管我国目前尚无 4 5 的 4

&'材料与方法
!" 材料 !#

正式报道!但近年来!国内已有疑似疾病的大面积
!因此!开展 4 5疫苗研究!对于该 4

质粒菌株及细胞 '' 含 4 5 ) / 重组质 4 +< 粒 UW bF) / 本实验室刘玉林博士构建%载体 3 ] +< 质粒 U/J H] & 及 @ &%C P由华中农业大学 HR Pb C 2 H
Z > 肖少波博士赠送% 昆虫细胞 J 由中国科学研究

病的预防和控制具有重要意义) 杆状病毒表达系统是当今基因工程四大表达 系统之一) 其表达产物可进行翻译后加工! 其抗 原性(免疫原性和功能等生物活性与天然蛋白相 似!在疫苗研制中具有良好前景) 目前已有大量
收稿日期$%&% %! %!'''修回日期$%&% %= &%

院武汉病毒所王华林博士赠送%@ = "购自北京 2 全式金生物技术有限公司)

资助项目国家自然科学基金项目"!%>%&&&?# %教育部新教师基金项目"$%%#%=%"%"## %湖北省自然科学基金项目"$%%?4 C C %>># % 华中农业大学教师启动基金项目"$%%<l 4 + %"## 通讯作者刘学芹!] 7 N $%$# ; ?#$?$<#<!3G I F H$V9N Q7 7 cI I 9MG I KS98O98Q H8 H N P 7

#期

+< 黄锋涛等斑点叉尾 病毒囊膜蛋白 ) / 在昆虫细胞中的表达

'' #!%'

-A 工具酶及化学试剂等 ' ' . F'C 酶 限 制

- 0 =%% C 洗 ! 次加 @ B&p 稀释  B 1洗 ! 次于倒

酶] @ - 连接酶均购自大连宝生物工程有限 " , 公司2 B@ C底物显色试剂盒购自武汉博士 + F德生物工程有限公司 昆虫细胞培养基及脂质体 转染试剂/] 标记的羊抗兔荧光二抗购自美国 04
0 R Q 公司抗 4 5) / 蛋白的多抗血清由 QgI6TN L 4 +<

置荧光显微镜下观察 同时 设野生型杆状病毒 感染的 J 细胞作对照 Z >
!" \#^/7 9+479 鉴定表达的目的蛋白 0 ,65 7 E / -

用获得的重组杆状病毒和野生型杆状病毒分
Z > 别接种于对数生长的 J 昆虫细胞经 #$ K 感染 Z > C 收集感染的 J 昆虫细胞B 1洗三次后加入裂解 @ F- 3 液裂解细胞经 1 1B W 电泳后转至硝酸纤维 1 C] 薄膜用含 =Y脱脂牛奶与 &YC -的 ] 1 封闭 & 4 +< =% K 后加入抗 4 5) / 兔多抗血清&p 稀释

本实验室制备
!" 重组转移载体 F *0 ] B 的构建 $# B 7 (J 6 / 2* 3 ] +< 用 : *+ % 和 F % 双酶切 UW bF) / 质粒 将 切 下 来 的 目 的 基 因 4 5 ) / 连 接 到 4 +< U/J H & 质粒的相应位点转化感受态 @ = " HR P C 2 HR + < F / 细胞得到重组质粒 U/J) / 用 : *+ % 酶切
] b

于室温摇床孵育 $ K] 1 洗 ! 次每次= GQ然 C] I
+ TW "%% 后加入 2 B标记的羊抗兔 0 &p 稀释于室

鉴定将酶切鉴定正确的质粒送至英骏生物技术 有限公司测序鉴定
!" 重组子 , *@ 2] B 的构建 %# X .-6 ( J H F+ < R 用重 组 转 移 质 粒 U/J) / 转 化 感 受 态 @ &%C P 2 H 细胞在含有卡那霉素庆大霉素四环素

温摇床孵育 & K 后经 ] 1 洗 ! 次后 加入 @ C C] 显色用成像系统进行拍照

$'结果
$" 重组转座载体 F *0 ] B 的构建及酶切 !# B 7 (J 6

三种抗性及 0] l TH的平板上通过蓝白斑筛选 BW F 7 重组子 将挑取的白色菌落经含有相同抗生素的 液体 . 培养基摇菌过 夜 提 取 重 组 子 LHGOF C CP I
) / 用 0 R Q 公司 C P 6FH 表达系统操作 + < QgI6TN L HF C P R

鉴定 将 UW bF) / 质粒用 :*+ 和 F % 3 ] +< / % 2* 双酶 切后得到约 "$% fU 的目的片段 4 5) / 将该 4 + < 片段连结到用相同内切酶酶切的 U/J H] & 质 HR Pb C 粒 上 构 建 得 到 重 组 转 移 载 体 U/J) / 将 HR + < F
U/J) / 载体经 :*+ 单酶切后切出约 = $%% HR + < F / % fU 的片段与预期的大小相符 图 & 经测序通过

手册提供的通用引物 B 4 b&! 进行 B +鉴定获 * A 4 得正确的重组子命名为 LHGOF+ < CP I ) /
!" 重组杆状病毒的制备 <#

用碱法提取重组子 LHG OF + < @ -及野 CP I ) / ,
PI ,  QgI6TN L HF H 6F 生型 fHG O @ - 按 0 R Q 公司 C PR C P

序列分析进一步验证目的基因正确的插入到载体
+< 中并且 ) / 基因序列无误

表达 系 统 操 作 手 册 将 LHG OF + < @ - 与 CP I ) / ,
fHG O @ -分别在脂质体介导下转染对数生长 PI ,

期的 J 昆虫细胞经过三轮感染 获得高滴度重 Z > 组杆状病毒和野生型杆状病毒
!" 重组杆状病毒超薄切片电子显微镜观察 I# Z > 将重组杆状病毒感染 J 细胞 #$ K 后 弃掉

培养液加 $8 的戊二醛固定 &= G Q 将 J 细 =Y I Z > 胞刮集于 &8 G 的 3 管中$ %%% LG Q 离心 = . B AI
&= G Q弃上清将细胞沉淀送由中国科学研究院 I

武汉病毒研究所完成切片及电子显微镜操作
!" 间接免疫荧光分析目的蛋白的表达 J# Z > C 重组杆状病毒感染 J 细胞 #$ K 后 用 B 1 I C 洗 ! 次&%%Y甲醇固定 &= G Q B 1洗 ! 次后 1 = 用含 &Y的 C -与 =Y 羊血清于室温封闭 %8 K 4 +< =% 后加入抗 4 5 ) / 兔多抗血清 & p 稀释 
产物

B 7 (J 6 图 !#重组质粒 F *0 ] B 的酶切鉴定
b@ .&= %%% bH L & U/J) / 载 体 : *+ % 单 酶 切 L  EN HR + < F /

室温作用 $ KB 1洗 ! 次加 /] 标记的羊抗兔 C 04 荧光二抗& p 稀释  室温作用 & K 再经 B 1 $=% C

BE" 29-@ - !#T/7- 4943 5 .- B 7 ( J 3 *7 F*0 2F *0 ] B 6
b@ .&= %%% bH L &U/J) / OI J O f: : *+%8 L  EN HR + < TNR F N /

''' #!%(

水'产'学'报

!" 卷

$" 重组子 , *@ 2] B V ? 的构建 $# X .-6 ( J D

$" 重组杆状病毒的获得及鉴定 %#

用重组转移载体 U/J) / 转 化 @ &%C P HR + < F 2 H 细胞通过蓝白斑筛选得到重组子 LHGOF + < CP I ) /
CP I ) / ,  * A 提取 LHGOF + < @ - 用通用引物 B 4 b&!

重组子 LHG OF + < @ -通过脂质体介导 CP I ) / , 转染 J 细胞 经 ! 轮感染后 获得高滴度的重组 Z >
. 杆状病毒取 $%% $ 含重组杆状病毒的培养液 提取重组杆状病毒基因组经通用引物 B 4A * b&!

扩增出了约 $ #%% ff 的目的条带以野生型杆状病
HGO , 毒 C P I @ -作对照扩增出了 !%% fU 的片段 HR + < F 与预 期 相 符 表 明 U/J) / 载 体 与 野 生 型 C P I 成功发生转座将目的基因 4 5 ) / 正 HGO 4 +<

扩增出了约 $ #%% fU 的片段 证明正确获得了重
4) / 组杆状病毒  图 !  将该病毒命名为 - F + < 4) / Z > 用获得的 - F + < 感染 J 细胞 #$ K 后可以看

确的整合到了杆状病毒基因组上 图 $

到细胞有明显的病变  如图中箭头所示   病变 的细胞变圆变大有许多细胞裂解 图 " 

X .-6 ( J D ' 图 $#重组子 , *@ 2] B V ?& (鉴定
b@ = %%% bH L &LHG OF + < B +产 物 $ 野生型 . L  EN CP I ) / 4 C P I B +产物 HG O 4

'] B ' 图 %#重组杆状病毒 ? 6 ( J 的 & (鉴定
b@ = %%% bH L &$- F + < B +产物 . L  EN 4) / 4

BE" 29-@ - $#T/7- 4943 X .-6 ( J + & ( 3 *7 , *@ 2] B ; '
b@ = %%% bH L &B +H U7I R UL R LHG OF . L  EN 4 G IP I Z H6Q 6O9P 6Z C P I ) / $B +H U7I R UL R i7 R fHG O8 + < 4 G IP 6Q 6O9P 6Z I :UN P I ZH O

BE" 29-@ - %#T/7- 4943 ' ] B + & ( 3 *7 ? 6( J ; '
b@ = %%% bH L &$ B + H U7I R UL R . L  EN 4 G IP I Z H6Q 6O9P 6Z- F 4 )/ + <8

'] B  图 <#? 6 ( J 感染昆虫细胞后与正常细胞的对照<__ `
未被 - F + < 感染的昆虫细胞 C 4) / 感染 - F + < #$ K 后的昆虫细胞 4) /

BE" - <#' 4.F *, 4943 99/7 /0 2-3 7 /0 ; ? 6 ( J <__ ` 0 1 -3 / 5 *9 9/ / 5 + ' ] B @ 2@ 5 @ 2@ 5 
- QI NR J P7 C Z P7 I NR f: - F + <8 * QZ N Z NJ 1> NJQZ N PO > 7 7 PO 4) /

$" 重组杆状病毒超薄切片观察 <# - F + < 感染 J 细胞后经超薄切片 电子 4) / Z >

属于多粒包埋型在感染的细胞核中复制 从图 = 中可以看到 如图中箭头所示大量的杆状病毒在
J 细胞核中复制并且每个囊膜包裹着多个病毒 Z >

显微镜观察 本研究所使用的杆状病毒表达载体

#期

+< 黄锋涛等斑点叉尾 病毒囊膜蛋白 ) / 在昆虫细胞中的表达

'' #!%)

粒子 说 明 成 功 地 获 得 了 大 量 的 重 组 杆 状 病 毒
- F + < 4) /

$" 表达产物的间接免疫荧光检测 I#

用收集的第三代重组杆状病毒 - F + < 感 4) / 染 J 细胞 #$ K 后进行间接免荧光试验同时以 Z >
PB  Z > 野生型杆状病毒  - , 5 感染的 J 细胞作对

照结果显示 感染 - F + < 的细胞呈现出强的 4) / 绿色荧光  如图 < 中箭头所示   而感染野生型杆 状病毒 的 细 胞 只 有 很 弱 背 景 荧 光  图 <   说 明
) / 基因在 J 细胞中得到了表达 +< Z > $" 表达产物的 ^/7 9+479 J# 0 ,65 7 E / -

收集经第三代重组杆状病毒 - F+ < 感染 #$ 4) /
K 后病变的细胞经 1 1B W 电泳后转醋酸纤维 @ F- 3 J L 6R RQF I QT 薄膜经 oN N f7R 分析结果可以看到约 &< E9 处有一条带略大于目的蛋白 &"8 E9 的理论值 <

而在野生型杆状病毒- , 5 感染的 J 细胞和正 PB  Z >
'] B 3 a 图 I#? 6 ( J 感染 0 细胞电镜观察 BE" - I#H/7 5 , @ 49.- 404F@*9 ;0 43 @ @ - *5 , 0 ? 6 ( J -3 7 ' ] B 9/ @ 4943 3 @5 0 /0 a 5

常 J 细胞作对照组此处无特异性的带证明目的 Z > 蛋白成功的在昆虫细胞中得到表达 图 #

' (J  图 J#间接免疫荧光检测 ' G] B 在昆虫细胞中的表达<__ `
感染 - F + < #$ K 后的昆虫细胞 C 4) / 被野生型杆状病毒感染的昆虫细胞

BE" - J#' G] B F47 9N , / @ 2+ -2,@ - 9 54,0/@ 0 - 3 @5<__ ` ' ( J , / //27 7 ; 9 - 7..1 43 /@9/*0 90 /0 // / 1 *; a 5 
- Z P7 I NR f: - F + < C Z P7 I NR f: i7 R fH97 L 8 J NJQZ N > 7 PO 4) / J NJQZ N > 7 PO I :UN P 6gI O 9J

!'讨论
本研究利用杆状病毒表达系统成功构建了重 组杆状病毒 - F + < 并表达了 4 5 ) / 蛋 4) / 4 +< 白通过电镜观察 可以看到杆状病毒呈多粒包
0 ,65 7 E / ' (J 图 \#^/7 9+479 分析 ' G] B
在昆虫细胞中的表达
&- F + < 感染的昆虫细胞 $野生杆状病毒感染的昆虫细 4) / 胞 !正常昆虫细胞

埋并且在细胞核中大量的复制 同时通过间接 免疫荧光和 oNR QF 6RQT 检测到了目的蛋白 J L f7 R N I
4 质 说明 获 得 了 重 组 杆 状 病 毒 并 且 4 5 的 ) / 蛋白实现了在昆虫细胞中的表达 +<

BE" 29-@ - \#T/7- 4943 ' 3 *7 ' G] B F47 9 (J ,/ + ^/7 9+479 - 3 @5 ; 0 ,65 7 E 90 /0 / a 5
&I NR J P7 QZ N Z NJf: - F + < $I NR J P7 PO > 7 4) / QZ N Z NJf: i7 PO > 7 I O R :UNfH97 L  !9QI NR J P78 P 6gI 9J QZ N Z NJ PO > 7

在进 行 oNRQF 6RQT 试 验 时 我 们 发 现 J L f7 R N I
) / 表达蛋白的实际大小约为 &< E9 比理论值 +< &"8 E9 略大这可能是由于蛋白质糖基化造成的 <

''' #!%*

水'产'学'报

!" 卷 ""# $=$= ; =!!8

因为杆状病毒表达系统!可以对表达的蛋白同时进 行 , 和 ) 两种糖基化*#+ ) 同时!我们也发现利用 F F 该表达系统所表达的蛋白质含量并不高!以至于在
1 1B W 电泳后的胶通过考马斯亮蓝染色并不 @ F- 3

* $ +'W H o . 7H J !( OH +. + 8 N P6Q L : !oII +( 6L Q 7G !0 '&@ R R NI 6ZP QQN H I gI KH 7PRJ L ZK 9J@ - I 7N 7 I NR , Q H QR QZ N R : PO PRJ (8 W Q 5L !&>>>!?%"## $&?&# ; HI + ( N I ZK* 67 &?$$8 * ! +'刘玉林!王敏!王卫民8 斑点叉尾 病毒性疾病综述 * (8 + 水利渔业!$%%<!$<"<# $?" ; ><8 * " +'孟彦!肖汉兵!曾令兵8 斑点叉尾 病毒病研究概述 * (8 + 淡水渔业!$%%#!!#"=# $#$ ; #=8 * = +'2 \4 H j 9 !\ 6 !o9 ]\ C P 6gI H H N N I 8 H97 L J Q VUL J 9J J6Q H A ONgN gN P Z gHP H I QJ +8VUN QO 6L 7 L KIN 6L PI QR *( 3 L I : 7 QN TN R !#&8 + g 5 PI J N HP !$%%?!#"!#$!<! ; QN * < +', fH j3 1 I C / @ 0 N N ! 0 '& 9J 9G ! GR K ! N QQ6PQR JB + 8 B6R R G 9QI I N f: @ - gHP R 6Z LN I PgNI G R QO9PO : , PI I QH6Q P QQN PRJ iR NL H 7NR QJL J6Z KN KH 7 H I I H : QO H L P UR R ZK K 7 R H I 2 F + N P QQN H I KN J L KH 7PRJ ZK L gI UN 9J" 0 5& # * ( 85 R 0G G 9Q67 0 G G 9Q6UH ! $%%$! ?" " ! ; " # $ R K67 &=& ; &<?8 * # +'张鹏飞!1 I ( L FN H 8 G R !bH 9J E9L 4 杆状病毒系统表 K P 1 C TU!=% 片段 * ( 8 + 达信号肽序列依赖糖基化的 3 5
中华 微 生 物 学 和 免 疫 学 杂 志! &>>=! &= " ! # $

能观察到明显的目的蛋白带) &>>? 年!j 9ER 9P H J
4 + => 等*?+ 利用杆状病毒表达系统表达 4 5 ) / 蛋

白时!也发现目的蛋白质的表达量不高) 我们推测
Z > 这可能与 J 细胞密码子偏爱性有关!可以通过基

因的密码子优化来提高表达产量*>+ ) 斑点叉尾 适应范围广! 易饲养! 味道鲜美! 是一种优良的养殖品种) 为防治 4 5 国外早在 4 !
4 上个世纪就有了关于 4 5 疫苗的研究) 先后有 4 5基因缺失疫苗( 弱毒疫苗和 @ - 疫苗的研 4 ,

究报道

*<!&% ; &&+

) 自上个世纪 ?% 年代我国首次引

进斑点叉尾

以来!其养殖面积迅速扩大!并成为

我国出 口 创 汇 的 重 要 鱼 类 品 种 之 一! 但 我 国 在
4 5疫苗的研究尚处于起步阶段) 尽管我国尚 4

无 4 5 流 行 爆 发 的 正 式 报 道! 但 近 年 来 已 有 4
4 5 疑 似 疫 情 发 生! 并 造 成 了 巨 大 经 济 损 4

$&% ; $&!8 * ? +'j 9ER 2 CH \ ( ] 9Q 1 7 QT H 9P H ! L J O: ! 9S 846QI QO N NJ 6Z VUL I J 6Q HU9RI T7 6UL N TN 6Z KH 7 HgN :P 6RQ QN P QQN R I PRJ gI HI ZK L 9J9J fH97 L N NJ J R I QT P 6gI 9J VUL I :J G J 6Q N * (8 I- R L Q!&>>?!!""!# $$!& ; + @J c9H ) TH $!#8 * > +'宋敬东!王健伟!王敏! 等8 昆虫细胞偏爱密码子优 B &<. 化的 2 5 & 基因在昆虫和哺乳动物细胞中的 + 中 表达 * ( 8 国 病 原 生 物 学 杂 志! $%%#! $ " " # $ $"# ; $=&8 *&%+ '5 QON I Q , -H B . P R ! 0 '& KN H L D KNON ! 7 O ! N6G N4 + 8] L HN R 5 RQ9H O R N <% JH 6Z P QQN PRJ gI RI LQ KH 7 H I ZK L 9J U6J J J H ON R I ) / P QT Z H JJ NN 7I Q N6Q + =% 6OI 6L U6R I7 JP R T7 6UL N (8 I 6T:!&>><! N H: NL N :P 6RQ* + 5L QR7 NO I 67 $&?"$# $"$$ ; "$<8 *&&+ '2 L R !BH jB K9QN 8 , H 7 f6RN2 7 QR !] +. @ -gHP R PI I QH6Q H I RP QQN H I gI L 97 I G QI H TH QJ KH 7PRJ L N R Q ZK 9J J J IG 7 IG G 9QN L U6QJ H I Q6RN I P N J N QO J ZP I H I R Z H 69J TH QJ P 7QTN ( 8 69L 76Z- R QI H N7 KHN * + ( QH 7 c9HP- G 72 HK! I R $%%=!&#"!# $$=& ; $<$8 *&$+ '. \b! \ ! 4 6 1 C 0 '&0 G SR iR I N( H ! + 8 G 9QI I H6Q I K UJ9O6R N :UNfH97 L VUL J N 7 P 6gI 9JN N I QgN J QT 6UNUL N 6RQ I 6Z (UH J N N 7I gI NPJ UL NR H QNN QPUKHR IJ L 9J 7I IR 6R I PgN N OIQN I I G R I G P * ( 8 69L 76ZW QNbN P ! G 9QI Q I : N + ( QH $%%>!&&"&# $&=% ; &=>8 *&!+ 'l lW I 2 (C P 6gI J Z NOI H 6Z $ 9 !.9 8 H97 L 9L P J : 9J H U7 3 N 7 QgN 6UNT7 6UL N 6ZP J P7 iQNZ LgI :P 6RQ I 7JH JI N HI gN L 9J H IG QO G 9Q6TN P: 6ZR QIR I KNOI H O UL N Q H J :N 6RQJI U7 I G N G 7* ( 85 PI ! $%%?! $< " "! # $ 69J 6ON + HP QN

失 *! ;"+ !因此!研制 4 5疫苗!对于保障斑点叉尾 4 的健康养殖迫在眉睫) 目前杆状病毒表达系统以独特的优点在哺乳 动物疫苗研究中展示了十分广阔的应用前景) 迄 今为止!杆状病毒表达载体系统已应用到多种疫 苗研究中! 尤以病毒疫苗为多! 包括针对乙脑病 毒(猪瘟病毒(口蹄疫病毒( 猪圆环病毒等多种病 毒的疫苗!其中针对猪瘟病毒的亚单位疫苗已被 批准进行商品化生产! 针对猪圆环病毒二型的疫 苗已通过加拿大食品监督部门评估 *&$ ;&=+ ) 同样! 近年来!人们也已把杆状病毒载体用于鱼类疫苗 的研究) 目前!已有报道利用杆状病毒载体表达 的传染性造血器官坏死症病毒 " 0 , # 糖蛋白在 2 5 浸泡条件下能够诱发极小鱼苗的保护性免疫反 应 *&<+ !罗卫等 *&#+ 在 1> 细胞中成功的表达了病毒 Z 性神经坏死病毒 " 5 , # 的衣壳蛋白! 其具有良 , 5 好的免疫学活性) 这些研究表明! 利用杆状病毒 表达系统研制鱼类疫苗将可能是鱼类疫苗创制的 一个新领域) 本研究利用杆状病毒表达系统成功 的表达了 4 5 ) / 蛋白! 从而为制备 4 5 新 4 +< 4 型疫苗奠定了基础) 参考文献
* & +'o67j @ LQTR + o8 KH 7PRJ gI $ H Z ! H I 6Q 7 4 QQN H I ZK L 9J QN L J L 6ZP 7 I ZK* (8 5L !&>#&!? iKN gI UN 9J IH O I + ( I R9L J 67

#期 ="== ; ="<%8

+< 黄锋涛!等$斑点叉尾 病毒囊膜蛋白 ) / 在昆虫细胞中的表达

'' #!%"

H I QJ ( 8 VUN N N 6Z5 PI J $%%?! # QR * + 3 L gI TN R+ i HP ! QN "!# $!<! ; !#&8 *&<+ '袁野!王秀利!郭设平8 鱼用基因工程疫苗载体的 + 生物技术通报!$%%?!=$!& ; !"8 研究进展* (8 *&#+ '罗卫!田飞炎!刘荭!等8 鱼类病毒性神经坏死病毒 + 水产 衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其特性 * ( 8 <=<8 学报!$%%?!!$""# $<=& ;

*&"+ '] G 4 N 7 !C L N + 0 '&0 G H I !BL R HH- H L ! + 8G 9Q67 P7 fI I 6TI H UL LN 6Z/ 5 TB Z I UL N 6UN I RJ b@ F <" 9J 6Q 6RQJN NJO I VUL N J 6Q 1 > P7 H fH97 L 9L PJ ( 8 HP ! / N QO P 6gI 7 9JJ Z N* + 5 PI H QN $%%"!$!"<# $?"% ; ?"=8 *&=+ '\ 4 Q 2 9Q \ S \ Q o8 H97 L J 9FKN !j !] 6QTF 9H C P 6gI 9JH H N NJ H A Q VUL I QO 6LONgN gN P 6LgHP J 6Q 7 L KINZ I : 7 PI QN

H ,0 4943 K 95 *70 ,0 ( J E//- 9/7 /0 OF/0 @*9 / @ 3K:- ] B 9 9-0@ @5 1 5
2 - W/QTF 6& ! l ) W2 II ! 4 )1 QTF $ ! l ) W4 QF & ! * , N R H 0, H7& FQ - KN f6 0 , K9H VI o- WbI ! o- WoN G Q& ! o*CQT& ! .*\ 7 & ! .*l F Q& , Q& , I I F I 0 9FQ I 0 9NcI
"&! # "$%&'( C . * &0 7.&0 # *4 ) 9. &79 3- 95/( ( 6 74$( 8 &*7! + 2)50 / 5) C E A7#/ # 72 .!1 # #) *7 + . * + 95/ . ( . ) ( : 02# + . )4 5&I 72 C . * &0 7. )* 5@&7'"!%%#%!: 7&% (# ( L4 .!< @( 2)50 0 @## / 5) = > 4$ # .!U @. $! (# ( Q*. $6 9.7# 5&I 72 C . * &0 7. )* 5@&7'"!%%#%!: 7&# : 02# + # ) 0 #7&) # / !< @( 2)50 . / 5) = > 4$ # .!U @.

? 0 *@$ 4 QQN H I gI " 4 5# I +7 7 KH 7PRJ L , ZK 9J 4 JHUH R Q 6ZP QQN H I ] JgI H P9J N L K6TN KH 7PRJ KI L ZK8 9JPQ H NJgN N KN 6L TI JHNI :69QT P QQN H I H P9J H 6J JR ZK Z G L G L POI J Q KH N KH 7PRJ QO H NG D ZK 6L7 J 6 I H N 8 JQ6 N I P N J L J ZP I Z H 69J R H N N J !HgHP TH R 4 I NJQR76L N QR H P L 6ZKI OI HN+ PQR KN L R QR VIJ NG R PI QNH I 4 5 J J I Z UL I QO 6QR QJ N H gN 6Q 67 R J J J8 NN 7 N :!R fH97 L H JL O H Q HL R TN ONgN gN P H H U6R I P 6gI 9Ji JONP fN JH RH I I R PgN QN 7 L KIN QO I : 7 N H P QR7gNR 6LgHP 6LZ PI QN ON 7 N 8Q 6L L6 N NJ KNG G H gN 6UG QR0 ON R VUL R N fL J QNUL N 6ZKN4 5 ) / TN Q I NR NJ + < TN 6RQ I R 4 + < QNI QJP P7!) / QN 7 i JJ 7 O I 6 fH97 L L Z gNR " U/J H] & # 8 KNL 6G QH U7 G O U/J) / i J H 9fP 6QN QR P 6gI 9JR QJ L P H N 6L HR Pb C ] N fI QR H I HR + < H P J F I QRI f: L RP6Q N :G ON IN ZO N LR JII QS NOI J6Q H TN N QP @ &%C PP H QT fH97 L K9RL TNR I QO QNJc9N I QT8 2 H 6QRQI I P 6gI 9JJ R N gNR " fHG O# H KN L P i JL Z G O iR L 6G QH U7 G O U/J) / ] L 6G QH P 6L P I QO 7 gNR H R QJ N I N fI QR H I HR + <8 KN N fI QR UN 6L H 6L K P J F P H I QRI ZO 9Ni R 7 R QO 4 QH J KN KNLHG OF + < NJ N I :J 8 fHG O" LHG OF + <# i JON IN f: f7 A KI N P6Q H B +H 7 I ] Q R C P I ) / P I CP I ) / i J L Z R I 6 J P7 iR 4 7NR + H QR QO L 6G QH fH97 L i J H O I J P7! H R QJ P O QR Z NJ I NZ I NTN H N fI QR P 6gI H NN > 7 K 7 PQ P 9J H 6fRQN Q Z NJ I > 7 QH N - F + <8 4) / i J 97U7 Q9P 6U67 OL L i P i J N O f: N P 6Q G P P G O 4) / - F + < H G R N 7 :KN 6gI I F N 9J KI H 6fJL K gN 7R N L I 6J6U: L I R R KI JP6Q 6ZQZ R J P78 Z L 4) / I NR KNL 6G QH 4 5) / UL N Q KN97HR Q NR L I I N N Z NJ- R - F + < QZ I PO > 7 N P6Q!R N fI QR 4 + < 6RQ P I i J KH P L N f: I L RG 9Q6Z NPQP HJ: H oNR QF 6RQT8 KN N97 J N R R + < H P L RI O H NS QOI P I G N 7 JN N J QO 96L H J L f7 R ] L R K6i O KH ) / N I J J UL N i J VUL JO I J P7 H KH H 67 97 G J 6Z E98 KIJ i7UL ON N fHIZ 6RQ H N N N Q Z NJ QO O G N H HJ &< I J > 7 P L ] JR 9O: I 6gI 9JZ J 6L 7 97 J R 9f9QI4 5gHP KNJ R4 PI QNON 7 N I R 9R N gN 6UG QRQ KNZ 9L8 M ; N 2$ P QQN PRJ gI % ) / UL N fH97 L % I NR NJ N NJ / 4,0 KH 7 H I L ZK 9J + < 6RQ% P 6gI I 9J QJP P7% VUL I 7 J6Q ' ,049 -E *1K $ .*l F Q8 F H$V9N Q7 4,/F 29 74, 0 9NcI 3G I 7 cI I 9MG I KS98O98Q H8 H N P 7


相关文章:
更多相关标签: