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ACQUITY UPLC系统央速入门指南


ACQUITY UPLC 系统
快速入门指南
715030825MD/ 修订版 C

版权所有 ? Waters Corporation 2006。 保留所有权利。

版权声明
? 2004?06 WATERS CORPORATION。在美国和爱尔兰印刷。保留所有权利。未经出 版商的书面允许,不得以任何形式转

载本文档或其中的任何部分。 本文档中的信息如有更改,恕不另行通知,不应认为是 Waters Corporation 的义务。 Waters Corporation 对本文档中可能出现的任何错误不负任何责任。本文档在出版时被认 为是完整并且准确的。任何情况下,对与使用本文档有关或因使用本文档而导致的偶发或 继发的损害, Waters Corporation 不负任何责任。 Waters Corporation 34 Maple Street Milford, MA 01757 USA

商标
Millennium 和 Waters 是注册商标,ACQUITY UPLC、eCord、Empower、MassLynx 和 nanoACQUITY UPLC 是 Waters Corporation 的商标。 PharMed 是 Saint-Gobain Ceramics & Plastics, Inc. 的注册商标。 Windows 是 Microsoft Corporation 的注册商标。 其它商标或注册商标均为其各自所有者的专有资产。

客户评价
Waters 的技术交流部门恳请您告诉我们您在该文档中所遇到的任何错误或向我们提出改进 建议。请协助我们了解您最希望从文档中获得什么内容,让我们可以不断改进其准确性及 可用性。 我们会认真对待收到的每条客户意见。您可以通过 tech_comm@waters.com 与我们联系。 Waters Corporation 34 Maple Street Milford, MA 01757 USA

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安全注意事项
用于 Waters 仪器的某些试剂和样品可能会产生化学、生物和放射性危险。务必了解您使 用的所有物质的潜在危险。始终遵守美国食品及药物管理局出版的 “优良实验室规范” (GLP) 指导原则,并咨询所在组织的安全代表。 开发方法时,请遵照 “American Journal of Medical Technology (美国医疗科技期刊) ” (1978) 44 卷第 1 期 30–37 页上的 “Protocol for the Adoption of Analytical Methods in the Clinical Chemistry Laboratory” 。此协议包含实现系统性能和方法性能所需的完善操作步骤 和方法。
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安全忠告
请参阅 Waters ACQUITY UPLC 系统操作员指南的附录 A 以查看警告和注意事项综合 列表。

操作 ACQUITY UPLC 系统
操作 ACQUITY UPLC 系统时,请遵照标准质量控制程序和本部分介绍的指导原则。

符号
符号 定义
欧盟授权代表。

EC REP

CE 符号确认某产品符合所有对其适用的 欧盟指令。

IVD

供体外诊断使用。

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设计用途
Waters? ACQUITY UPLC? 系统适用于分析混合物并将分离的样品引入质谱仪。 开发方法时,请遵照 “American Journal of Medical Technology (美国医疗科技期刊) ” (1978) 44 卷第 1 期 30–37 页上的 “Protocol for the Adoption of Analytical Methods in the Clinical Chemistry Laboratory” 。此协议包含实现系统性能和方法性能所需的完善操作步骤 和方法。 根据欧盟体外诊断设备指令 98/79/EC, ACQUITY UPLC 系统获得了 CE 认证。

警告:ACQUITY UPLC 系统仅供经过培训、有资格的实验室人员用于体外 诊断。

校正
要校正 UPLC 系统,请遵照可接受的使用至少五个标准样生成标准曲线的校正方法。标准 样的浓度范围应覆盖质量控制样本、典型标本和非典型标本的全部范围。 要校正质谱仪,请参阅正在校正的仪器的操作员指南的校正部分。

质量控制
定期运行三个质量控制样本,分别代表正常水平以下、正常水平和正常水平以上的化合 物。确保质量控制样本的结果在允许范围内,并在每天、每次测试时都评估其精确度。质 量控制样本的结果超出范围时搜集的数据可能无效。在您确定仪器的运行状态令人满意之 前,请勿报告这些数据。 分析来自复杂基质 (如土壤、组织、血清/血浆、全血等)的样品时,请注意基质组分可能 对 LC/MS 结果产生不良影响、增强或抑制离子化。为将此类基质效应降至最低, Waters 建议采用以下措施: ? ? ? 进行仪器分析之前,通过适当的样品预处理 (例如蛋白质沉淀、液/液萃取 (LLE) 或固相萃取)消除基质干扰。 尽可能使用与基质一致的校正液和质量控制样品校验方法的准确性和精确度。 使用一种或多种内标化合物,最好是同位素标记的分析物。

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IVD 授权代表信息
IVD 授权代表
Waters Corporation(Micromass UK Limited)已在 Market Towers, 1 Nine Elms Lane, London, SW8 5NQ 的英国药物及保健产品管理局(MHRA) 注册。 参考号为 IVD000167。 Waters Corporation(Micromass UK Ltd.) Floats Road Wythenshawe Manchester M23 9LZ United Kingdom 电话: 传真: 联系人: +44-161-946-2400 +44-161-946-2480 质量经理

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目录
安全注意事项 ............................................................................................................. iv
安全忠告 ........................................................................................................................... iv

操作 ACQUITY UPLC 系统 ........................................................................................ iv
符号................................................................................................................................... 设计用途 ............................................................................................................................ 校正.................................................................................................................................... 质量控制 ............................................................................................................................ iv v v v

IVD 授权代表信息 ...................................................................................................... vi
IVD 授权代表 ................................................................................................................... vi

1 系统概述 ................................................................................................................. 1-1 仪器、组件和数据系统 ........................................................................................... 1-2 二元溶剂管理器 ...................................................................................................... 1-4
二元溶剂管理器工作原理 ................................................................................................ 1-5

样品管理器 ............................................................................................................. 1-6
样品流动方式 .................................................................................................................. 1-6

色谱柱加热器 ......................................................................................................... 1-7 可选样品组织器 ...................................................................................................... 1-8 光学检测器 ............................................................................................................. 1-9
TUV 检测器 .................................................................................................................... PDA 检测器 .................................................................................................................... ELS 检测器 ..................................................................................................................... 中值基线过滤器............................................................................................................... 1-9 1-9 1-9 1-9

数据系统 ............................................................................................................... 1-10
Empower 软件 .............................................................................................................. 1-10 MassLynx 软件 ............................................................................................................ 1-10

色谱柱 ................................................................................................................... 1-11
eCord 色谱柱芯片 ......................................................................................................... 1-11

目录

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FlexCart ............................................................................................................... 1-12 有关详细信息 ....................................................................................................... 1-12 2 准备系统硬件 .......................................................................................................... 2-1 启动系统 ................................................................................................................. 2-2 监视启动测试 ......................................................................................................... 2-2 监测系统仪器 LED ................................................................................................. 2-3
电源 LED........................................................................................................................ 2-3 状态 LED........................................................................................................................ 2-3

准备二元溶剂管理器 ............................................................................................... 2-5
执行密封清洗灌注 ........................................................................................................... 灌注二元溶剂管理器 ....................................................................................................... 灌注干燥的二元溶剂管理器............................................................................................. 灌注湿二元溶剂管理器 .................................................................................................... 选择弱清洗和强清洗溶剂 .............................................................................................. 灌注样品管理器............................................................................................................. 清洗样品管理器针头 ..................................................................................................... 定性针头密封 ................................................................................................................ 定性针头和样品定量环体积........................................................................................... 在样品管理器中加载样品板........................................................................................... 选择最佳样品进样模式 .................................................................................................. 安装样品管理器遮光板 .................................................................................................. 2-5 2-7 2-7 2-9 2-12 2-14 2-15 2-17 2-18 2-19 2-20 2-22

准备样品管理器 .................................................................................................... 2-12

准备样品组织器 .................................................................................................... 2-24
启动通信 ....................................................................................................................... 2-24 加载样品板 .................................................................................................................... 2-25 显示样品板信息............................................................................................................. 2-28

准备检测器 ........................................................................................................... 2-29
准备 TUV 检测器 .......................................................................................................... 2-29

调整色谱柱 ........................................................................................................... 2-32 关闭系统 ............................................................................................................... 2-33
分析之间 ....................................................................................................................... 2-33 关闭不到 72 小时的时间 ............................................................................................... 2-34 关闭 72 小时以上的时间 ............................................................................................... 2-34

viii

目录

3 配置系统软件 .......................................................................................................... 3-1 配置 Empower ....................................................................................................... 3-2
启动 Empower 并登录 .................................................................................................... 选择系统仪器 .................................................................................................................. 关于二元溶剂管理器控制面板 ......................................................................................... 关于样品管理器控制面板 ................................................................................................ 关于 TUV 检测器控制面板 ............................................................................................. 3-2 3-2 3-4 3-6 3-7

从 Empower 启动 ACQUITY UPLC 控制台 .......................................................... 3-9 配置 MassLynx 软件 ........................................................................................... 3-10 从 MassLynx 软件启动 ACQUITY UPLC 控制台 ................................................. 3-11 4 检验系统操作 .......................................................................................................... 4-1 准备系统 ................................................................................................................. 4-2 创建测试方法 ......................................................................................................... 4-4
创建仪器方法 .................................................................................................................. 4-4 创建样品组方法............................................................................................................... 4-8

执行梯度性能测试 .................................................................................................. 4-9

目录

ix

x

目录

1

系统概述
本节介绍 ACQUITY UPLC? 系统的组件和功能。 目录: 主题 仪器、组件和数据系统 二元溶剂管理器 样品管理器 色谱柱加热器 可选样品组织器 光学检测器 数据系统 色谱柱 FlexCart 有关详细信息 页码 1-2 1-4 1-6 1-7 1-8 1-9 1-10 1-11 1-12 1-12

1-1

仪器、组件和数据系统
ACQUITY UPLC 系统包括二元溶剂管理器、 样品管理器、 色谱柱加热器、 检测器 (可调紫 外线、 光电二极管阵列或蒸发光散射) 及专用 ACQUITY UPLC 色谱柱。 将小颗粒化学物质用于 UPLC 系统色谱会产生较窄的峰。 为保持这些窄峰, 必须用较小的检 测池体积、 尽可能小的管路体积和专用的接头来控制额外的频带扩展。 窄峰宽度有时可能需 要更高的数据速率。 TUV、 PDA 和 ELS 检测器每秒最多可采集 80 个数据点。 二元溶剂管理器和进样器产生的压力最高可达 103421 千帕 (1034 巴, 15000 psi) , 并能生 成具有最小梯度延迟的高压梯度。 流量范围的上限为 2 毫升/分钟。 样品管理器可容纳两个微孔板形式的样品板或全高样品板形式的 2 mL 样品瓶。 可选的样品 组织器将系统容量增加到了 22 个微孔板 (样品组织器中 21 个, 样品管理器中一个) 或八个 样品瓶架 (样品组织器中七个, 样品管理器中一个) 。 系统由 Waters Empower? 色谱软件或 MassLynx? 质谱软件控制。
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1-2

系统概述

Waters ACQUITY UPLC 系统

样品组织器 (可选)

溶剂盘 检测器 (可选)

色谱柱加热器 样品管理器

二元溶剂管理器

仪器、组件和数据系统

1-3

二元溶剂管理器
二元溶剂管理器是一个在整个系统中移动溶剂的高压泵。 它以分析流量提供稳定 (无脉冲) 的溶剂流。 二元溶剂管理器在 103421 千帕 (1034 巴, 15000 psi) 的压力下以 1 毫升/分的流 量输送溶剂, 在 62053 千帕 (621 巴, 9000 psi) 的低压力下最高可以 2 毫升/分的流量输送 溶剂。 溶剂管理器可同时抽取两种溶剂。

1-4

系统概述

二元溶剂管理器工作原理
溶剂管理器的两个独立泵系统, A (左) 和B (右) 都包含两个线性驱动传动装置 (左和右) 。 每个左右传动装置对都包含一个单独的往复式 “串行” 泵, 可输送精确流量的单溶剂流。 两 个泵系统在过滤器/T 形混合器中混合它们的两种溶剂。 溶剂混合物从这里流入样品管理器。 色谱软件通过改变泵 A 对泵 B 的相对流量来控制两种溶剂的混合比率。 每个泵头的压力传 感器将压力数据传输到溶剂管理器, 管理器固件在泵循环期间测量泵头压力。 这样, 溶剂管 理器就可独立地预压缩 A 和 B 部分的溶剂, 从而确保一致的溶剂输送, 并将泵引起的检测器 基线干扰降至最低。

二元溶剂管理器

1-5

样品管理器
ACQUITY UPLC 样品管理器将其从微孔板或样品瓶中吸入的样品注入色谱液流。 定位装置 使用探针访问样品位置并从这些位置吸入样品。 在针头溢出预加载模式下, 样品管理器可在 大约 15 秒内执行进样。 第一个进样需要附加的额外时间。 样品管理器可容纳符合 ANSI 标准 (最大高度 = 2.2 英寸, 包括上盖) 的标准底面的样品板, 即 5.03 ±0.02 英寸 × 3.365 ±0.02 英寸。 您可以设定这些样品板和样品瓶架的任意组合, 以 自动进行样品处理。 样品通过前门或可选的样品组织器装入样品管理器, 后者在两台仪器间 往复传输样品。 在 25 °C (77 °F) 或更低的环境温度下, 样品管理器可将样品温度保持在 4 到 40 °C (39.2 到 104 °F) 之间的任何温度。

样品流动方式
在缺省模式下, 需要带针头溢出的不充满定量环, 样品管理器针头滑架移动到特定的孔位置 并从气隙中吸取。 不锈钢刺针穿透孔盖并降至孔中。 样品针头从刺针中露出并伸入样品, 吸 入的样品体积等于指定的进样体积加 3.0 微升 (2.0 微升的预采样体积和 1.0 微升的后采样 体积) 。 样品注射器通过样品针头和进样阀继续抽取样品等分, 直至预采样和样品进样体积 通过进样阀。 启动阀, 将样品定量环切换到装入位置。 样品被推回针头, 进样体积被推进样 品定量环。 样品定量环移动到进样位置, 样品被泵输送到色谱柱。

1-6

系统概述

色谱柱加热器
色谱柱加热器为模块化设计, 其底面积与样品管理器的底面积相同。 因此, 它可以附在样品 管理器顶部并起到该仪器的顶盖的作用。 色谱柱加热器的前室可容纳 4.6 毫米内径 150 毫米 长以内的 Waters 色谱柱。 色谱柱置于 U 型塔盘中, 该塔盘可从任一侧向外旋转以放入色谱 柱。 为减少与死体积相关的扩散并尽量缩短系统仪器间的管路, 塔盘可向外旋转到 0° 和 180° 间 的任意位置。 在 0° (原位) 位置处, 塔盘位于样品管理器正上方并与光学检测器 (位于色谱柱 加热器上方) 相连接。 在 180° (离开) 位置处, 色谱柱加热器可垂入质谱仪 (位于系统右 侧) 。 色谱柱加热器可将柱室加热至高于环境温度 5 °C (9 °F) 和 65 °C (149 °F) 之间的任何温 度。 塔盘上附有一个绝缘的薄膜元件, 它可以减少功耗和提高热稳定性并产生热量。 塔盘内 装有无源色谱柱稳定器, 可减小对环境温度波动的灵敏度并将频带扩展降至最小程度。 色谱柱加热器右侧的插孔可容纳色谱柱的 eCord? 芯片。 eCord 色谱柱芯片存储色谱柱信 息, 这些信息可通过 ACQUITY UPLC 控制台访问。 色谱柱加热器滴盘可捕获任何渗漏, 通过液滴管路将漏液送至样品管理器。

色谱柱加热器

1-7

可选样品组织器
可选的样品组织器可存放并向样品管理器往返传送微量滴定器或样品瓶板, 对其进行自动处 理并可增加处理量。 样品板通过一个大的、 旋开式前门装入 样品组织器的存储架室可容纳选择的 ANSI 样品板。 组织器。 样品架室由样品组织器加热器/冷却器进行热调节, 配以样品管理器加热器/冷却器 将温度控制在 4 和 40 °C (39.2 和 104 °F) 之间。 可在 25 °C (77 °F) 或更低的环境温度下, 样品组织器中有三个配件可以移动样品板 : Z 驱动器、 样品组织器传输滑块 (Y 轴) 和样品管 理器传输滑块 (X 轴) 。 Z 驱动器将 Y 轴移至目标样品架, Y 轴再从该处取出样品板。 然后 Z 驱动器将 Y 轴移至与 X 轴等高度处。 Y 轴将样品板送至 X 轴, 然后 X 轴再将样品板送至样 品管理器进行处理。 样品管理器完成样品板的处理时, Y 轴将其拉回样品组织器。 将样品返 回其所在样品架的过程与此相反。

1-8

系统概述

光学检测器
系统可配置 TUV、 PDA 或 ELS 光学检测器, 或三者的任意组合。

TUV 检测器
TUV (可调紫外线) 光学检测器是为 ACQUITY UPLC 系统设计的双通道、 紫外线/可见光 (UV/Vis) 检测器。 该检测器是系统的主要部分之一, 由 Empower 软件 (对于 LC 应用程 序) 或 MassLynx 软件 (对于 LC/MS 应用程序) 控制。 500 纳升体积、 10 毫米光程长的分析流动池和 2.4 微升、 25 毫 检测器提供两个流动池选项。 米光程长的高灵敏度流动池, 它们都采用 Waters 专利的光导流动池技术。 TUV 检测器的波长操作范围为 190 到 700 纳米。

PDA 检测器
PDA (光电二极管阵列) 光学检测器为紫外线/可见光 (UV/Vis) 分光光度计, 操作范围在 190 和 500 纳米之间。 检测器提供两个流动池选项。 500 纳升体积、 10 毫米光程长的分析流动池和 2.4 微升、 25 毫 米光程长的高灵敏度流动池, 它们都采用 Waters 专利的光导流动池技术。

ELS 检测器
ACQUITY UPLC ELS 检测器是为 ACQUITY UPLC 系统设计的蒸发光散射检测器。 此检 测器可以用 Empower 或 MassLynx 软件控制。 检测器包括一个流式喷雾器, 可用于优化 ACQUITY UPLC 系统性能。

中值基线过滤器
中值基线过滤器用于降低梯度分离对色谱基线的影响。 尽管该过滤器可用于 TUV、 PDA 和 ELS 检测器, 但它更适合于在吸光度检测器中使用。 中值基线过滤器通过降低其曲率使积分 方法的开发更加容易, 从而提高吸光度检测器的稳定性。 另请参阅 : ACQUITY UPLC 控制台在线帮助。

光学检测器

1-9

数据系统
该系统可在 Empower 或 MassLynx 软件控制下运行。

Empower 软件
Empower 具有基于图标和图形的用户界面, 可用于采集、 处理、 管理、 报告和存储色谱数 ? 允许同时打开多个窗口。 使 据。 它支持 Windows 2000 和 Windows XP 及其多任务操作, 用 Windows 多任务处理, 可在 Empower 生成先前采集数据的汇总结果或微调先前进样的 积分参数时查看实时数据采集。 Empower 的基本版本支持 TUV、 PDA 和 ELS 检测器及单四极杆质谱仪的数据。 ACQUITY UPLC 系统用户的常用软件选项包括 “系统适应性” 、 “化学结构” 和 “方法验 证管理器” 。 另请参阅 : Empower 软件入门指南。

MassLynx 软件
MassLynx 为高性能质谱应用程序, 用于采集、 分析、 管理和分布 UV 及质谱数据。 它提供 了智能仪器控制, 可以采集额定质谱、 完全质谱、 MS/MS 和完全质谱 MS/MS 数据。 另请参阅 : MassLynx 入门指南。

1-10

系统概述

色谱柱
ACQUITY UPLC 色谱柱由 1.7-?m 桥接乙烯基硅氧烷混合颗粒装填, 可在机械高压环境下 工作。 色谱柱硬件和配备的输出管路能承受的最大压力为 103421 千帕 (1034 巴, 15000 psi) 。 色谱柱尺寸可提供适于 MS 的最佳流量, 配备的输出管路可将柱外体积的影响降至最 低。 尽管系统可使用任何分析性 HPLC 色谱柱, 但专门设计的 ACQUITY UPLC 色谱柱可充分 发挥其高压性能。 与传统 HPLC 色谱柱相比, ACQUITY UPLC 色谱柱能在相同运行时间内达到最优的分离 度和灵敏度, 或实现同等分离度、 更高的灵敏度和更快的运行时间。

eCord 色谱柱芯片
ACQUITY UPLC 色谱柱包括一个 eCord 色谱柱芯片, 它可跟踪色谱柱的使用历史。 eCord 色谱柱芯片与系统软件交互, 最多可记录色谱柱上运行的 50 个样品队列。 在受法规约束的 环境中, eCord 色谱柱芯片可提供检验方法中使用的色谱柱的文档记录。 除了变化的色谱柱使用数据外, eCord 色谱柱芯片还存储固定的色谱柱生产数据, 包括以下 内容 : ? ? ? 色谱柱唯一标识 分析证书 质检测试数据

eCord 色谱柱芯片与色谱柱加热器上的插孔连接后, 系统会自动记录信息。 不需要用户操 作。 此信息存储在 Empower 数据库以外。

色谱柱

1-11

FlexCart
可选的 FlexCart 为 ACQUITY UPLC 系统提供了一个移动平台。 它承载系统仪器及 PC 和 监视器, 并为系统仪器和集成废液管理装置提供电源插座。 由质谱仪一起使用时, 车的可调 高度可以将色谱柱出口置于接近入口探针的位置, 从而将系统死体积降至最小。

有关详细信息
另请参阅 : ? ? Waters ACQUITY UPLC 系统操作员指南 (部件号 715020825MD) ACQUITY UPLC 系统书架 (部件号 715210825MD) ? ACQUITY UPLC Photodiode Array Detector Getting Started Guide (部件号 71500108703) ? ACQUITY UPLC Evaporative Light Scattering Detector Getting Started Guide (部件号 71500109303) ACQUITY UPLC 控制台在线帮助 ACQUITY UPLC 系统发行说明 ACQUITY UPLC 系统书架 CD 上的 Controlling Contamination in LC/MS Systems (部件号 715001307)

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1-12

系统概述

2

准备系统硬件

目录: 主题 启动系统 监视启动测试 监测系统仪器 LED 准备二元溶剂管理器 准备样品管理器 准备样品组织器 准备检测器 调整色谱柱 关闭系统 页码 2-2 2-2 2-3 2-5 2-12 2-24 2-29 2-32 2-33

2-1

启动系统
启动系统需要单独启动每个系统仪器, 以及 ACQUITY UPLC 系统工作站和 Empower 或 MassLynx 操作软件。 1. 按下位于每个仪器门左上部的电源开关。 每个系统仪器都会嘟嘟响三声, 并运行一系 列的启动测试。 电源和状态 LED 将进行如下变化 : ? ? 每个系统仪器的电源 LED 显示平稳绿色。 二元溶剂管理器的流量 LED、 样品 管理器的运行 LED 和检测器的灯 LED 都会在几秒钟内显示红色。 初始化期间, 每个系统仪器的电源 LED 显示平稳绿色。 二元溶剂管理器的流量 LED、 样品管理器的运行 LED 和检测器的灯 LED 显示闪烁绿色。 系统完全初 始化通常需要大约 7 分钟。 在仪器成功启动后, 每个仪器的电源 LED 会显示平稳绿色。 二元溶剂管理器的 流量 LED 和样品管理器的运行 LED 熄灭。 检测器的灯 LED 显示平稳绿色, 指示灯已点亮。

?

2. 3.

启动 ACQUITY UPLC 系统工作站。 启动 Empower 或 MassLynx 操作软件。 可以监视 ACQUITY UPLC 控制台中是否 有信息和 LED 指示。

监视启动测试
打开 ACQUITY UPLC 系统工作站电源时, 会运行以下启动测试 : ? ? ? ? CPU 板 内存 (RAM 和 ROM) 外部通信系统 (以太网) 时钟

如果启动测试指示故障, 请参阅Waters ACQUITY UPLC 系统操作员指南的第7 章。 .

2-2

准备系统硬件

监测系统仪器 LED
每个仪器上的发光二极管指示仪器的运行状态。 LED 特定于相应的仪器, 因此其各种颜色 和模式的重要性在不同仪器中可能会有所不同。

电源 LED
位于仪器前面板左侧的电源 LED 指示仪器的电源是处于打开还是关闭状态。 打开电源时, 此 LED 为绿色, 关闭电源时则为熄灭状态。 提示:为保证通风充足,样品管理器和样品组织器的风扇将始终处于运行状态,即使电源 关闭时也是如此。只有从仪器后部拔下电源线后,这些风扇才会停止。

状态 LED
流量 LED (溶剂管理器)
流量 LED 位于溶剂管理器前面板上电源 LED 的右侧, 用于指示流量状态。 平稳绿色的流 量 LED 指示正有液流通过溶剂管理器。

运行 LED (样品管理器和样品组织器)
运行 LED 位于样品管理器前面板和样品组织器前面板上电源 LED 的右侧, 用于指示运行 状态。 平稳绿色的运行 LED 指示正在运行进样。

灯 LED (检测器)
灯 LED 位于检测器前面板上电源 LED 的右侧, 用于指示灯状态。 平稳绿色的灯 LED 指示 灯已开启。 状态 LED 指示 LED 模式和颜色 熄灭 说明 溶剂管理器、 样品管理器和样品组织器 – 指示仪器当前处 于空闲状态。 检测器 – 指示检测器灯已熄灭。

监测系统仪器 LED

2-3

状态 LED 指示 (续) LED 模式和颜色 稳定绿色 说明 溶剂管理器 – 指示二元溶剂管理器内的液体处于流动 状态。 样品管理器 – 指示样品管理器在正常运行, 试图完成任何 未完成的样品或诊断请求。 当样品和诊断请求完成后, LED 会恢复熄灭模式。 检测器 – 指示检测器灯已点亮。 样品组织器 – 指示样品组织器在正常运行, 试图完成任何 未完成的样品或诊断请求。 当样品和诊断请求完成后, LED 会恢复熄灭模式。 闪烁绿色 样品管理器 – 指示系统正在等待至少一个仪器转为可运 行状态。 检测器灯预热和色谱柱温度平衡所需时间通常会 造成此类延迟。 检测器 – 指示检测器正在初始化或校正。 闪烁红色 稳定红色 指示错误使仪器停止。 与导致失败的错误有关的信息可以 在 ACQUITY UPLC 控制台中找到。 指示阻止进一步操作的仪器故障。 关闭仪器电源, 然后再 打开电源。 如果 LED 仍为稳定红色, 请联系 Waters 服务 代表。

2-4

准备系统硬件

准备二元溶剂管理器
要获得 ACQUITY UPLC 系统的最佳性能, 则必须要做好溶剂管理器的操作准备。 要进行溶剂管理器的操作准备, 必须执行密封清洗灌注, 然后灌注溶剂管理器。 警告:处理溶剂时, 请遵守实验室安全操作规范。 要了解您所使用溶剂的信息, 参阅 “材料安全数据表” 。 要求 : : 要维持二元溶剂管理器的效率, 并获取准确、 可再现的色谱, 请仅使用MS 级溶剂、 水和添加剂。 有关详细信息, 请参阅Waters ACQUITY UPLC 系统操作员指南。 小心:请勿使用三氯甲烷和二氯甲烷。

执行密封清洗灌注
在二元溶剂管理器中灌注密封清洗以润滑柱塞, 用溶剂填充管路路径, 并冲去溶剂和/或从 活塞室高压侧通过柱塞密封装置剩下的任何沉淀盐。 在以下条件下, 灌注柱塞密封清洗 : ? ? ? 使用缓冲流动相后 二元溶剂管理器已经停用几个小时或更长时间 二元溶剂管理器已干燥 小心:为避免损坏溶剂路径中的电磁阀座和密封,请勿使用不挥发性缓冲剂作为 密封清洗溶剂。 提示:密封清洗将自行灌注,但您可以使用注射器来加速此过程。 规则:为防止污染,请勿循环使用密封清洗。 建议: ? ? 密封清洗应包含 10% 的有机溶剂。 这可防止微生物生长, 并确保密封清洗能溶解流 动相。 灌注柱塞密封前, 请确保密封清洗的量足够进行充分灌注。

另请参阅 : ACQUITY UPLC 系统书架CD 上的Controlling Contamination in LC/MS Systems (部件号715001307) 。

准备二元溶剂管理器

2-5

必备材料
? ? ? 管路配接器 (启动套件) 30 毫升注射器 (启动套件) 密封清洗溶液

要执行密封清洗灌注:
1. 2. 确保密封清洗入口管在溶剂容器中。 从滴盘右侧移除密封清洗出口管。 二元溶剂管理器密封清洗出口管

密封清洗出 口管 滴盘

3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

将注射器柱塞完全推入注射器筒。 将管路配接器与注射器连接, 然后从密封清洗系统将注射器装置与出口管路相连接。 在 ACQUITY UPLC 控制台中, 从系统树选择 “二元溶剂管理器” 。 单击 “控制” > “密封清洗灌注” , 然后单击 “是” 以开始密封清洗灌注过程。 缓慢抽回注射器柱塞, 从系统中抽取密封清洗溶剂。 当密封清洗溶液开始流入注射器且无大气泡时, 断开此管路, 并将其重新安装到滴盘 上的接头。 单击 (停止液流) 以停止灌注过程。

2-6

准备系统硬件

灌注二元溶剂管理器
灌注用于准备要使用的新系统或二元溶剂管理器、 更改容器或溶剂, 以及在系统处于空闲状 态超过四小时后运行系统。 在灌注期间, 排放阀移向 “排放” 位置以同时确保最小背压以及 将液流引入废液。 对于每个正在灌注的泵, 灌注期间的流量为 4 毫升/分。 提示 : 如果要灌注干燥的二元溶剂管理器, 使用注射器可以缩短完成灌注所需的时间。 小心:在从缓冲剂改为高有机物含量的溶剂时,为防止盐在系统中沉淀,请引入 中间溶剂 (如水) 。一定要参考 Waters ACQUITY UPLC 系统操作员指南的溶 剂混溶性表。 建议:确保溶剂容器中有足够的溶剂来进行充分灌注,并且废液容器具有足够的容量容纳 使用过的溶剂。每个泵的灌注流量是 4 毫升/分钟,或总计 8 毫升/分钟。例如,同时灌注 两种溶剂达 5 分钟需要两种溶剂大约各 20 毫升。 警告 : 为避免溢出, 请定期清空废液容器。

灌注干燥的二元溶剂管理器
灌注干燥的二元溶剂管理器:
1. 2. 3. 4. 5. 6. 打开仪器的前门。 找到相应的溶剂排放管。 在 ACQUITY UPLC 控制台中, 从系统树选择 “二元溶剂管理器” 。 在二元溶剂管理器信息窗口中, 单击 “控制” > “灌注 A/B 溶剂” 。 出现 “灌注 A/B 溶 剂” 对话框。 在 “灌注 A/B 溶剂” 对话框中, 选择溶剂 A 和/或 B。 在 “时间” 框中, 指定从 0.1 到 60.0 范围内的分钟数。 缺省值 : 1.0 分钟 建议: 灌注二元溶剂管理器, 直到稳定液流从排放管排出 (通常 7 到 10 分钟) 。 7. 8. 单击 “开始” 。 当溶剂流出排放管而无气泡时, 表明此路径已灌注完毕。 重复步骤 3 到 7 以灌注其它溶剂。 要求 : 要使脱气器正常工作, A1、 A2、 B1 和 B2 容器中必须要有溶剂。

准备二元溶剂管理器

2-7

使用注射器灌注干燥的二元溶剂管理器:
1. 2. 打开仪器的前门。 找到相应的溶剂排放管。 ? ? 如果要灌注溶剂 A, 从排放阀上的端口 4 开始顺着标记为 “A-VENT” 的不锈钢 排放管前行, 并将其提到滴盘外。 如果要灌注溶剂 B, 从排放阀上的端口 1 开始顺着标记为 “B-VENT” 的不锈钢 排放管前行, 并将其提到滴盘外。

二元溶剂管理器排放管

排放阀

滴盘 溶剂排放管

3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

将注射器柱塞完全推入注射器筒。 将管路配接器连接到注射器。 将注射器装置与 PharMed 管路长度较短的一端连接, 然后将 PharMed 管路长度较 短的一端与步骤 2 中所定位的溶剂排放管相连接。 在 ACQUITY UPLC 控制台中, 从系统树选择 “二元溶剂管理器” 。 在二元溶剂管理器信息窗口中, 单击 “控制” > “灌注 A/B 溶剂” 。 出现 “灌注 A/B 溶 剂” 对话框。 在 “灌注 A/B 溶剂” 对话框中, 选择溶剂 A1。 在 “时间” 框中, 指定从 0.1 到 60.0 范围内的分钟数。 缺省值 : 1.0 分钟 建议: 灌注二元溶剂管理器, 直到稳定液流从排放管排出 (通常为 3 分钟) 。

10. 单击 “开始” 。 11. 缓慢抽回注射器柱塞, 从溶剂路径中抽取溶剂。 当溶剂流出排放管而无气泡时, 表明 此路径已灌注完毕。

2-8

准备系统硬件

12. 从排放管中移去注射器, 并将排放管重新连接到滴盘。 13. 对溶剂 A2、 B1 和 B2 重复步骤 6 到 12。 要求: 溶剂 A1、 A2、 B1 和 B2 的容器中必须要有溶剂。 否则, 脱气器将不会正常工 作。

灌注湿二元溶剂管理器
以下两个功能有助于执行系统操作准备。 系统处于空闲状态的时间长度将确定哪一个功能 更好。 ? ? 刷新系统 (系统准备) 启动

刷新系统
系统处于空闲状态一段较短的时间 (几个小时到通宵) 后, 如果打算使用先前所用的相同溶 剂, 则使用 “刷新 (系统准备) ” 功能。 可从控制面板或通过在样品组中将其添加为管路来调用 “系统准备” 功能。 建议 : ? ? 如果系统已处于空闲状态 4 个小时或更长时间, 并且您打算使用系统中已有的溶剂, 则灌注二元溶剂管理器 1 分钟。 如果您打算使用与系统中已有溶剂具有相同成分的新溶剂, 则灌注二元溶剂管理器 4 分钟。

刷新系统:
1. 2. 在 ACQUITY UPLC 控制台中, 单击 “控制” > “刷新系统 (系统准备) ” 。 出现 “刷 新系统 (系统准备) ” 对话框。 查看设置, 如有必要可选择另一选项。 系统将用当前的溶剂选择 (A1 或 A2、 B1 或 B2) 进行灌注。 ? ? ? 3. 仅溶剂管 A (缺省) 仅溶剂管 B A和B

单击 “确定” 。 结果: 系统灌注所选的溶剂、 使用一种弱清洗灌注 (清洗和样品注射器) 灌注样品管 理器并点亮检测器中的灯。

准备二元溶剂管理器

2-9

启动系统
更改流动相后、 更改样品针头和/或样品定量环后, 或者系统已长时间 (通宵或整个周末) 处 于空闲状态后, 使用 “启动” 功能灌注二元溶剂管理器。 开始执行此步骤前, 请确保已正确 配置系统, 以便于使用。 建议: 如果要改用其成分与系统中已有溶剂的成分不同的溶剂, 请灌注二元溶剂管理器 5 分 钟。

启动系统:
1. 2. 在 ACQUITY UPLC 控制台中, 单击 “控制” > “启动” 。 出现 “系统启动” 对话框。 在 “系统启动” 对话框的 “灌注溶剂” 选项卡中, 查看 “A / B 溶剂” 的设置。 在 “A / B 溶剂” 区域中, 可选择或清除任意或所有溶剂 : A1、 A2、 B1 或 B2。 通过在 “灌注持续 时间” 中输入另一数字, 可更改灌注溶剂 A 和 B 的时间长度。 所有所选溶剂的灌注持 续时间均相同。 允许值 : 0.1 到 60.0 分钟 提示: 如果要将设置返回其原始值, 在任意选项卡上单击 “设置缺省值” 。 缺省值 : 溶剂 A1、 A2、 B1 和 B2 各灌注 1.0 分钟。 3. 4. 5. 可以选择或清除密封清洗灌注、 强清洗灌注、 弱清洗灌注和/或样品注射器灌注。 缺省值 : 密封清洗的灌注时间为 1.0 分钟, 弱清洗灌注一次, 样品注射器灌注一次。 通过在 “循环” 字段中输入完全不同的数字, 可更改灌注强清洗的循环次数。 缺省值 : 10 选择 “方法平衡” 选项卡, 查看最终流量、 流动相、 成分、 温度和灯状态的设置。 根据 需要更改这些值, 使其在平衡时满足您的要求。 “方法平衡”选项卡的值 系统启动参数 方法初始流量 A 和 B 的成分 (总和必须为 100%) 柱温 样品温度 缺省状态 1 毫升/分 A1, 100 B1, 0% 关 关 允许值 0.1 到 2.0 毫升/分 A1、 A2;0 到 100% B1、 B2;0 到 100% 关或环境温度以上 5.0 °C (9 °F) 到 65.0 °C (149 °F) 关或 25 °C (77 °F) 环境温度 下为 4.0 到 40.0 °C (39.2 到 104 °F) 开或关

灯 6.



如果更改了样品针头, 请单击 “可选 : 定性体积” 选项卡, 然后选择 “定性密封” 和 “定性针头和定量环体积” 。

2-10

准备系统硬件

7. 8. 9.

如果更改了样品定量环, 在 “可选 : 定性体积” 选项卡中, 选择 “定性针头和定量环体 积” 。 如果针头或定量环的大小不同, 在 “配置” 区域中单击 “更改” 。 在 “体积配置” 对话 框中, 选择定量环和/或针头的新大小, 然后单击 “确定” 。 单击 “开始” 。 结果:光学检测器中的灯点亮, ACQUITY UPLC 系统设置色谱柱样品温度,并且开 始所有灌注。灌注完成后,如果选择了该功能,样品管理器将定性针头密封,然后将 定性结果记录到数据库中。最后,系统将建立方法流量、溶剂选择和成分。方法初始 流量的缺省设置是 100% 溶剂 A1 为 1.000 毫升/分和 0% B1、柱温和样品温度为 “关”且检测器灯已点亮。

准备二元溶剂管理器

2-11

准备样品管理器
在准备好二元溶剂管理器后, 应进行样品管理器的运行准备。 准备样品管理器包含以下步 骤 : ? ? ? ? 灌注 定性密封 定性针头和样品定量环体积 加载样品板 警告:为避免溶剂溢出并保持正常的泄漏排放, 在操作系统前一定要关闭样品 管理器流路托盘。

选择弱清洗和强清洗溶剂
为获得最佳性能, 在选择清洗溶剂时, 请遵照以下指导原则。 否则, 性能可能会降低, 特别 是 “面积/高度 RSD” 和 “线性” 。 但这些原则并不禁止其它所有的溶剂组合。 其它组合可在 用户对预期性能要求较低时运行, 或者通过处理缺省进样参数运行。 使用基于应用程序的样品和流动相化学物质的弱清洗溶剂, 确保所有溶液/缓冲剂都是易混 合和可溶解的。 建议 : 对于缓冲溶液、 反相色谱条件和 MS 应用, 请使用 100% 水或 0 到 25% 甲醇或乙腈 的弱清洗溶剂和 50 到 100% 甲醇或乙腈的强清洗溶剂。 较高的样品浓度可能需要其它弱清 洗溶剂。 如果分离允许, Waters 建议添加少量有机溶剂 (~10%) 以防止微生物生长。

小心:要避免损坏溶剂路径中的电磁阀座和密封,请勿使用不挥发性缓冲剂作为弱 或强清洗溶剂。

2-12

准备系统硬件

提示 : 为获得最佳性能, 弱清洗溶剂应类似或等同于等度或初始梯度溶剂条件 (缓冲剂除 外) 。 请勿在清洗溶剂中使用盐缓冲剂。 清洗溶剂效果 属性 有机物质 效果 作为一项普遍原则, 强溶剂和弱溶剂应该包含相同的有机物 质。 请注意, 这一原则并不总是适用。 然而, 您可使用 100% 有机强清洗溶剂。 弱清洗溶剂应反映与初始梯度流动相尽可能相同的组成。 调整强和弱溶剂的 pH 值以获得最佳峰形和结转性能。 强溶剂浓度不应高于将结转缩减至可接受级别时所需的浓 度。 分析物和样品在强弱两种清洗溶剂中都必须是可溶的。 注意: 蛋白质 (例如, 在等离子体中) 在有机物成分大于 40% 的溶剂中不可溶解。 弱清洗溶剂可与样品接触, 因此应使其达到尽可能接近的匹 配程度。 要补偿由基质成分对峰形造成的不利影响, 请使用 仪器在不充满定量环模式下调整弱清洗溶剂成分。 在方法内, 该比率大约应是 3:1 (弱强清洗之比) , 就足以确 保在采样前弱清洗可将强清洗从针头和样品定量环中冲洗 掉。 较高粘度的清洗溶剂会延长清洗周期。

溶剂成分 pH 强溶剂的浓度 分析物和样品的溶解度

样品稀释剂

冲洗体积比率 (弱强之比)

周期时间

准备样品管理器

2-13

灌注样品管理器
灌注过程将用溶剂填充样品针头、 将新溶剂从进样管冲洗掉和/或清除管路中的空气。 灌注 样品针头和/或样品注射器以完成以下任务 : ? ? ? ? 为新样品管理器做好操作准备 长时间处于空闲状态后, 为样品管理器做好操作准备 更改注射器中的溶剂 清除管路中的气泡

指导原则 : 确保灌注溶剂组成正确, 且质量较高并且易于和系统中使用的任意其它溶剂混 溶。 在所有溶剂容器中使用过滤器, 并确保溶剂量足以用于灌注。 要求 : 在试图定性密封之前, 必须灌注样品管理器。

灌注样品管理器:
1. 在 ACQUITY UPLC 控制台中, 从系统树选择 “样品管理器” 。 样品管理器信息窗口

2-14

准备系统硬件

2.

单击 “控制” > “灌注注射器” 。 或者 : 在 Empower 或 MassLynx 样品管理器控制面板中右键单击, 然后单击 “灌注 注射器” 。

3.

在 “灌注注射器” 对话框中, 选择 “样品注射器” 和 “清洗注射器” 。 规则 : 如果仅要清除样品注射器中的气泡, 而不计划灌注清洗注射器, 则请选择 “仅样品注射器” 。 但是, 通常情况下不要选择此选项。 较好的做法是同时灌注所有 组份。

4.

在 “循环次数” 框中键入灌注次数。 缺省值 : 1 建议 : 在改变溶剂时, Waters 建议灌注 5 到 7 次。

5.

单击 “确定” , 开始灌注。 当系统状态为 “空闲” 时, 灌注即完成。 提示: 每次灌注大约需要 2 到 4 分钟。 小心:请勿中断样品管理器灌注程序。这样可能将强溶剂留在样品针头中, 从而给色谱带来不良影响。

清洗样品管理器针头
清洗针头是一可选步骤, 可将强和/或弱清洗溶剂从针头和进样端口中冲洗掉。 清洗针头可 清除针头、 外部穿刺针头和进样端口内外表面上的杂质。 也可以执行针头清洗以确定通过废 液管路的正确流量, 并确认针头清洗系统已被灌注且运行正常。 规则 : 请勿将缓冲溶剂用作清洗溶剂。 提示 : 灌注系统会清洗样品针头, 因此, 无论何时灌注系统, 均可省略此步骤。

遵守清洗溶剂建议
Waters 建议您遵守清洗针头的以下指导原则 : ? ? 为确保完全去除强清洗溶剂, 在您使用强清洗溶剂后, 系统会用 ?L 的弱清洗溶剂清 洗针头。 缺省值为 500 ?L, 您可以增加但不能减少该值。 分析物和样品基质在强弱两种溶剂中都必须是可溶的。 蛋白质在有机物成分大于 40% 的溶剂中不可溶解。 任何清洗溶剂中均不应使用缓冲剂。 示例 : 如果弱清洗溶剂是 30% 的乙腈和 70% 的水, 则强清洗溶剂应在水中含有更大 的乙腈浓度。 ? ? 弱清洗溶剂应与最初的洗脱溶剂相同, 而强清洗溶剂至少应与最终洗脱溶剂的成分 相同。 根据应用的样品和流动相化学物质使用弱清洗溶剂。 确保所有溶液均易混合且可溶 解。 为获得最佳结果, 弱清洗溶剂应与初始梯度条件和流动相成分 (等度) 匹配。 较 高的样品浓度可能需要额外的弱清洗溶剂。

准备样品管理器

2-15

?

对于缓冲溶液、 反相色谱, 使用含 100% 水或最多 25% 甲醇或乙腈的弱清洗溶剂。 对 于强清洗溶剂, 则使用 50 到 100% 甲醇或乙腈。

在开始之前, 请确保溶剂与应用程序相兼容, 其量充足, 且废液容器要足够地大以容纳废溶 剂。

清洗样品管理器针头:
1. 2. 在 ACQUITY UPLC 控制台中, 从系统树选择 “样品管理器” 。 随即出现样品管理器 信息窗口。 单击 “控制” > “清洗针头” 。 或者: 在 Empower 或 MassLynx 样品管理器控制面板中右键单击, 然后单击 “清洗 针头” 。 出现 “清洗针头” 对话框。 3. 在 “强清洗” 框中, 指定强清洗溶剂的体积。 范围: 0.0 到 99999 ?L 例外: 要省略强清洗溶剂, 请在 “强清洗” 框中输入 0, 或将其留空。 缺省值 : 0.0 ?L 建议: 100 到 500 ?L 提示: 同时使用弱清洗和强清洗溶剂会增加清洗时间和溶剂消耗量, 因为在开始下次 进样前, 必须要将系统中的强溶剂彻底清洗掉。 4. 在 “弱清洗” 框中, 指定弱清洗溶剂的体积。 范围: 1.0 到 99999 ?L 缺省值 : 无强清洗时 200.0 ?L, 有强清洗时 500 ?L 建议: 200 到 500 ?L 或三倍强清洗量 小心:如果不使用足量的弱清洗溶剂,强清洗溶剂可能会接触到样品,从而 对其产生腐蚀。 5. 6. 单击 “确定” 。 针头清洗开始。 当针头清洗完成后, 状态返回 “空闲” 。

在针头清洗例行程序完成之前停止它:
从样品管理器信息窗口中, 单击 “控制” > “重设 SM” 。 或者 : 在 Empower 或 MassLynx 样品管理器控制面板中右键单击, 然后单击 “重设 SM” 。 小心:请勿中断样品针头清洗程序。这样可能将强溶剂留在样品针头中,从而给 色谱带来不良影响。

2-16

准备系统硬件

定性针头密封
针头密封定性过程会在清洗站单元内找到针头获取密封的位置。 开始此过程前, 必须要灌注 样品管理器。 要求 : ? ? 在校正针头和样品定量环体积前执行该过程。 在灌注样品管理器后或在替换和/或调整下列项后执行此过程 : ? ? ? ? ? ? ? 针头 针头组件的任何部分 针头 (Z) 或穿刺针头 (Zp) 标记 (原位和样品板顶部) 原位或样品板顶部传感器 进样端口密封 清洗站 CPU2000 上的 NVRam 电池

定性针头密封:
1. 2. 3. 4. 5. 在 ACQUITY UPLC 控制台中, 从系统树选择 “样品管理器” 。 随即出现样品管理器 信息窗口。 单击 “维护” > “定性” > “针头密封” 。 将出现 “定性针头密封” 对话框。 单击 “开始” 。 校正密封操作随即开始, 且样品管理器状态显示 “校正密封” 。 校正结束后, 样品管理器状态显示 “空闲” 。 单击 “结果” 可查看针头密封定性操作的结果。

准备样品管理器

2-17

定性针头和样品定量环体积
无论何时替换样品定量环和/或样品针头, 必须设置系统以定性替换件的体积。 无论替换件 的大小在标定值上与原始件的大小相同或与之有所不同, 请执行此操作。 当弱清洗溶剂的组 分发生改变时, 也请执行此过程, 因为溶剂的特性 (如粘度、 表面张力和极性) 可能会改变。 样品进样期间, 弱清洗溶剂在流路中夹在样品之间, 因此样品直接受弱清洗溶剂的影响。 定性定量环体积时, 会将定量环的标定体积 (单位为 ?L) 与其测量体积相比较。 定性针头体积时, 会将针头的标定体积 (单位为 ?L) 与其测量体积相比较。 提示 : 定性系统体积是获得可接受的样品管理器性能的关键。 要求 : ? ? ? 定性体积前, 需在 “体积” 对话框中指定样品针头、 定量环和注射器的大小。 灌注样品管理器, 并在定性体积前定性密封。 创建包含您将要使用的相同气隙和样品吸取流量的方法 (使用 Empower 或 MassLynx 软件) 。

定性针头和样品定量环体积:
1. 2. 3. 4. 在 ACQUITY UPLC 控制台中, 从系统树选择 “样品管理器” 。 单击 “维护” > “定性” > “针头和定量环体积” 。 出现 “定性针头和定量环体积” 对话 框。 单击 “开始” 。 针头和定量环体积定性操作随即开始。 提示: 此过程至少需要 5 分钟。 单击 “结果” 可查看针头和定量环体积定性操作的结果。 结果: 如果针头测试失败, 请检查其是否弯曲、 断裂或堵塞。 如果样品定量环测试失 败, 请检查其是否堵塞或泄漏、 其接头是否松动或吸取流量是否过高。

2-18

准备系统硬件

在样品管理器中加载样品板
ACQUITY UPLC 样品管理器总共可容纳两个 ANSI 样品板, 您可通过前门将其装入。 左 样品板被视为位置 1, 右样品板则被视为位置 2。 例外 : 如果安装了可选的样品组织器, 则通过样品管理器前门仅可加载一个样品板。 必须 在右托盘上加载样品板。 此时, 右托盘将成为一号位置。

加载样品板:
1. 2. 3. 4. 打开 ACQUITY UPLC 样品管理器的门。 在将托盘拉向您的同时, 压住托盘按钮。 在托盘上加载样品板, 使孔位置 A,1 在右后角, 并且样品板的前缘在托架正面内部的 弹簧后面。 将托盘滑入样品管理器直至其完全卡到位。 将托盘滑入样品管理器

样品板 A-1 孔位置 按钮 样品板托盘

TP02389

5.

关闭样品室门。 门上的装置可确保门关上时能够正确定位样品板。 小心:样品板务必要正确定位以避免损坏样品针头。

准备样品管理器

2-19

选择最佳样品进样模式
样品管理器支持三种进样模式 – 不充满定量环针头溢出、 不充满定量环和充满定量环。 ? 不充满定量环针头溢出模式 – 不充满定量环进样的最佳通用模式。 它为非常广泛的 样品范围提供了最佳的不充满定量环准确度、 精度和线性, 这些样品包括强弱酸碱、 易溶于水和不溶于水的化合物。 建议将其作为首选模式, 有明确说明使用其它模式的 地方除外。 不充满定量环模式 – 应为以下情况保留此模式 : 分析时间优于其它任何关注点、 样品 体积非常有限或进样体积相当大。 充满定量环模式 – 当准确度和精度成为主要关注点时应选择此模式。 使用 1.0 毫米内 径色谱柱时, 建议使用此模式。

? ?

不充满定量环针头溢出模式指导原则
? ? 当进样体积维持在 10 到 75% 标定定量环体积范围内时, 可提供最佳性能。 不充满定量环进样线性的通用方法是将所选的进样体积限制为 ≤ 50% 标定定量环体 积。 但是, 通过选择 “针头溢出” 技术, 可将可使用的定量环体积增加到 ≤ 75% 标定 定量环体积。 这些建议均以在指定的体积范围内实现进样到进样间变率 ≤ 1% 为基础。 此外, 指定 进样体积与峰面积间的相关数必须为 R2>0.999 且面积 % RSD 为< ±1.0。

?

预加载模式指导原则
? ? ? 样品组的首次进样不会使用 “预加载” 模式。 具有不同方法的进样组不会使用 “预加载” 模式。 最短周期时间为两次运行时间或样品制备和清洗时间中的较小者。

下图显示了标准 ACQUITY UPLC 系统周期时间和预加载周期时间。

2-20

准备系统硬件

标准 ACQUITY UPLC 系统周期时间定义
标准进样模式和 “预加载”模式的首次进样 ACQUITY UPLC 系统总周期时间

系统 设置 色谱运行时间 SM 样品制备和定位 SM 清洗时间 样品进样 开始 结束

ACQUITY UPLC 系统预加载周期时间定义
首次进样后的 “预加载”模式 ACQUITY UPLC 系统总周期时间

系统设置和 将样品定位 到定量环

缓冲延迟 色谱运行时间

SM 清洗时间 样品进样 开始

SM 样品制备

结束

准备样品管理器

2-21

下表提供了各种常用定量环的最小和最大进样体积。 选择进样模式和定量环体积 样品进样体积 (?L) 不充满定量环针头溢 出模式进样范围 (?L) 不充满定量环模式进 样范围 (?L) 充满定量环模式进样 范围 (?L) 定量环体积 2 ?L 0.2 到 1.5 5 ?L 0.5 到 3.8 10 ?L 1.0 到 7.5 20 ?L 2.0 到 15.0 50 ?La 5.0 到 37.0

不推荐 2

不推荐 5

1.0 到 5.0 10

2.0 到 10.0 20

5.0 到 25.0 50

a. 50 ?L 定量环必须和 250 ?L 样品注射器配合使用。

安装样品管理器遮光板
如果样品对光较为敏感, 则应在样品室窗口上安装样品管理器泡沫遮光板。

必备材料
? 样品管理器泡沫遮光板

安装样品管理器泡沫遮光板:
1. 将泡沫遮光板插入样品室窗口外侧。

2-22

准备系统硬件

插入泡沫遮光板

样品室窗口

泡沫遮光板

2.

将泡沫遮光板按入窗口上方, 使其到位。 按到位的泡沫遮光板

泡沫遮光板

准备样品管理器

2-23

准备样品组织器
如果系统中包括样品组织器, 请按照本节中的步骤操作为其做好操作准备。

启动通信
启动样品管理器和样品组织器之间的通信:
1. 打开样品管理器门, 将样品板载入右托盘中, 然后关闭样品管理器门。 提示: 当系统既有样品管理器又有样品组织器时, 样品管理器的右托盘将成为一号位 置, 而左托盘将不可用。 样品组织器中的底架将成为二号位置。 例外: 如果系统不包括样品组织器, 则样品管理器中的左托盘将是指定的一号位置, 而右托盘为二号位置。 2. 3. 4. 5. 在 ACQUITY UPLC 控制台中, 从系统树选择 “样品管理器” 。 在样品管理器信息窗口中, 单击 “配置” > “样品组织器” 。 出现 “样品组织器配置” 对 话框。 从下拉列表中的序列号列表中选择样品组织器, 然后单击 “确定” 。 样品组织器会自动检测哪些样品架包含样品板并点亮其相应的 LED。

2-24

准备系统硬件

加载样品板
样品组织器总共可容纳 21 个 ANSI 样品板, 您可通过前门将其装入。 但是, 可装入的样品 板的实际数量取决于其高度。 当系统既有样品管理器又有样品组织器时, 样品管理器的右样 品架被视为位置 1, 而样品组织器的底部样品架被视为位置 2。

加载样品板:
1. 2. 3. 打开样品组织器门。 将样品架朝您一侧拉。 在样品架上加载样品板, 使位置 A,1 在右后角, 并且样品板的前缘在左前角的挡 板后。 加载样品板

样品架标签

TP02504

4.

确保样品板未超出样品架背部的样品板挡板。 小心:为防止溢出,请对样品使用经 Waters 认可的帽垫、密封帽或热封 膜。有关经认可的样品盖的列表,请查看当前的 ACQUITY UPLC 系统发行 说明。

5.

将样品架滑入样品组织器直至其停止。 小心:要确保传输滑块可自由移动且不会损坏样品组织器,必须能够滑入或 滑出样品架 / 样品板 / 样品瓶组合体,且不会妨碍其正上方和正下方的限流 器。

准备样品组织器

2-25

样品架/样品板组合体和限流器

限流器

样品板

样品架

6. 7.

对其余的样品板重复步骤 2 到 5。 关闭样品组织器门。 门上的装置可确保门关上时能够正确定位样品架。 小心:为避免将样品板从其样品架上震下来,请勿猛然关闭样品组织器门。

8.

单击 “配置” > “扫描和存储样品架布局” 以更新并保存新的样品架配置。

移除和替换同一样品架上的样品板:
1. 2. 3. 打开样品组织器门, 然后移除已完成处理的样品板。 将样品架朝您一侧拉, 然后在样品架上插入同一类型和尺寸的样品板。 在样品架上加载样品板, 使位置 A,1 在右后角, 并且样品板的前缘在左前角的挡板 后。 确保样品板未超出样品架背部的样品板挡板。 小心:为防止溢出,请对样品使用经 Waters 认可的帽垫、密封帽或热封 膜。有关经认可的样品盖的列表,请查看当前的 ACQUITY UPLC 系统发行 说明。 4. 将样品架滑入样品组织器直至其停止。 小心:要确保传输滑块可自由移动且不会损坏样品组织器,必须能够滑入或 滑出样品架 / 样品板 / 样品瓶组合体,且不会妨碍其正上方和正下方的限流 器。 5. 重复步骤 3 和 4, 直到所有样品板和支架都正确放置在样品架上。

2-26

准备系统硬件

6.

关闭样品组织器门。 门上的装置可确保门关上时能够正确定位样品架。 小心:为避免将样品板从其样品架上震下来,请勿猛然关闭样品组织器门。

7.

单击 “校验” 。 样品组织器会自动扫描样品板和样品架, 判断哪些样品架含有样品 板, 将其与保存的布局进行比较, 校验其是否匹配, 并点亮位于样品组织器门内部的 相应 LED。 在 Empower 或 MassLynx 数据应用程序中配置样品板和样品架。 提示 : 可以在数据应用程序中配置样品板和样品架之前或之后加载它们, 但必须在运 行样品前配置它们。

8.

针对不同样品板配置重新安排样品架:
1. 2. 打开样品组织器门, 然后移除已完成处理的样品板。 在样品组织器中添加、 移动或从中移除样品架, 以使样品架配置适合于您欲运行的样 品板。 标准微孔板需要一个插槽。 中等样品板需要两个插槽, 因此允许样品板或支架 上有空插槽。 深孔样品板和所有样品瓶架需要三个插槽, 因此允许样品板或支架上有 两个空插槽。 在样品架上加载样品板, 使位置 A,1 在右后角, 并且样品板的前缘在左前角的挡板 后。 确保样品板未超出样品架背部的样品板挡板。 小心:为防止溢出,请对样品使用经 Waters 认可的帽垫、密封帽或热封 膜。有关经认可的样品盖的列表,请查看当前的 ACQUITY UPLC 系统发行 说明。 4. 将样品架滑入样品组织器直至其停止。 小心:要确保传输滑块可自由移动且不会损坏样品组织器,必须能够滑入或 滑出样品架 / 样品板 / 样品瓶组合体,且不会妨碍其正上方和正下方的限流 器。 5. 6. 重复步骤 3 和 4, 直到所有样品板和支架都正确放置在样品架上。 关闭样品组织器门。 门上的装置可确保门关上时能够正确定位样品架。 小心:为避免将样品板从其样品架上震下来,请勿猛然关闭样品组织器门。 7. 单击 “配置” > “扫描和存储样品架布局” 。 样品组织器初始化并扫描样品架。 当其检测到新样品架后, 会点亮样品组织器门内样 品架左侧的 LED。 提示 : 在 ACQUITY UPLC 控制台中, 为每个空样品架显示一个灰色细条。 使用 Empower 或 MassLynx 软件配置样品板或样品架后, 样品板标识显示为粗条。

3.

准备样品组织器

2-27

8.

在 Empower 或 MassLynx 数据应用程序中配置样品板和样品架。 提示 : 可以在数据应用程序中配置样品板和样品架之前或之后加载它们, 但必须在运 行样品前配置它们。

显示样品板信息
显示样品板信息:
1. 2. 在 ACQUITY UPLC 控制台中, 从系统树选择 “样品组织器” 。 在样品组织器信息窗口中, 单击 “配置” > “扫描和存储货架布局” 以更新和保存货架 上样品板的配置。 除样品板的有关信息外, 还显示含有样品板的货架的数字标识。 样品组织器信息窗口

样器架编号

样品板信息

提示 : ? ? 仅在方法设置后才显示样品架和样品板信息。 在样品架上移动鼠标可显示接下来要从该样品架运行的样品数。

2-28

准备系统硬件

准备检测器
如果系统中包括 TUV 检测器, 请按照本节中的步骤操作为其做好操作准备。 另请参阅 : 如果系统包括 PDA 检测器, 请参阅 ACQUITY UPLCPhotodiode Array Detector Getting Started Guide 以了解其准备信息。 另请参阅 : 如果系统包括 ELS 检测器, 请参阅 ACQUITY UPLC Evaporative Light Scattering Detector Getting Started Guide 以了解其准备信息。 另请参阅 : 如果系统包括质谱仪, 请参阅仪器随附的文档以了解它的准备信息。

准备 TUV 检测器
启动 TUV 检测器
小心:仅使用彻底脱气的 HPLC 级溶剂。流动相中的气体可能在流动池中形成气 泡,并导致检测器启动诊断测试失败。 提示 : 为防止启动时出错, 请确认流动池包含已脱气的透明溶剂 (乙腈或水) 且检测器门已 经紧紧关闭。

启动 TUV 检测器:
1. 2. 3. 请确保检测器流动池充满已脱气的透明溶剂 (乙腈或水) 并且没有气泡。 如果池中含 有空气, 检测器可能无法正确初始化。 确保检测器门已紧紧关闭。 请按下门上的电源开关以打开检测器电源。 检测器会嘟嘟响三声, 然后运行一系列启 动测试, 同时灯 LED 会闪烁。 电源 LED 显示平稳绿色。 初始化通常需要约 2 分钟, 灯预热大约需要 3 分钟。 4. 当灯 LED 显示平稳绿色时, 启动 Empower 或 MassLynx 软件。 可以监视 ACQUITY UPLC 控制台中是否有信息和 LED 指示。 为获得最佳结果, 请留出至少 30 分钟用于平衡检测器并稳定基线。 提示: 吸光度值将显示在 ACQUITY UPLC 控制台中, 此外还将显示在 Empower 的 “运行样品” 窗口或 MassLynx 的 Inlet Editor (入口编辑器) 窗口中。 如果检测器 处于双波长模式, 则会出现两个吸光度值。 吸光度值的分辨率为 0.0001 AU。 当灯熄灭时, 软件中会显示 “灯关闭” 而不是吸光度值。 5. 根据 Empower 或 MassLynx 在线帮助中的说明配置检测器。 另请参阅 : 第 4-2 页上的 “配置 Empower” 和第 4-10 页上的 “配置 MassLynx 软 件” 。

准备检测器

2-29

“TUV 检测器”信息窗口

记录样品和参比能量
在安装检测器或执行维护任务后, 像改变灯或流动池一样, 请完成本节中的步骤以检验检测 器光学元件和电子器件工作是否正常。

记录样品和参比能量:
1. 2. 3. 请确保检测器与工作站相连。 用经过过滤、 脱气的 HPLC 级乙腈冲洗系统管路。 用泵以 0.3 毫升/分钟流量抽吸流动相 15 分钟或更长时间。 小心:流动池中所允许的最大压力降是 6895 千帕 (69 巴, 1000 psi) 。 如果溶 剂是粘性物质 (例如, 甲醇 – 水) , 可能需要降低最大流量以防止流动池破 裂。 4. 5. 确保检测器池充满溶剂并且无气泡。 提示: 如果池中存在空气, 则检测器可能无法正确初始化。 当两个 LED 均显示稳定绿色时, 表明初始化已完成。

2-30

准备系统硬件

6. 7.

启动 Empower 或 MassLynx 软件。 从样品管理器控制面板启动 ACQUITY UPLC 控制台。 另请参阅 : 第 4-9 页上的 “从 Empower 启动 ACQUITY UPLC 控制台” 和第 4-11 页上的 “从 MassLynx 软件启动 ACQUITY UPLC 控制台” 。

8. 9.

在 ACQUITY UPLC 控制台中选择 TUV 检测器视图。 将波长设置为 230 纳米。

10. 在控制台的系统树中, 选择 “TUV 检测器” > “交互显示” 。 11. 请记录 230 纳米处的样品和参比能量。

准备检测器

2-31

调整色谱柱
调整色谱柱包括通过它来运行溶剂梯度, 而无需进样或运行 “事件表” 。 调整色谱柱的运行 时间应该等于梯度表的运行时间。 小心:为防止损坏检测器流动池, 请确保在此过程中废溶剂不流经检测器。 安装新 色谱柱后, 在将此色谱柱连接到检测器前, 用溶剂冲洗它并将冲洗后的溶剂排放到 废液中 (例如, 10 个色谱柱体积) 。

调整色谱柱:
1. 2. 从检测器取下色谱柱入口管, 并将管端放置在小废液容器中。 如果是 Empower 软件控制系统, 请继续按照以下步骤操作 : a. b. c. 3. a. b. c. d. e. f. g. h. 在 “样品” 表中, 向方法中添加一行。 选择 “平衡/调整色谱柱” (等度或梯度) 作为新行中的函数。 运行分离方法。 系统会运行梯度。 打开 Sample Set (样品组) 窗口并选择包含您要使用的色谱条件的汽化室方 法。 在 Samples (样品) 表中, 添加汽化室预运行字段。 在 Run Samples (运行样品) 页中, 选择 Samples (样品) > Format (格式) > Customize (自定义) 。 在 Custom Field Display (自定义字段显示) 窗口中, 选择 Inlet prerun (汽化 室预运行) 。 要将色谱柱另存为窗口的一部分, 则保存样品组格式。 在 Sample Set (样品组) 窗口中, 将方法设置选作预运行汽化室方法。 为汽化室文件选择方法 (这些方法可以相同) 。 运行样品组管路。 系统运行调整色谱柱方法, 然后运行分离方法。

如果是 MassLynx 软件控制系统, 请继续按照以下步骤操作 :

另请参阅 : 有关色谱柱调整的详细信息, 请参阅 Empower 在线帮助。 提示 : 调整色谱柱的运行时间应该等于梯度表的运行时间。

2-32

准备系统硬件

关闭系统
小心:系统中剩余的缓冲剂可能会沉淀并损坏仪器组件。 您可能要在以下这些时段关闭系统 ? ? ? ? ? ? 分析之间 通宵 一周 72 小时或更长 如果要使用 Empower 软件控制系统, 请在 “仪器方法编辑器” 中设置系统关闭参 数。 有关详细信息, 请参阅 Empower 在线帮助。 如果要使用 MassLynx 软件控制系统, 请在 Shutdown Editor (关闭编辑器) 中设置 系统关闭参数。 有关详细信息, 请参阅 MassLynx 在线帮助。

提示 :

分析之间
在分析之间关闭系统:
1. 2. 在分析之间, 继续通过色谱柱用泵抽吸初始流动相混合物。 这样做可以维持获得理想 保留时间再现性所必需的色谱柱平衡。 如果在下一次进样前将会经过几个小时, 请将此过渡期内的流量减小为一毫升/分钟 的十分之几以节省溶剂。 提示: 确保已禁用关闭方法中的 “自动关闭” 。 3. 在此期间, 使检测器持续运行并使色谱柱加热器保持在运行温度。

关闭系统

2-33

关闭不到 72 小时的时间
将系统关闭不到 72 小时的时间:
1. 用 100% 乙腈冲洗色谱柱。 这样做将使色谱柱床保持活动、 潮湿状态。 另请参阅 : Waters ACQUITY UPLC BEH Column Care and Use Instructions (色谱柱保养与使用说明书) 。 要求: 如果要使用缓冲剂, 则必须先用水含量较高的流动相 (90% 水) 冲洗色谱柱。 然后停止泵流量。 2. 3. 熄灭检测器灯以延长灯使用寿命。 色谱柱加热器可以通宵工作, 但应在周末期间关闭。 警告 : 电击危险。 每个系统仪器上的电源开关控制该仪器的基本运行状态。 不过, 在关闭仪器后, 某些仪器电路仍带电。 要完全中断系统仪器的电源, 请将电源开关置于关闭位置, 然后从交流电源插座中拔出仪器的电源线。

关闭 72 小时以上的时间
将系统关闭 72 小时以上的时间:
1. 2. 按照将系统关闭不到 72 小时的时间所需的步骤进行操作 (如上所述) 。 另请参阅 : Waters ACQUITY UPLC BEH Column Care and Use Instructions。 冲洗色谱柱并让其冷却到环境温度, 断开入口和出口管, 然后用连管节将其连接起 来。 在色谱柱入口和出口接头中安装端塞, 然后小心地将色谱柱放回其盒中保存起 来。 用泵以 0.5 毫升/分钟的流量在系统 (包括二元溶剂管理器、 样品管理器和检测器) 中 抽送水 10 到 20 分钟, 接着用异丙醇再抽送 10 到 20 分钟。 然后将泵关闭, 将异丙醇 保留在流路中。 小心:在将任何系统仪器用于另一类型的分析前,请确保新分析的流动相可 与甲醇、水、甲醇 / 乙腈或异丙醇混溶。同样,在重新启动系统前,确保已 使用相应的中间溶剂从系统中彻底冲净与最初的甲醇 / 水流动相不混溶的任 何残余物。

3.

2-34

准备系统硬件

3

配置系统软件

目录: 主题 配置 Empower 从 Empower 启动 ACQUITY UPLC 控制台 配置 MassLynx 软件 从 MassLynx 软件启动 ACQUITY UPLC 控制台 页码 3-2 3-9 3-10 3-11

3-1

配置 Empower
请执行以下任务配置 Empower : ? ? ? 启动软件并登录 选择系统仪器 命名系统

启动 Empower 并登录
启动 Empower 并登录:
1. 请选择 “开始” > “程序” (Windows XP 为 “所有程序” ) > Empower > “Empower 登录” 。 将显示 “Empower 登录” 对话框。 或者:也可以通过 Empower 的桌面快捷方式启动 Empower。 2. 3. 键入用户名和密码。 单击 “确定” 。

选择系统仪器
选择系统仪器:
1. 2. 3. 在 Empower Pro 窗口中, 单击 “系统设定” 。 在 “配置管理器” 窗口中, 单击 “采集服务器” , 右键单击节点名, 然后选择 “属性” 。 提示:如果使用 Empower 1154 软件控制系统, 则节点名被视为采集服务器名称。 在 “采集服务器” 对话框中, 单击 “仪器” 选项卡。 与系统成功通讯的系统仪器会在 “正常?” 列中显示 “是” 。 “仪器”选项卡

4. 5.

确保二元溶剂管理器 (ACQ-BSM)、 样品管理器 (ACQ-SM) 和检测器 (ACQ-TUV、 ACQ-PDA 或 ACQ-ELS) 显示在仪器列表中, 然后单击 “确定” 。 右键单击 “系统” , 然后选择 “新建” > “色谱系统” 。

3-2

配置系统软件

6.

在 “新建色谱系统向导” 对话框的 “系统类型” 区中, 选择 “新建系统” , 然后单击 “下一步” 。 “系统选择”对话框

7. 8. 9.

在 “系统选择” 对话框中, 将要加入新系统的一个或多个仪器的名称从 “可用仪器” 窗格拖至 “新系统仪器” 窗格。 单击 “下一步” 。 出现 “访问控制” 对话框时, 请单击 “下一步” 。 在 “选择名称” 对话框中, 指定系统名称。 输入注释 (如果有) , 然后单击 “完成” 。 随即出现确认对话框。

10. 单击 “项目” , 右键单击一个项目, 然后选择 “打开” 。 11. 在 “项目” 窗口中, 单击 “运行样品” 。 出现 “运行样品” 窗口。 或者 : 也可以通过 Empower 的 QuickStart 菜单访问 “运行样品” 窗口。 “运行样品” 窗口中有二元溶剂管理器、 样品管理器和检测器的控制面板。 控制面板

配置 Empower

3-3

关于二元溶剂管理器控制面板
如果是 Empower 软件控制系统, 二元溶剂管理器的控制面板将显示在 “运行样品” 窗口的 底部。 如果是 MassLynx 软件控制系统, 二元溶剂管理器的控制面板将显示在 Inlet Editor (入口编辑器) 窗口的底部。 二元溶剂管理器控制面板
流量 LED 状态 系统压力 总流量 停止液流 溶剂成分

二元溶剂管理器控制面板可显示流量状态、 系统压力、 总流量和溶剂成分参数。 系统空闲 时, 可以通过单击加有下划线的值编辑这些参数。 系统处理样品时不能编辑二元溶剂管理器 参数。 下表列出了二元溶剂管理器控制面板中的项目。 二元溶剂管理器控制面板项目 控制面板项目 流量 LED 状态 系统压力 说明 显示溶剂管理器前面板上实际的流量 LED, 除非失去与溶剂管理器的通讯。 显示当前的运行状态。 显示溶剂管理器压力 (千帕、 巴或 psi) 。 可通过 ACQUITY UPLC 控制台自定义压 力单位。 显示溶剂管理器的总流量。 总流量值的范 围在正常运行时为 0.000 到 2.000 毫升/ 分, 灌注时为 0.000 到 8.000 毫升/分。 显示从泵 (A 和 B) 中抽取的溶剂 (1 和 2) 的百分比。 成分值范围为 0.0 到 100.0%。 立即停止来自溶剂管理器的所有液流。

总流量

溶剂成分 (停止液流)

3-4

配置系统软件

在溶剂管理器控制面板中右键单击任意位置可访问其它功能 : 二元溶剂管理器控制面板中的其它功能 控制面板功能 刷新系统 (系统准备) 启动 说明 根据当前方法条件刷新流路。 另请参阅: 第2-9页上标题为 “刷新系统” 。 在长时间处于空闲状态后或切换到另一溶剂 时, 将系统转入运行状态。 另请参阅: 第2-10页上标题为 “启动系统” 。 显示 “灌注 A/B 溶剂” 对话框。 另请参阅: 第2-5页上标题为 “准备二元溶剂 管理器” 。 显示 “密封清洗灌注” 对话框。 另请参阅: 第2-5页上标题为 “执行密封清洗 灌注” 。 出错后, 重设溶剂管理器。 显示 ACQUITY UPLC 控制台在线帮助。

灌注 A/B 溶剂

密封清洗灌注

重设 BSM 帮助

配置 Empower

3-5

关于样品管理器控制面板
如果是 Empower 软件控制系统, 样品管理器的控制面板将显示在 “运行样品” 窗口的底 部。 如果是 MassLynx 软件控制系统, 样品管理器的控制面板将显示在 Inlet Editor (入口 编辑器) 窗口的底部。 样品管理器控制面板

状态 当前样品室温度

运行 LED 当前色谱柱加热器温度 显示 ACQUITY UPLC 控制台 色谱柱加热器设定值

样品室设定值

样品管理器控制面板可显示当前样品室和色谱柱加热器温度及设定值。 系统空闲时, 单击加 有下划线的值可以编辑这些参数。 系统处理样品时不能编辑样品管理器设定值。 下表列出了样品管理器控制面板中的项目。 样品管理器控制面板项目 控制面板项目 运行 LED 状态 当前样品室温度 样品室设定值 当前色谱柱加热器温度 色谱柱加热器设定值 说明 显示样品管理器前面板上实际的运行 LED, 除非失去与样品管理器的通讯。 显示当前的运行状态。 显示当前样品室温度, 以 0.1 为增量。 禁用 活动的温度控制时, 该字段显示 “关” 。 显示当前样品室设定值, 以 0.1 为增量。 禁 用活动的温度控制时, 该字段显示 “关” 。 显示当前色谱柱加热器温度, 以0.1 为增 量, 即使禁用活动的温度控制。 显示当前色谱柱加热器设定值, 以 0.1 为增 量。 禁用活动的温度控制时, 该字段显示 “关” 。 显示 ACQUITY UPLC 控制台。

(显示控制台)

3-6

配置系统软件

在样品管理器控制面板中右键单击任意位置可访问其它功能 : 样品管理器控制面板中的其它功能 控制面板功能 运行系统准备 说明 使用一种弱清洗灌注 (清洗和样品注射器) 灌注样品管理器。 另请参阅: 第2-9页上标题为 “刷新系统” 。 显示 “灌注注射器” 对话框。 另请参阅: 第2-14页上标题为 “灌注样品管 理器” 。 显示 “清洗针头” 对话框。 另请参阅: 第2-15页上标题为 “清洗样品管 理器针头” 。 打开或关闭样品管理器室和可选的样品组 织器灯。 出错后, 重设样品管理器。 显示 ACQUITY UPLC 控制台在线帮助。

灌注注射器

清洗针头

打开/关闭灯 重设 SM 帮助

关于 TUV 检测器控制面板
另请参阅 : 如 果 系 统 包 括 PDA 检 测 器, 请 参 阅 ACQUITY UPLC Photodiode Array Detector Getting Started Guide以了解其准备信息。 另请参阅 : 如 果 系 统 包 括 ELS 检 测 器, 请 参 阅 ACQUITY UPLC Evaporative Light Scattering Detector Getting Started Guide 以了解其准备信息。 如果是 Empower 软件控制系统, TUV 检测器的控制面板将显示在 “运行样品” 窗口的底 部。 如果是 MassLynx 软件控制系统, 检测器的控制面板将显示在 Inlet Editor (入口编辑 器) 窗口的底部。 TUV 检测器控制面板
灯开/关 LED 状态 吸光度单位 打开/关闭检 测器灯 波长 A 的值

配置 Empower

3-7

TUV 检测器控制面板可显示吸光度单位和波长值。 系统空闲时, 可以通过单击加有下划线 的值编辑这些参数。 系统处理样品时不能编辑检测器参数。 下表列出了 TUV 检测器控制面板中的项目。 TUV 检测器控制面板项目 控制面板项目 灯开/关 LED 状态 AU 纳米 (灯开启) (灯关闭) 说明 显示检测器前面板上实际的灯开/关 LED, 除非失去与检测器的通讯。 显示当前的运行状态。 显示吸光度单位。 显示波长 A 的值 (纳米) 。 如果检测器处于 双波长模式, 还会显示波长 B 的值。 点亮检测器灯。 熄灭检测器灯。

在检测器控制面板中右键单击任意位置可访问其它功能 : 检测器控制面板中的其它功能 控制面板功能 自动复零 重设 TUV 帮助 说明 将吸光度值重设为 0。 出错后显示时, 重设检测器。 显示 ACQUITY UPLC 控制台在线帮助。

3-8

配置系统软件

从 Empower 启动 ACQUITY UPLC 控制台
从 Empower 启动 ACQUITY UPLC 控制台:
在 “运行样品” 窗口中, 单击 “样品管理器” 控制面板中的 “显示控制台” ACQUITY UPLC 控制台窗口 。

从 Empower 启动 ACQUITY UPLC 控制台

3-9

配置 MassLynx 软件
请执行以下任务以配置 MassLynx 软件 : ? ? 启动应用程序 选择系统仪器

启动 MassLynx 软件:
1. 选择 “开始” > “程序” > MassLynx > MassLynx。 或者: 也可以通过 MassLynx 桌面快捷方式启动 MassLynx 软件。 如果未启用 MassLynx Security (MassLynx 安全) , 则会启动 MassLynx 软件, 并 出现 MassLynx 窗口。 如果启用了 MassLynx Security (MassLynx 安全) , 则会显 示 MassLynx Login (MassLynx 登录) 对话框。 2. 3. 键入用户名和密码, 并选择所属域。 单击 OK (确定) 。 随即出现 MassLynx 窗口。

选择系统仪器:
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 在 MassLynx 窗口中, 单击 Inlet Method (汽化室方法) 。 从 Inlet Method (汽化室方法) 窗口的 Tools (工具) 菜单中选择 Instrument Configuration (仪器配置) 。 在 Inlet Configuration (汽化室配置) 窗口中, 单击 Configure (配置) , 然后单击 Next (下一步) 。 在 Select Pump (选择泵) 对话框中, 选择 Waters ACQUITY 作为泵设备, 然后单 击 Next (下一步) 。 选择 Waters ACQUITY 作为自动进样器, 然后单击 Next (下一步) 。 选择 Waters ACQUITY TUV、 Waters ACQUITY PDA 或 Waters ACQUITY ELS 作为检测设备, 然后单击 Next (下一步) 。 单击 Next (下一步) 。 单击 Finish (完成) 。 单击 Finish (完成) , 然后单击 OK (确定) 。

10. 在 Instrument Control Option Pack (仪器控制选项包) 对话框中, 确保选中 Install new instrument software or upgrade existing installation(s) (安装新仪 器软件, 或升级现有安装) , 然后单击 Next (下一步) 。

3-10

配置系统软件

11. 选择 ACQUITY Binary Solvent Manager (ACQUITY 二元溶剂管理器) 、 ACQUITY Sample Manager (ACQUITY 样品管理器) 和 ACQUITY TUV Detector (ACQUITY TUV 检测器) (或 ACQUITY PDA Detector (ACQUITY PDA 检测器) 和/或 ACQUITY ELS Detector (ACQUITY ELS 检测器) ) , 然后单 击 Next (下一步) 。 对话框底部会显示一个进度条。 12. 完成仪器控制选项包的安装后, 会显示 Instrument Control Option Pack (仪器控制 选项包) 对话框的 Results (结果) 屏幕。 13. 单击 Finish (完成) 。 随即出现 Inlet Method (汽化室方法) 窗口。

从 MassLynx 软件启动 ACQUITY UPLC 控制台
从 MassLynx 软件启动 ACQUITY UPLC 控制台:
1. 2. 3. 在 MassLynx 窗口中, 单击 Inlet Method (汽化室方法) 。 随即出现 Inlet Method (汽化室方法) 窗口。 单击 ACQUITY Additional Status (ACQUITY 其它状态) 选项卡。 随即出现样品 管理器状态。 单击 Display console (显示控制台) (ACQUITY UPLC 控制台) 窗口。 。 随即出现 ACQUITY UPLC Console

从 MassLynx 软件启动 ACQUITY UPLC 控制台

3-11

3-12

配置系统软件

4

检验系统操作

目录: 主题 准备系统 创建测试方法 执行梯度性能测试 页码 4-2 4-4 4-9

本章介绍如何在具有 TUV 检测器的系统上运行梯度性能测试, 以检验系统工作是否正常。 用于检验系统的样品包括在系统启动套件中。 开始此过程前, 必须按 ACQUITY UPLC 系统操作员指南介绍的步骤设置和配置系统。 提示 : 为确保拥有此程序的最新版本, 请访问 http://www.waters.com 并单击 Support Center (支持中心) 。 限制 : ? ? 此梯度性能测试不适用于带有质谱仪的 ACQUITY UPLC 系统。 没有适用于带有 ELS 检测器的 ACQUITY UPLC 系统的梯度性能测试。

4-1

准备系统
无论系统是由 Empower 数据系统还是 MassLynx 数据系统控制的, 准备过程均相同。 要求 : 由于 ACQUITY UPLC 系统和检测器的灵敏度已提高 : ? ? 所有溶剂 (包括水和添加剂) 必须具有最高的化学纯度 (MS 级) 。 不使用 MS 级溶剂 将导致高背景浓度、 低信噪比以及灵敏度降低。 所有用于 ACQUITY UPLC 系统的 MS 级溶剂都应在使用前进行适当过滤。 Waters 建议, 在使用溶剂前, 应使用溶剂净化套件 (47 毫米全玻璃过滤器支架和 1 升烧瓶) 通过适当的膜式过滤器进行过滤。 还需要一台通用的实验室真空泵与全玻璃溶剂过 滤装置配合使用。 为防止污染, 请勿使用去污剂清洗玻璃器皿 (如溶剂瓶) 或与其它常用的玻璃器皿一 起清洗。 应使用将要用到的高纯度溶剂来冲洗玻璃器皿。 另请参阅 : ACQUITY UPLC 系统书架 CD 上的 Controlling Contamination in LC/MS Systems (部件号 715001307) 。 Waters 建议按以下方法混合流动相和清洗溶剂 : ? ? ? ? ? ? ? 流动相 A1 – 10:90 乙腈/水 (用于 A1、 B2、 强性与弱性针头清洗, 以及柱塞密封清洗 管) 流动相 A2 – 100% 乙腈 (用于溶剂管 B1 和 A2) 流动相 B1 – 100% 乙腈 流动相 B2 – 10:90 乙腈/水 弱清洗 – 10:90 乙腈/水 强清洗 – 10:90 乙腈/水 柱塞密封清洗 – 10:90 乙腈/水

?

准备系统进行检验:
警告:化学暴露风险。当使用此设备并处理溶剂和测试溶液时,请务必遵守实验 室的安全操作规程。 了解所用溶剂和测试溶液的化学及物理性质。 要了解所使用 的每种溶剂和测试溶液的信息,请参阅 “材料安全数据表” 。 1. 准备 10:90 乙腈/水流动相 : a. b. c. d. e. 在 100 毫升量筒中量取 100 毫升的过滤乙腈。 小心地将乙腈转移到容量为 1 升的储液瓶中。 在 1000 毫升量筒中量取 900 毫升的过滤 HPLC 级水。 小心地将这些水转移到同一个容量为 1 升的储液瓶中。 盖上储液瓶盖, 然后充分混合。

4-2

检验系统操作

f. g. h. 2. a. b. c. d. 3.

将储液瓶标记为 10:90 乙腈/水。 将管路 A1、 B2、 柱塞密封清洗、 强性针头清洗、 弱性针头清洗浸没在包含 10:90 乙腈/水的储液瓶中。 将储液瓶置于溶剂盘中。 将接近 1 升的过滤乙腈倒入容量为 1 升的储液瓶中。 将该储液瓶标记为乙腈。 将管路 A2 和 B1 浸没在乙腈储液瓶中。 将储液瓶置于溶剂盘中。

准备含 100% 乙腈的流动相 :

在色谱柱加热器中安装 ACQUITY UPLC 色谱柱, 关闭色谱柱盘, 然后将色谱柱加 热器的前盖放回原处。 注意: 绝不要直接在不混溶的洗脱液间或在缓冲溶液和有机洗脱液间进行转 换。 不混溶的洗脱液会在流路中形成乳状液。 缓冲溶液和有机洗脱液相结合会 在梯度比例阀、泵头、止回阀或系统其它部位造成盐沉淀。确认系统中的所有 液体均与乙腈相混溶。 如果需要有关灌注系统的其它信息, 请参阅第 2-7 页上 的 “灌注二元溶剂管理器” 。

4.

访问 ACQUITY UPLC 控制台并执行以下任务 : a. b. c. d. e. 灌注二元溶剂管理器的各溶剂管 10 分钟。 请参阅第 2-9 页上的 “灌注湿二元溶 剂管理器” 。 灌注二元溶剂管理器的密封清洗几分钟。 请参阅第 2-9 页上的 “灌注湿二元溶 剂管理器” 。 灌注样品管理器至少 5 次。 请参阅第 2-14 页上的 “灌注样品管理器” 。 在样品管理器中执行密封定性过程。 请参阅第 2-17 页上的 “定性针头密封” 。 在样品管理器中校正系统体积。

或者 : 使用 “刷新 (系统准备) ” 功能灌注二元溶剂管理器。 请参阅第 2-9 页上的 “刷 新系统” 。 5. 6. 使用 10/90 乙腈:水准备样品说明中所列的样品。 将样品置于样品瓶板中 (注意样品瓶位置) , 然后将样品板放在 “样品管理器” 的位 置 2 处。

准备系统

4-3

创建测试方法
无论是 Empower 还是 MassLynx 软件控制系统, 梯度性能测试方法参数均相同。 按照以 下步骤创建方法, 设置参数值使其与屏幕演示图中所表示的值匹配。 提示 : 在选项卡页上单击 显示在线 “帮助” 。

创建仪器方法
创建仪器方法:
1. 使用以下屏幕演示图中所示的二元溶剂管理器参数, 创建仪器方法。 二元溶剂管理器仪器参数

提示:不管您的系统包括 TUV 检测器还是 PDA 检测器,二元溶剂管理器参数均 相同。 2. 按照下面屏幕演示图中所示, 设置样品管理器的仪器方法参数。

4-4

检验系统操作

样品管理器仪器参数

提示:不管您的系统包括 TUV 检测器还是 PDA 检测器,样品管理器参数均相同。 3. 在 “常规” 选项卡上单击 “高级” , 并按照下面屏幕演示图中所示设置参数。

创建测试方法

4-5

样品管理器仪器高级设置

提示:不管您的系统包括 TUV 检测器还是 PDA 检测器,样品管理器参数均相同。 4. 如果系统包括 TUV 检测器, 请按照下面的屏幕演示图所示设置仪器方法参数。 另请参阅: ? ? ? ? 有关缺省值的信息, 请参阅 ACQUITY 控制台在线帮助。 有关检测器参数的详细信息, 请参阅 ACQUITY UPLC 控制台在线帮助、 Empower 在线帮助或 MassLynx 在线帮助。 如果系统包括 PDA 检测器, 请参阅 ACQUITY UPLC Photodiode Array Detector Getting Started Guide以了解其检验信息。 如果系统包括 ELS 检测器, 请参阅 ACQUITY UPLC Evaporative Light Scattering Detector Getting Started Guide 以了解有关执行运行的信息。

4-6

检验系统操作

TUV 检测器仪器参数

5.

保存仪器方法。

创建测试方法

4-7

创建样品组方法
如果是 Empower 软件控制系统, 则必须创建样品组方法。 无论系统包括 TUV 检测器还是 PDA 检测器, 样品组方法参数 ( “进样体积” 、 “进样次数” 、 “函数” 、 “运行时间” 和 “下 一进样延迟” ) 均相同。 但是, 方法组和报告方法不同。 采集数据前, 确保选择适当的方法 组。 另请参阅:有关创建样品组方法的详细信息, 请参阅 Empower 在线帮助。

创建样品组方法:
1. 设置以下样品组方法参数 : ? ? ? ? 2. 调整色谱柱一次 (运行时间 = 6.0 分钟) 进样体积 = 5 微升 (10 毫米、 25 毫米流动池或 ELSD) 进样次数 = 3 如果是 Empower 软件控制系统, 运行时间 = 4.0 分钟 (下一进样延迟 = 2.5 分 钟) 。 如果是 MassLynx 软件控制系统, 总运行时间 = 6.5 分钟

保存样品组方法。

4-8

检验系统操作

执行梯度性能测试
限制:如果 ACQUITY UPLC 系统仅使用质谱仪, 则梯度性能测试不适用。 当系统准备就绪并且已经创建测试方法时, 您就可以执行梯度性能测试。 运行测试的步骤稍 有些不同, 这取决于您的系统使用的是 Empower 还是 MassLynx 软件, 但所需结果均相 同。

执行测试:
1. 开始运行 : ? ? 2. 如果系统由 Empower 软件控制, 请在 “运行样品” 中打开项目, 选择梯度性能 测试样品组, 然后选择 “运行并报告” 。 如果系统由 MassLynx 软件控制, 请访问 MassLynx 主页, 并从 Run (运行) 菜单中选择 Start (开始) 。

当样品组完整时, 在下表中输入相应的结果。 保留时间再现性 (三次重复) 峰 2- 乙酰基呋喃 乙酰替苯胺 苯乙酮 苯基乙基酮 对羟基苯甲酸丁酯 苯甲酮 苯戊酮 峰保留时间平均值 标准差 可接受的标准差 ≤1.5 秒 ≤1.5 秒 ≤1.5 秒 ≤1.5 秒 ≤1.5 秒 ≤1.5 秒 ≤1.5 秒

3.

查看梯度性能报告。 实现以下条件时, 梯度性能测试结果为 “通过” :

执行梯度性能测试

4-9

? ?

峰为对称形式, 且经过积分和正确标识。 (请将报告中的色谱与下面的样品色谱 进行比较来确定该条件。 ) 峰保留时间显示的标准差小于或等于 2.0 秒。 (请查看已完成的表格来确定该条 件。 )

样品梯度性能测试色谱
0.34 0.32 0.30 0.28 0.26 0.24 0.22 0.20 0.18 AU 0.16 0.14 0.12 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 -0.02 0.50 1.00 1.50 2.00 分钟 2.50 3.00 3.50 4.00 苯戊酮 苯丙酮 2- 乙酰基呋喃 乙酰替苯胺

苯乙酮

请注意,这是一个具有代表性的色谱。由您的系统产生的结果可能稍有不同。

4-10

检验系统操作

对羟基苯甲酸

苯甲酮


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