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食品生物化学实验备课笔记


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实验一 马铃薯淀粉的显色和水解
一、实验目的和要求 1、了解马铃薯淀粉的组成,进一步了解淀粉的性质及淀粉水解的原理和方法。 2、如何验证淀粉是否水解及其水解的条件和产物。 二、实验原理 1、淀粉与碘的反应 直链淀粉遇碘呈蓝色,支链淀粉遇碘呈紫红色,糊精遇碘呈蓝紫、紫、 橙等颜色。这些显色反应的灵敏度很高,可以用作鉴别淀粉的定量和定性的方法,也可以用它来 分析碘的含量。 直链淀粉是由 α-葡萄糖分子缩合而成的螺旋体,每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露在螺旋外。 碘分子跟这些羟基作用,使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位。碘跟淀粉的这种作用叫做包合作 用,生成物叫做包合物。 在淀粉跟碘生成的包合物中,每个碘分子跟 6 个葡萄糖单元配合,碘分子处在螺旋的轴心部 位。 淀粉跟碘生成的包合物的颜色,跟淀粉的聚合度或相对分子质量有关。在一定的聚合度或相 对分子质量范围内,随聚合度或相对分子质量的增加,包合物的颜色的变化由无色、橙色、淡红、 紫色到蓝色。例如,直链淀粉的聚合度是 200~980 或相对分子质量范围是 32 000~160 000 时, 包合物的颜色是蓝色。分支很多的支链淀粉,在支链上的直链平均聚合度 20~28,这样形成的包 合物是紫色的。糊精的聚合度更低,显棕红色、红色、淡红色等。下表就是淀粉的聚合度和生成 碘包合物的颜色。 表 1-1 淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色 34.7 葡萄糖单 3.8 7.4 12.9 18.3 20.2 29.3 以上 位的聚合度 包合物的 颜色 无色 淡红 红 棕红 紫色 蓝紫 色 蓝色

淀粉跟碘生成的包合物在 pH=4 时最稳定,所以它的显色反应在微酸性溶液里最明显。 2、淀粉的水解 淀粉是一种重要的多糖,是一种相对分子量很大的天然高分子化合物。虽 属糖类,但本身没有甜味,是一种白色粉末,不溶于冷水。在热水里淀粉颗粒会膨胀,有一部分 淀粉溶解在水里,另一部分悬浮在水里,形成胶状淀粉糊。淀粉进入人体后,一部分淀粉收唾液 所和淀粉酶的催化作用,发生水解反应,生成麦芽糖;余下的淀粉在小肠里胰脏分泌出的淀粉酶 的作用下,继续进行水解,生成麦芽糖。麦芽糖在肠液中麦芽糖酶的催化下,水解为人体可吸收 的葡萄糖, 供人体组织的营养需要。 反应过程为: 6H12O5) (C m→(C6H10O5)n→C12H22O11→C6H12O6 淀粉 糊精 麦芽糖 葡萄糖 葡萄糖是淀粉最重要的下游产品之一,工业生产中常常使用玉米淀粉水解来加工结晶葡 萄糖。 三、试剂和器材 1、器材:试管夹、量筒、烧杯各一只、白瓷板一块、试管一支、水浴锅。 2、试剂:马铃薯淀粉及 0.1%溶液 、10%NaOH 溶液、20%H2SO4 溶液、10%Na2SO4 溶液、 稀碘液、乙醇、2%CuSO4 溶液。 四、操作步骤 1、淀粉与碘的反应 ①取少量淀粉于白瓷板空内,加碘液两滴,观察颜色。 ②取试管一支,加入 0.1%的淀粉 6ml,碘两滴,摇匀,观察颜色变化。另取试管两支,将此 第 1 页

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淀粉均分为三等份并编号做如下实验: 1 号管在酒精灯上加热,观察颜色变化。然后冷却,又观察颜色变化。 2 号管加入 10%NaOH 溶液几滴,观察颜色变化 3 号管加入乙醇几滴,观察颜色变化。 记载上述实验过程和结果,并解释现象。 2、淀粉水解实验设计 设计实验方案,试验淀粉能不能水解,水解的条件和产物是什么?怎样判断淀粉是否水解 了? (1) 在试管 1 中加入 0.5g 淀粉和 4ml 水,在试管 2 中加入 0.5g 淀粉和 4ml 20%的硫酸溶液。 分别加热试管 3~4min。 (2) 把试管 2 中的一部分溶液倒入试管 3 中,留作下一步实验用。 (3) 向试管 1 和试管 2 中加入几滴碘溶液,观察现象。发现试管 1 的溶液呈蓝色(淀粉遇碘 变成蓝色) ,试管 2 无明显现象。不同现象的原因是:淀粉在酸性条件并加热的条件下发生了水 解反应。 (4) 向试管 3 中滴入 10%的碱液,中和溶液中的硫酸,把溶液调呈弱碱性,使溶液的 PH 值 约为 9~10。 (5) 另取一只试管 4 加入 3ml 氢氧化钠溶液, 并向其中滴入 4 滴 2%的硫酸铜溶液, 立即有蓝 色的氢氧红铜沉淀生成。 再取试管 3 中的水解液 1ml 滴入, 振荡混合均匀后, 用酒精灯加热煮沸, 溶液颜色常有蓝色——黄色——绿色(黄蓝两色混合)——红色等一系列变化。最终有红色沉淀 生成。原因是氢氧化铜被还原生成红色难溶于水的氧化亚铜。 实验结论: 淀粉在酸的催化作用下,能发生水解;淀粉的水解过程:先生成分子量较小的糊精(淀粉不 完全水解的产物) ,糊精继续水解生成麦芽糖,最终水解产物是葡萄糖。 注意事项: 淀粉水解的中间产物糊精(有分子量较大的红糊精和分子量较小的白糊精) ,对碘反应的颜 色变化是:紫色—棕色—黄色,若淀粉水解不彻底,也会有不同的颜色出现。 问题思考: 1、试管 1 为什么变成了蓝色?试管 2 为什么无明显现象?为什么?(试管 1 中的淀粉未水 解,淀粉遇碘变成蓝色;试管 2 中淀粉在酸的催化作用下水解了,所以无明显现象;不同现象的 原因是:淀粉在酸性条件并加热的条件下发生了水解反应。 ) 2、如何验证淀粉没有还原性?(提示:不能发生银镜反应或者不能还原氢氧化铜) 3、实验延伸设计:如何验证唾液酶对淀粉水解的催化作用?(注意事项:用唾液作催化剂 水解淀粉时, 温度不得超过 45 摄氏度, 因为温度过高, 唾液酶易失去活性, 最适宜的温度是 37—40 摄氏度。 )

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实验二 植物油脂酸价的测定
一、实验目的和要求 1.初步掌握测定植物油脂酸价的原理与方法。 2.了解测定油脂酸价的意义。 二、实验原理 油脂在空气中暴露过久,部分植物油脂会被水解产生游离脂肪酸和醛等物质,并且这些物质 具有剌激性气味,使油脂产生酸败。酸败的程度是以水解产生的游离脂肪酸的多少为指标的,常 以酸价(或酸值)来表示。同一种油脂若酸价高,则说明油脂水解产生的游离脂肪酸就多。 酸价是指中和 1g 脂肪中游离脂肪酸所需的氢氧化钾的毫克数。酸价越高,油脂的质量也越 差。 三、试剂和器材 1.锥形瓶(250mL) 。 2.量筒(50mL) 。 3.碱式滴定管(250mL) 。 4.花生油或菜油 5.1:1 乙醇——乙醚混合液 6.0.1mol/L 氢氧化钾标准溶液 7. 酚酞-乙醇溶液 四、实验步骤 1.准确称取 1~3g 菜油于 250 mL 锥形瓶中。 2.在瓶内加入乙醇—乙醚混合液 50 mL,充分振动,使油样完全溶解成透明溶液。 待油样完全溶解后,加入 1%酚酞指示剂 1~2 滴,立即用 0.1mol/L 氢氧化钾标准溶液滴定至 溶液呈微红色(放置 30S 内不褪色)为终点,并记录用去的氢氧化钾的体积,并按下式计算酸价。 消耗氢氧化钾毫升数× 氢氧化钾标准溶液浓度× 氢氧化钾分子量 酸价== ———————————————————————— 油脂样品的克数 五、思考题 1.测定植物油脂酸价时,装油的锥形瓶和油样中均不得混有无机酸,这是为什么? 2.为什么酸价的高低可作为衡量油脂好坏的一个重要指标?

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实验三 氨基酸的纸上层析
一、实验目的和要求 1、学习纸层析法的基本原理。 2、掌握纸层析法对混合氨基酸进行分离和鉴定的技术。 二、实验原理 纸层析法属于分配层析法的一种,是以滤纸作为惰性支持物。滤纸纤维上分布大量的亲水性 羟基,因此能吸附水作为固定相,通常把有机溶剂作为流动相。将样品在滤纸上(此点称为原点), 用有机溶剂进行展层时,样品中的各种溶质即在两相溶剂中不断进行分配。由于各种溶质在两相 溶剂中的分配系数不同,因而不同溶质随流动相移动的速率不等,于是从点样的一端向另一端展 开时,样品中不同溶质被分离开来,形成距原点距离不等的层析点。样品被分离后在纸层析图谱 上的位置,是用比移值 Rf 来表示的 在一定条件下(如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变),某物质的 Rf 值是一个常数,借 此可作定性分析依据。本实验只利用纸层析分离氨基酸。 三、试剂和器材: (1) 层析缸(可用标本缸代替)。 (2) 层析滤纸(新华一号滤纸)。 (3) 喷雾器、电吹风、三角板、铅笔、毛细管(可用微量注射器代替)。 (4) 氨基酸标准溶液:1%的甘氨酸、赖氨酸、色氨酸、组氨酸、缬氨酸、脯氨酸。 (5) 混合氨基酸溶液:将 1%的甘氨酸、赖氨酸、色氨酸、组氨酸、缬氨酸、脯氨酸也按 1% 浓度制成混合溶液。 (6) 展层剂甲:正丁醇:80%甲酸:水=15:3:2 (体积分数) 展层剂乙:正丁醇:12%氨水:95%乙醇=13:3:3 (体积分数) (7) 色剂: 0.1%茚三酮-丙酮溶液 (取 0.1g 茚三酮溶于 100mL 无水丙酮, 贮于棕色瓶中待用。 )

四、操作步骤: (1) 取滤纸二张 (12cm× 12cm),按图要求画好平行线和样点并在样点上标号。 (2) 点样 用毛细管依次点上氨基酸标准样液和混合液于样点并记录各样点所点的氨基酸。 点样时一定要注意:第一,样点直径控制在 3mm 以内;第二,每样点需重复点 3 次,但每次需 经干燥后方可再点,为了快速干燥,可用电吹风在较低档温度下风干。点好样的滤纸卷成筒状, 用透明胶纸黏接,要注意在卷纸筒时,两纸不能搭接。 (3) 展层 在层析缸内放好展层剂甲, (展层剂液面高度约 1cm), 将一张点好样的滤纸小心地 移入层析缸,点样端浸入展层剂甲中,要特别注意不要使样点浸入展层剂。盖好层析缸。当看到 展层剂到达画定的溶剂前沿线时,取出滤纸,用较低档温度电吹风吹干。同时将另一张点好样的

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纸照上法放入层析,此纸只此一次单向层析。 将吹干的滤纸转 90° ,再卷筒状,用透明胶固定,放入另一个放置有展层剂 乙的层析缸内展层。展层完毕吹干。此纸则为双向层析。 (4) 显色 将上述单向层析和双向层析的滤纸经吹干后用喷雾器把茚三酮溶液均匀地喷在纸 上(不要喷的太多),取下纸,放入 65℃烘箱中显色数分钟,或用电吹风热风吹干显色亦可。 (5) 计算各氨基酸的 Rf。 五、思考题: (1) 你是怎样理解本实验为什么要设计单向层析和双向层析的? (2) 本实验做单向层析时是使用展层剂甲,是否可以用展层剂乙,为什么? (3) 计算各 Rf,并说明混合氨基酸溶液中含有一些什么氨基酸?

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实验四 蛋白质的显色反应
一、实验目的和要求 1、 学习几种鉴定氨基酸与蛋白质的一般方法及其原理。 2、 学习和了解一些鉴定氨基酸的特殊颜色反应及其原理。 二、实验原理 (1)双缩脲反应 当尿素加热到 180℃左右时,2 分子尿素发生缩合放出 1 分子氨而形成双 缩脲。双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的紫红色化合物,这一呈色反应称为双缩脲反 应。

蛋白质分子中含 有 多 个与双缩脲相似的 键,因此也具有双缩脲的颜色反应。借此可以鉴定蛋白质的存在或测定其含量。应当指出,双缩 脲反应并非蛋白质的特异颜色反应,因为凡含有肽键的物质并不都是蛋白质。 (2)茚三酮反应 蛋白质与茚三酮共热,产生蓝紫色化合物,此反应为一切蛋白质及 α-氨基酸(除脯氨酸和羟 脯氨酸)所共有。含有氨基酸的其他化合物也呈此反应。 该反应十分灵敏,1:1500000 浓度的氨基酸水溶液就能呈现反应。因此,此反应广泛用于氨 基酸的定量测定。 (3)黄蛋白反应 蛋白质与浓硝酸反应,变成黄色,这个反应称为黄蛋白反应。 三、试剂和器材 (1)试剂 ①鸡蛋清②尿素③10%NaOH 溶液④1%硫酸铜溶液⑤0.1%茚三酮-乙醇溶液⑥浓硝酸⑦氨水 (2)仪器 试管及试管夹、酒精灯 四、操作步骤 (1)双缩脲反应 ①取一支干燥试管,加入少量尿素,用微火加热使之熔化,待熔化的尿素开始变硬时停止加 热。 此时, 尿素已缩合为双缩脲并放出氨气 (可由气味辨别) 待试管冷却, 。 加入约 1mL10%NaOH 溶液,振荡使其溶解,再加入 1 滴 1%硫酸铜溶液。混匀后观察出现的粉红色。 ②另取 1 支试管,加入稀释过的蛋清溶液 2 滴,再加入 5 滴 10%NaOH 溶液摇匀,然后再加 入 1 滴 1%的硫酸铜溶液。摇匀观察其颜色变化。 注意事项:加入的硫酸铜不可过量,否则会产生蓝色的氢氧化铜,从而掩盖了双缩脲反应的 粉红色。 (2)茚三酮反应 ①取 1 支试管,加入稀释的蛋清溶液 4 滴,0.1%茚三酮-乙醇溶液 2 滴,混匀后在小火上加 热煮沸 1~2min,放置冷却,观察颜色变化。 ②另取 2 支试管,用 0.5%的酪蛋白和 0.5%的甘氨酸溶液代表蛋白溶液,进行茚三酮反应, 观察颜色变化。 (3)在试管里加入蛋清溶液 2 毫升,加浓硝酸 0.5 毫升,振荡,然后在火焰上加热煮沸,观 察试管中的变化。冷却后加入过量的氨水或 20%的氢氧化钠溶液,再观察试管的颜色变化。 第 6 页

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五、思考题 通过实验谈一谈你对蛋白质的颜色反应有何认识。

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实验五 木聚糖酶活性的测定
一、实验目的 通过本实验,使学生掌握α -淀粉酶活力测定的基本原理、方法和操作技能。 二、实验原理 木聚糖酶 ( xylanase,EC.3.2.1.8 ) 以内切方式降解木聚糖主链架的 β .1,4- 木糖苷键,其水 解产物主要是木二糖和木寡糖,以及少量的木糖和阿拉伯糖.能将 3,5 一 二硝基水杨酸中硝基还 原成橙黄一棕红色的氨基化合物,在一定范围内,还原糖的量和反应液的颜色强度呈比例关系, 利用比色法测定其还原物生成量来表示酶的活力。 三、实验试剂和仪器 (一)试剂 1.木聚糖酶 (样品) 2.缓冲液 甲液: 称取磷酸氢二钠 ( N a 2 H P 0 4 .12H2 O)71.62g,用蒸馏水溶解,并定容至 1000ml; 乙液: 称取柠檬酸( c 6 H 8 O 7 . H 2 0 )2 1.0 1g , 用蒸馏水溶解, 并定容至 1000ml。 3.pH5.0 缓冲液:取甲液 515m l,加乙液 485 m l,混合均匀,用 p H 计校正。 4.底物 采用 1%木聚糖溶液, 精确称取木聚糖( From oat Spelts , 美国 sigma 公司出品) 1.0000g( 精确至 0.0001g ) , 加入 80mlp H 6.5 磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液,水浴中加热至溶 解, 冷却后转入 100m l 容量瓶中, 用缓冲液定容至刻度, 贮存于冰箱内备用( 一般最多使用 3 天) 。 5.DNS 试剂: 取酒石酸钾钠 182 g, 溶于 500ml 蒸馏水中, 加热。于热溶液中依次加入 3,5二硝基水杨酸 6.3g ,2mol/L 氢氧化钠 262m l ,苯酚 5g,亚硫酸钠 5g,搅拌至溶。冷却后用 蒸馏水定容至 1000ml。混匀,过滤, 贮存于棕色瓶中, 放置 1 周后使用. 6. 1%木糖标准溶液 称取预 先于 105 ℃干燥至恒重的木糖 1.0000g,精确至 0.0001g,用蒸馏 水溶解后定容至 100ml, 即为 1%浓度的木糖标准溶液。 (二)仪器和设备 恒温水浴锅,分光光度计,精密 p H 计,电子分析天平。 四、实验步骤 标准曲线制作 分别吸取 1%木糖标准溶液 1.0 ,2.0,3.0 ,4.0,5.0,6.0 ml 于 5 0ml 容量瓶中, 用蒸馏 水定容至刻度, 稀释成浓度分别为 200,400, 600,800, 1000,1200 ug/ml 木糖的标准液。各取不同浓度的稀标准液 0.5ml 于试管中, 加入 p H6.5 磷 酸氢二钠一柠檬酸缓冲液 1.5ml, 再加入 D N S 试剂 3 .0 m l ,于沸水浴中沸腾 5 min, 取出 后加入蒸馏水 10 ml ,摇匀。以蒸馏水 0.5ml 代替木糖稀标准液作为对照。冷却后, 用 10mm 比色皿, 在 波长 550nm 处用分光光度计分别测定其吸光度 A 。以 A 为纵坐标, 相对应的木糖 浓度为横坐标, 绘制标准曲线或计算回归方程。 待测酶液的制备 精确称取酶粉 2.0000g , 加蒸馏水 40ml, 置于 4 0 ℃水浴中浸提 30m i n ( 期间搅动 2 ~ 3 次),然后用新华 1 号 滤纸过滤( 弃去初滤液),滤液再经适当稀释后供测定( 稀释至被测酶液 A 在 0.2~0.5 范围内为 宜)。 比色测定 精确吸取待测稀释酶液 0 .5ml( 每个样品 3 支平行试管) , 置于 4 0 ℃水浴预热 2min , 加 入同样经预热的,用 p H 5.0 缓冲液配制的 1%木聚糖溶液 1.5 ml,立即计时,于 40 ℃水浴 第 8 页

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精确反应 10 mi n , 迅速加入 D N S 液 3.0 ml 终止反应,然后在沸水浴中沸腾 5min ,取出 后加入蒸馏水 10ml,摇匀。同时作空白对照, 在待测稀释酶液 0.5ml 中先加入 D N S 液 3.0m l 使酶失活,然后加入 1%木聚糖溶液 1.5ml, 同样置 4 0 ℃水浴 10min , 取出后在沸水浴中沸 腾 5min , 加入蒸馏水 10ml 摇匀。以后步骤同于标准曲线制作,以空白对照为参比测定样品吸光 度。 酶活计算计算公式 x=N*c / Mr/ 0.5×1 0 式中: x ~样品的酶活力,u/g ; c ~由样品的平均吸光度 A 从标准曲线或 回归方程求得的相对应的木糖量, t z g ; n ~样品的稀释倍数; 0.5----参与反应的酶液量,ml ; 10-----反应时间 ,min; M r 木糖的相对分子质量 150.18。

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实验六 橙汁饮料中维生素 C 的测定
一、实验目的和要求 1、掌握 2,6-二氯酚靛酚测定维生素 C 的原理和方法。 2、进一步熟练掌握滴定操作。 二、实验原理 染料 2,6-二氯酚靛酚在酸性中呈红色,被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原 2,6-二氯 酚靛酚后,本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时,一定量的样品提取液还原标准 2, 6-二氯酚靛酚的量与样品中所含维生素 C 的量成正比。 反应式如下:

三、试剂和器材 器材:滴定管、锥形瓶。 试剂:1、2%草酸溶液:溶解 20g 草酸结晶于 200 mL 水中,然后稀释至 1000mL。 2、1%草酸溶液:取上述 2%草酸溶液 500mL,用水稀释至 1000mL。 3、0.000167mol/L 碘酸钾标准溶液:精确取干燥的碘酸钾 0.3567g,水稀释至 100mL,取出 1mL,用水稀释至 100mL,此溶液 1mL 相当于抗坏血酸 0.088mg。 4、抗坏血酸标准溶液:准确称取 20mg 抗坏血酸,溶于 1%草酸溶液中,移入 l0mL 量瓶中, 并用 1%草酸溶液稀释至 100 mL,混匀,置冰箱中保存。 使用时吸取上述抗坏血酸 5mL,置于 50 mL 容量瓶中,用 1%草酸溶液定容之。此标准使用 液每毫升含 0.02mg 维生素 C。 标定:吸取标准使用液 5mL 于三角烧瓶中,加入 6%碘化钾溶液 0.5mL,1%淀粉溶液 3 滴, 再以碘酸钾标准溶液滴定,终点为淡蓝色。 计算如下: 抗坏血酸浓度(mg/mL)= ( V1× 0.088)/V2 V1:滴定时所耗碘酸钾标准溶液的量(mL) V2:所取抗坏血酸的量(mL) 0.088:lmL 碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量(mg/mL) 5、2,6-二氯靛酚溶液:称取碳酸氢钠 52mg,溶于 200mL 沸水中,然后称取 2,6-二氯靛 酚 50mg,溶解在上述碳酸氢钠的溶液中,待冷,置于冰箱中过夜,次日过滤置于 250ml 量瓶中, 用水稀释至刻度,摇匀。此液应贮于棕色瓶中并冷藏,每星期至少标定 1 次。 第 10 页

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标定方法:取 5mL 已知浓度的抗坏血酸标准溶液,加入 1%草酸溶液 5mL,摇匀,用上述配 制的染料溶液滴定至溶液呈粉红色 15 秒不褪色为止 每毫升染料溶液相当于 Vc(mg)=滴定度(T)=(C× 1)/V2 V 式中: C:抗坏血酸的浓度(mg/mL) Vl:抗坏血酸的标准溶液量(mL) V2:消耗染料溶液量(mL) 6、1%淀粉溶液(可溶性淀粉,用热水溶解) 。 7、6%碘化钾溶液。 四、操作步骤 1、称取适量(固体 50~100.0g)样品,加等量的 2%草酸溶液,倒入组织捣碎机中捣成匀浆。 称取 10.00~30.00g 浆状样品(使其含有抗坏血酸 1~5mg) ,置于小烧杯中,用 1%草酸溶液将样 品移入 100 mL 容量瓶中,并稀释至刻度,摇匀。 2、将样液过滤,弃去最初毫升滤液。若样液具有颜色,用白陶土(应选择脱色力强但对抗 坏血酸无损失的白陶土)去色,然后迅速吸取 5~10mL 滤液,置于 50mL 三角烧瓶中,用标定的 2,6-二氯靛酚染料溶液滴定之,直至溶液呈粉红色于 15 秒内不褪色为止。 五、结果计算 样品中抗坏血酸含量=V× 100/W,单位为 mg/100mL 或 100g T× V:滴定时所耗去染料溶液的量(mL); T:lmL 染料溶液相当于抗坏血酸标准溶液的量(mg); W:滴定时所取的样液中含样品量(g 或 mL)。 六、注意事项 1、样品取样后,应浸泡在已知量的 2%草酸溶液中,以免发生氧化,使抗坏血酸受损失。 2、对动性的样品可用 10%三氯醋酸代替 2%草酸溶液提取;对含有大量 Fe 的样品,如储藏 过久的罐头食品可用 8%醋酸溶液代替草酸溶液提取。 3、整个操作过程要迅速,防止还原型抗坏血酸被氧化。 4、若样品滤液无色,可不加色陶土。须加白陶土的,要对每批新的白陶土测定回收率。加 白陶土脱色过滤后,样品要迅速滴定。 5、滴定开始时,染料溶液要迅速加入,直至红色不立即消失而后尽可能一滴一滴地加入, 并要不断振动三角烧瓶, 直至呈粉红色于 15 秒内不消失为止。 样品中可能有其他杂质也能还原 2, 6-二氯靛酚,但一般杂质还原该染料的速度均较抗坏血酸慢,所以滴定时以 15 秒钟红色不褪为 终点。 七、思考题 1、2,6-二氯酚靛酚测定维生素 C 的原理是什么? 2、滴定时需要注意哪些事项?

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