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高效液相色谱—核磁共振仪联用技术在耐哌地尔杂质检测中的应用


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第 嚣 卷  20 年 7 01 月 

分析化学 (E X  U X E 研究简报  FN I A U ) H
Ci s  u a A a td 0H岫 h ee om l n J   ,l ̄   y  

第7 期 
7 6—7 8 9 9 <

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高效液相 色谱一 核磁 共振 仪联 用 技术  在 耐 哌地 尔 杂质检 测 中的应 用 
杨 春 司伊康 贺 文 义 

( 中国i学科学院、 f , 中国协和 i科大学药物研 究所 . f , 北京 1 00  0 5) 0
摘 要 用高效液相色谱. 棱磁共 振(Wt -N 联用技术 中的连续流动和停止 流动两种模式对 萘哌地  t  ̄ C M)

尔中杂质进行检测 , 根据 删 R ’  C S l . H O Y谱完成 了主要杂 质 1 H . 萘环. 丙三醇 结构 鉴定 H I N P ̄.MR是  解决台成药物 中杂质结构确证 的简便、 快速方法  关键词 高效液相色谱. 棱磁共振 , 萘哌地尔 

I 引  

言 

随着核磁共振仪灵敏度 的提高, 抑制 溶剂峰方法 的成熟 , 高效液相 色谱. 核磁 共振仪联 用技术  ( PCN a P广泛应用于药物代谢 和植物化学的研究中  , H I - ̄ ) . . 为混合物的即时分离 、 鉴定 提供 了一种  简便 、 快速 、 准确的方法。检测药物中的杂质是这一技术应用领域之一, 这里报道采用 H I N R方法  P ̄.M 对杂质含量在 9 %水平的药物杂质检测的结果。  

2 实 验 部分 
21 高效藏帽色谱  . 所有的高效液相色谱采用 vfl aa 公司的 P sr 3 高效液相色谱仪 , i1 m m- 0 2 分析柱 为 I ri D - 柱( . n tl S es  3 46 O   ID × 5  m 5 ) . 、 20m .   。萘哌地尔样品用乙腈溶解 . 浓度为 5 /。连续流动的进样量为 2 L停止流动   L g 0 ' 的进样量为 5  。检测器为 Vrn mt- 0 0 aa  sr 3 二极管阵列检测器 . l P a3 紫外检测波长为 20n 。H L 分离  1 m FC   条件为乙腈 : 磷酸缓 冲溶液 = 5 3(H78 8O 。 6 : p  .— .) 5  
22 核磁 共振  .

所有的图谱均在 IO A50 N V - 核磁共振仪上完成。普通 的、 M 0 H N R测定采用选择开关探 头, 内标为  r S 以 C C 为溶剂 , I . Dl M 3 谱宽 60H , 00 z累加次数为 3 次。H L -M 2 P CN R采用反相 6 0止 流动探头 。W T脉  E 冲序列抑制乙腈和重水的溶剂峰 , 同时抑制乙腈 的卫星峰。高效液相色谱. 核磁共振氢谱 中以乙腈 的溶  剂峰 8 . 20为标准。fH C S ‘-  O Y图采用 wE  I' 1 脉冲序列 . 弛豫延迟为 I , d l   采样时间为 025 , 和  s .    0s R 域谱宽皆为 100OI n= 5 , c m n= 2 , 0 ̄ .I ,t 26 i r et 18总采样时间为 1 。 - z ne 2   h

3 结 果与 讨论 
萘哌地尔是一种新型抗高血压药物。H L 检测发现产物中存在一个主要杂质峰 , PC 含量为原型药物  的 9O .%。为确证杂质的结构, 采用 H I -M PE N R联用技术中的连续流动模式对高效 液相色谱分离 的色  谱峰进行连续监测。H L 和 N R假 二维图谱如图 1 PC H M 所示。从图中观测到 l 95  n时萘 哌地尔  = .0n i f 的核磁信号在 8 . — . 和 8 .— . 区域 ,而 l 54 mn   5 65 8 45 25 = .1 l时杂质 的核磁信号在 8 . 、 和 8 .  2 8 8  6 48  

42 . 区域 , 后者的信号较弱, 而其它杂质则几乎看不到有核磁共振信号。图中其他峰为乙腈 和未完全  氘代的重水信号。  


理论上停止流动模式下测定’N R信号比连续流动模式下测定时所需样 品量少 , HM 但为获得杂质的  H HC S 2  O Y谱 , 停止流动模式进样量改为 5 止 , 0 停止流动检测的图谱如图 2 所示。与 E 95  i原型  = . mn 0
2o - - 收祷  ̄ o4 - 接受  oo  ̄ 2 4 5 2 1}o o i5 本文 系国家 自拣科学基金资助项目( o3 N . 盯嘲 ) 9  

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第7 期 

杨 春等: 高效液相 色谱. 棱磁共振仪联 用技 术在 耐哌地尔杂质检测中的应用 

77 9 

药相 比, =54 m 的主要杂质的  N R ‘ .1 f  m HM     中在 8 . 40   0 . 没有信号峰 , 2 说明杂质结  ^ 构 中不含有赈 嚎 环 . 87—8区域 中没 有  且   苯环质子的信号 . 只有萘环上 7 个质子信  号, 证明了杂质分子中不含有赈嗪环侧链  结构。根据 8 . — .5 5   3 47 处 个质子信号  4 4 峰推测为丙三醇梗链。 -  O Y 图 3 谱  j     C S( ) HH 中的相关信号显示 8 . (d J 10 z   3 d . =1 .1 , 4 6 t 
2 O ) 84 5 ( d J 1 01. .1 ) .  和   .0 d , =1 .1 3 0 z 为  - z t

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丙三醇侧链中末端亚甲基氢 , .5 d , 8 6 (d J 4  
核磁共振氢谱  l. t,. ) 10 z 5 为丙在醇中 I 1 4   位亚甲基中  图 1 连续流动高效滩相色谱一 1 Tpcl   yi   a 如Ia     d_   a I∞eu I 1 ∞ 咖 (   )H Ⅲ 一     的1 个质子 , 另外 1 个质子和 2 位次甲基中 



的质子在 8 . (   7 多重峰)是由于 1 4 3 。 位与 3   位 的亚 甲基 与 手性 次 甲基 碳 原子 相 连 , 为 
前 手性 分子 所致 。   萘 哌地 尔 由三 元环 氧部 分 和哌 嗪部 分 

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A 为萘嚷地尔, 为主要 的杂质  4 7 处信号 为水峰 《 B .3 A硼 B j 。    叩 洲 B
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图 2 停止流动时主要 杂质 的高效液相 色谱. 核磁共振 
谱 
f .    2 印   n 田 L H pcr frB w   set.o    e

01∞ 和 8 . 为乙腈 中古有的丙骑的信号。 . 来 自于礴   .  4 2 。 883 9

酸 缓冲瞎j( e 咕 并 葭 t 棚 一   12 曲d . a de nmu  h .0   加 r u∞a ipt 2 e i
{ l j  i te 越  啊 Ⅱd n h e ?d . n  8 8 3 ? 由    .9 坤 p l  Il oB —|  

图 3 停止流动时主要杂质 的‘-  O Y谱  H‘ C S H


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3 ‘ .  O Yd ( H I C S 2  H

B  )

螂  

台成获得 . 产物中的杂质可能由于三元氧环不稳定  易于开环而产生( 如图 4 。与三元氧环相比 . ) 由于开环后产生的杂质不易受到哌嚷部分进攻, 而成为夹 

杂的杂质。值得一提的是 , 此杂质是萘哌地尔在体内代谢产物之一” 。     在药物杂质检测中, PCM H L .s测定和 } cNf 测定都是简便 、 删L./ ̄ ' , l 快速 的方法 , I L — 但 " Cmm 联用技  I P
术中 N R测定不受 H L 分离过程中使用的缓冲盐溶液的限制 , M PC 并可 以提供大量的结构信息。本实验  建立了对杂质含量为 9 %的样品进行 H L -M P CN R测定的方法 , 10 20p 样品完成 了杂质的结构鉴  用 0 — 5  - g
定 与含 量 的测定 。  

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分 析 化 学 

第 2 卷  9

一 一  

 

”  

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c ]   O H 主产物萘哌地尔{  
Na o  ̄ ] hp  

+ 

l a t   rn fo i ] mp  ̄ y 0  at pdi  

剁产物 ( ) B 

图 4 萘派地 尔及其副产物舶产生过程 
Fg4 Nfpd n tm i m t i.  a iiadi a m l s ni  y  

Re   I 盘 e 
1 S r M,Hc ln   p  f a nM ,D c skP,Nc o ̄nJK,W io I , P  n ve a   t ih L   o Ln  ̄ . ^ .   .A a . 9 2 0:0 —6 5 n 1 ,I 9 ,1 6 1 O  

2 Rbn  K S i      0 e B   , m t RJ .a J h  J  删

 . 9 4 67 3 5 8   ,19 , 7 :8 —3 9
. 9 3, 2 8 3—8 6 ,1 9 3 6:0 0 

3 K t hrB,g, l .Fesh ae ,Ni c G rh   us e c ,e  g J li hu rI e h  A c  c b

A piaino  i l e oma c  q i  r mao rp yCo pe   p l t  f I lP r r n eLiudCh o tga h   u l c o I g  f d
wi   de r Ma n t   s n n e S e to c p  o   t Nu a   g ei Reo a c   p cr s o y f r h c t e I e t c t n o  mp  ̄t n Na tpd l h  d n i a i   fI u y i   f ii i f o o  

Y n  I   a g 0l m,

Yl i mg e We a ,H    

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Ab ta t U i g s p e — o   n   n f w hg   e oma c   iud c rma ga h - u la   a n t   sn l e sr c   s   t p d f w a d o - o   ih p r r n e l i  h o t r p y n c e r m g ei r o  ̄ e   n o l l f q o co

set s p H L — M )t dt t gt   nl yt t  rgo n f p i h t c r ad t  ecnaeo  pc oc y( P C N R o e c n  ef a sn ecdu f a oi l es ut e n   epr t  f r o   ei h i   h i   t d ,t r u   h e g t   pry i nf p i W Sdt m nd吣 H N  n H     O Y set 11 m i i pry 1 ah   — h i ui   a oi l a e r i em t n t d    e e N R ad - C S  pem. 1   a  m ui , - p d l H e n t .  
gye o. w s d t td I L — M R i a s l  n   o v ne t n h   o   h  i n f a i   f te i u i   lc r 1 a   e c e . - C N e / P   s   i e a d c n e in    ̄,e fr t e & f e t n o  h   mp r y   mp d i o t

s u tr n tesnh t  rg  t cuei h y te cdu . r i
Ke wo d   H g   r r a c  i i  h m t ga h - u la  a n t  e o a c  p cr so y a t i i y rs ih p f m n e l d c ra o rp y n c e rm g ei ls n e s t c p" e o u q o c' n e o ,n f p d l o  
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