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蛋白质浓缩问题——超滤浓缩管的使用及保存


二、离心超滤管浓缩样品
2.1 浓缩样品
1、要浓缩的样品含盐量必须 0.3M 以上,含盐量低的样品须补加到 0.3MNaCl。 2、在内管(附有 3KD 膜)中加入 500?l 样品,将内管套入外管。 3、对称放置离心管,14520rpm(即 14000g)离心。 (离心 5min 约浓缩 2 倍,10min 约 4 倍, 15min 约 6 倍,20min

约 8 倍,30min 约 10 倍) 。 4、离心结束后,将内管倒置套在另一个干净的离心管呢,3880rpm 离心 min 收集浓缩后的 样品。或者用移液器直接吸出内管中的样品。

2.2

浓缩管使用后的处理和保存 浓缩管使用后的处理和保存

1、使用完的浓缩管,立即加入 500?l 含 1MNaCl 的缓冲液(此缓冲液与浓缩样品的缓冲液 一致) ,8000rpm 离心 20min。 2、甩净内管中的盐溶液,将内管放入超纯水中浸泡 1h。 3、内管加入超纯水 500?l,8000rpm 离心 5min。 4、甩净内管中的水,加入 500?l0.2MNaOH,8000rpm 离心 20min。 5、甩净内管中的 NaOH 溶液,用超纯水再 8000rpm 离心 5min。 6、甩净内管中的水,放入含 0.2-0.5‰NaN3 的生理盐水中。 7、外管用自来水洗净后,用超纯水冲洗干净,晾干。


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