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植物组织中可溶性糖与淀粉的测定


植物组织中可溶性糖与淀粉的测定
一、蒽酮法测定可溶性糖
【仪器与用具】 分光光度计;电炉;铝锅;20ml 刻度试管;刻度吸管 5ml 1 支,1ml 2 支;记号笔;吸 水纸适量。 【试剂】 1.蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮 1g,溶于 50ml 乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在 黑暗中可保存数星期,如有结晶析出,可微热溶解。 2.浓硫酸(比重 1.84) 。

【方法】 1.标准曲线的制作 取 20ml 刻度试管 11 支,从 0~10 分别编号,按表 24-1 加入溶液和水。
表1 管 号 0 0 2.0 0 各试管加溶液和水的量 3~4 0.4 1.6 40 5~6 0.6 1.4 60 7~8 0.8 1.2 80 9~10 1.0 1.0 100

1~2 0.2 1.8 20

100μg/ml 蔗糖液(ml) 水(ml) 蔗糖量(μg)

然后按顺序向试管内加入 1ml 9%苯酚溶液,摇匀, 再从管液正面快速加入 5ml 浓硫酸, 摇匀。比色液总体积为 8ml,在恒温下放置 30min,显色。然后以空白为参比,在 485nm 波 长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。 按表 1 加入标准的蔗糖溶液,然后按顺序向试管中加入 0.5ml 蒽酮乙酸乙酯试剂和 5ml 浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,逐管均准确保温 1min,取出后自然冷却至 室温,以空白作参比,在 630nm 波长下测其光密度,以光密度为纵坐标,以糖含量为横坐 标,绘制标准曲线,并求出标准线性方程。 2.可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取 0.10~0.30g,共 3 份,或干材料。 分别放入 3 支刻度试管中,加入 5~10ml 蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取 30min(提 取 2 次) ,提取液过滤入 25ml 容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度。 3. 显色测定 吸取样品提取液 0.5ml 于 20ml 刻度试管中 (重复 2 次) 加蒸馏水 1.5ml, , 以下步骤与标准曲线测定相同,测定样品的光密度。 4.计算可溶性糖的含量 V C× ×n a 3 可溶性糖含量(mg/g)= W ×10 式中 C-标准方程求得糖量(μg); a-吸取样品液体积(ml); V-提取液量(ml); n -稀释倍数;

W-组织重量(g) 。

四、淀粉含量的测定
【仪器与用具】 电子天平;容量瓶:100ml×4,50ml×2;漏斗;小试管若干支;电炉;刻度吸管 0.5ml×1, 2.0ml×3,5ml×4;分光光度计;记号笔。 【试剂】 (1)浓硫酸(比重 1.84) ; (2)9.2mol/L HClO4; (3)2%蒽酮试剂:同蒽酮法(或 9%苯酚,同方法一) ; (4)淀粉标准液:准确称取 100mg 纯淀粉,放入 100ml 容量瓶中,加 60~70ml 热蒸 馏水,放入沸水浴中煮沸 0.5h,冷却后加蒸馏水稀释至刻度,则每 ml 含淀粉 1mg,吸取此 液 5.0ml,加蒸馏水稀释至 50ml,即为每 ml 含淀粉 100μg 的标准液。 【方法】 1.标准曲线制作 取小试管 11 支从 0~10 编号,按表 2 加入溶液和蒸馏水。 以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可,绘制相应的标准曲线。
表2 管 号 0 0 2.0 0 各试管加入标准液和蒸馏水量 1~2 0.4 1.6 40 3~4 0.8 1.2 80 5~6 1.2 0.8 120 7~8 1.6 0.4 160 9~10 2.0 0 200

淀粉标准液(ml) 蒸 馏 水(ml) 淀粉含量(mg)

2.样品提取 将提取可溶性糖以后的残渣,移入 50ml 容量瓶中,加 20ml 热蒸馏水,放入沸水浴中 煮沸 15min,再加入 9.2mol/L 高氯酸 2ml 提取 15min,冷却后,混匀,用滤纸过滤,并用蒸 馏水定容(或以 2500r/min 离心 10min) 。 3.测定 可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。 按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时,在单糖残基上加了 1 分子水,因而计算时所得的 糖量乘以 0.9 才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。
V a × 100 淀粉含量(%)= W × 10 6 C×

式中 C-标准曲线查得的淀粉含量(μg) ; V-提取液总量(ml) ; a-显色时取液量(ml) ; W-样品重(g) 。 注:淀粉水解完全度试验 样品测定中可同时作 1 份用于淀粉水解完全度检验的样品, 在酸解过滤后,将其残渣加上 2ml 水,搅拌均匀,吸 2 滴于白瓷盘上,加 2 滴 I2-KI 溶液, 显微镜下观察,若出现紫蓝色颗粒,证明水解不完全,其正式测试样品需再加高氯酸水解, 直至不出现蓝紫色为止。


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