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HA基因转化番茄及转基因番茄耐盐I的初步鉴定V1生


第2 4卷 期  20 年 2月1 06 第  

  JU N LO  H N H IIO大N  NV 农S Y(G版 )LU A  CE C ) O R A  FS A 上 海  A T 学 学 报 ( 业 科A RC T R L IN E G A 交 通 O GU IE I 学 IU J RT S  

V 14N . o2  o   . 1
F b2 0   e .0 6

文章 编 号 :6 19 6 (060 —0 10  17 -9 42 0)100 -5

H A 基 因转化番茄及转基因番茄耐盐 I的初步鉴定  V   1 生
陈火英  庄天明 张晓宁 2刘  杨  张 ,  , , , 英? , 夏聪 美 
(_ 1上海交通大学 植物科学系, 上海 2 10 :. 0 112 复旦大学 遗传工程 国家重点实验室, 上海 2 0 3 ) 0 4 3 
摘 要 : 究将 含有 H A 基 因的质粒 p Y 2 与 p A BA 20 本研 V 1 B 50 C M I20 构建成双元栽体 p 2 , H 2 又在 p Y 2 上加 上 M R元件  B 50 A R7 , B 后 再与 p AM I2 0 C BA 2 0构建成双元载体 p 2 。并将上述两个载体通过农杆 菌介导转入番茄 , HR 2 获得 2 4株转化植 株 , 并 
经过 P R S uhr 检 测证 明其 中 1 株 为转基 因阳性 , 均表现 出一定的耐盐性 , 明 HV 1 因已被转入这些植株 中。 C —o ten 1 且 表 A基  
关键词 : 因工程 ; 基 番茄 ; V ; H A1耐盐 

中图分类号: 6 1 ;72 ¥4.Q 8  2

文献标识码:   A

Tr n f r a i n o   a so m to   fHVA  Ge e i t   m a o a d 1   n  n o To t  n  

Elme t r  d n i c to   fS l- o e a c   e n a y I e tf a in o   at t lr n e i
C E   u-n 。 HU N  i *i曹 Z A GXa— n LUY , H NH o i Z A G T nmn , H N   i n   I  帆g yf a oi   Z A G yn , I  ogm i H N   i窖 XA Cn- e  l
(.e a m n f l t cec, hnh iio n  nvrt, hn hi 0  1 1 p r e t   a   ine S ag a J t gU i sy S ag a 2 10 ; D t oP n S  a o ei   1  

2 teK yL b royo e ecE gneig F d nU i rt, hnh i 04 3 C ia . a   e aoa r f nt  n ier , u a  nv s y S ag a 2 0 3 , h ) St t G i n ei   n 
Ab ta t h   ia   e trp 2 wa  o srce   sn   BY 2   ab rn   src : e bn r vco  H2   scn t td u ig p 5 0 h ro g HVA1g n   n   C T y u i   e e a d p AMB A 2 0 a  a i pa mis I 2 0   s b sc ls d .     h n B 2 .a p n e   T e ,p Y5 0 p e d d MAR ee n  B7 t,a d P AMB A2 0   r  sd a o s u t n o  ebn r e trP   lme tR  o n   C I 2 0weeu e   sc nt ci  ft   ia v co  HR2 .T e r o h y 2 h 

ve r o H 2 adp R 2w r  as r dit t t meit  yA rbceim tmfcesad2   a se i lnsw r  et s f 2  n  H 2  e t nf r   o o o da db  go at u   e i   n  4t ng n a t ee o  p e r e e n   ma   e r u a n r  ̄p  
o tie .1  fte s o e   o iv in l b   CR— o te ie 曲 c t n a dsl-oea c .w ih idc td ta  ban d   o  m h w d p st es as yP 1 h i g   S uh m d n ai  n  at tlrn e hc  n iae  h tHVA1g n   o  ee h db e  u c sfl   t d c da d itgae  noteg n meo  e e1 rng ncpa t. a  e n sc e sul i r u e  n  ne rtdit h  e o  ft s   ta se i  lns  yn o h 1
Ke   r s g n t   n ie r g t mao HV 1 s l tl rn e y wo d :e e i e gn e i ; o t; c n A  a t oe a c   ; -

番茄作为一种蔬菜作物 。 在基因工程拓宽种质资源上得到了极大的发展 。迄今为止 已在番茄抗病、 抗  虫、 延迟成熟、 改良品质 、 提高耐盐性等方面取得了一定的成就【1 I。 -  7 D s l n 等将草酸氧化酶基因导入到番茄 ,经耐盐筛选后得到 的转基因番茄在盐逆境条件下 的产  es e e ag 量明显高于对照1 l w l H n— i Z ag 2 u a 1 。B m d和 ogXa hn 将拟南芥的钠离子泵蛋 白基 因转到番茄 ,   获得的转基 因   番茄能在 5 O%的海水中生长和结果 , 而正常番茄则干枯p】A rl a将酵母的 H L l rl g 4 。 i a A 2基因导入栽培番茄 ,   对转基因植株 的离体鉴定证明了其耐盐性的提高[ i e 等利用可调节植物细胞离子均衡 的 H L 基  5 sr 1 。G b t A1

因, 得到转基 因耐盐番茄1 6 l 。张荃等将 H L 基因导入栽培番茄中也已获得耐盐植株1  A1 7 1 。
晚期胚胎丰富蛋白蛋 白(t e bggns bn atL A 是很多高等植物种子发育后期产生的一类  1 e m r ee s udn E ) a  o ia ,

小分了特异多J , J 一般它们伴随着种子成熟过程而形成 , A 在种子萌发时很快消失。L A蛋 白虽有发育阶段  E 特异性 , 但可以被脱落酸(B ) A A 和干早、 低温和盐渍诱导。L A蛋 白H A 最先是在大麦的糊粉层里发现  E V1
收稿 日期:0 50 .2 2 0 .41 

基金项 目: 上海市科委基金资助项 日(3 1 N 1 ) 0 3 H 0 6 

作者简介: 陈火英 (92) 女, 15. , 上海金 山人, 博士, 教授 , 研究方向: 园艺植物资源与种质 创新,hy su d . . eh@ j . u n te c  

2  

上海交通大学学报( 业科学版) 农  

第 2 卷  4

的, V 1 H A 基因位于在大麦的第 5 条染色体上 嗍 ,在糊粉层及种子发育晚期胚胎外周区域里特异地表达。   D p g u等将 L A基因 H A , ei   nX E V 1利用基因枪法转入水稻悬浮细胞 , 获得了大阜 的转基 因植株 。H A 基  V l 因在水稻 A t l c n 启动 予的驱动下在水稻根和叶片细胞 中大撮表达 第_代转基因植株 明显表现出抵抗干  i 旱和盐渍的能力。 在胁迫下 , 转基因植株仍能保持很高的生长速率 , 延迟表现受胁迫的症状。 并且在去掉胁  迫后 , 能迅速恢复生长。 转基因植株抵抗胁迫能力与 L A的积累量呈正相关。因此, E 可以通过使转基因植  株积累 L A来提高非盐生植物 的抗盐性 o E 】 。  

有关 H A 基因在番茄的应用 国内外未见报道。本研究通过农杆菌介导 , H A 基 因导入到栽培  V 1 将 V 1
番茄‘ 鲜丰 ’ 。 中 为番 茄 的耐 盐育种 提供 耐盐 的种质 资源 。  

1 材料与方法 
'  

11 材料  .

质粒 p Y 2 ( f V 1 B 50  ̄  A 基因) H 由美 国C re 大学的 R y o l nl a  wu教授提供 ; 质粒 p H C 5含 R 7元件) G N 0( B   由N r  a l a o hC r i 大学的 Si r t on p e 博十提供 ( 1 ; k 图 )受体为番茄栽培品种 ‘ 鲜丰 ’ 。  
p HNC05 G   51 6   0 bp

K nI p —
As

EO-  c  ! p8/ o1/ T0 ,9
AD   a

B 袅l   一 s C ' p l B l a a 2 I m 0 ?     S I   a  ̄
图 1 含有 R 7的 质 粒 p HN 0  B G C5
F g 1 t cu e o   e p a mi  GHNC 5 w t  B7 i.  S r t r  f h   l s d P u t 0  i R   h

  6  

1 方 法  . 2

1 . 大肠杆菌感受态的制备及质粒 的转化 .1 2 
1 . 质 粒 的提取 .2 2 方 法参见 文献 f1   1】  。

方法参见文献【l  1】 。

1 . 质粒的构建过程 p H C 2 .3 2 G N 55的构建 
p HN 5 5的构 建  G C2
p GHNC 5 0  p BY5 0 2 

S i Pt  a 1 sJ  I  

X oI Pt  i     f I s I

51 b片断  . K

3K . b片断  3
R8   7

pGHNC52   5 9 06 p 0 b 

A 1  C1 5

HV   A1

Pn 3 i2  

RR   7

Kp   nI

Ec R I o  Ba mH I  

P tI s  

S cI a  

p GHNC 2   55

图 2 G N 55  p H C 2 的构建过程 
F g2 h  tu t r  r c d r  fp i . T e sr c u ep o e u e o   GHNC5 5 2  p AMB A2 0   C I 20 p Y5 0 B 2 

图 3 p HN 5 5   G C 2 
Fg 3 h   t c u e f p i .  T e sr t r o   GHNC 2   u 55 p AMB A2 0   C I 20 p Y5 0 B 2  K n 1 S c1 p   I a     

S i  P t   a  I s I I   

Xh  I s 1 o1 P t      

S cII n 1 a   Kp   

89 b片断  . K

3K . b片断  3

8K . b片断  9

57 b片 断  .K

p 2  HR 2

图4 H 2  p 2 的构建过程 
F g4 i.  Th  t cu ep o e u e o   H2   e sr t r  rc d r   f u p 2

图 5 H 2 的构建过程   p R 2
F g 5 Th   tu t r  r c d r  fp i .  e sr c ue p o e u e o   HR2   2

第 1期 

陈火英 , H A 基 因转化番茄及转基因番茄耐盐性 的初步鉴定  等:V 1

3  

Xh I T   0   L

图 6 p AMBI 2 0   C A2 0   Fg6 h  tu tr o D AMB A2 O   i. T es cu e f C r I 2 O

图7 p 2   H2  
i .  T  t tr o p 2 Fg 7 h esr cue f H2   u

1 . 冻融法转化农杆 菌 1m  Bs l0r2)中 .4 2     LL (rO ,f t i5   接 入农杆菌 E A 0 ,8 H 15 2℃摇床培养 4  ,: 0接种  8h 1 0 1
于新 的 L (r0 ,f5 0m Bs l0 r2)1  L中 ,8℃继 续 摇 床 约 2 t i 2  

h ,至对数生长前期 ,将培养物置于冰上 1  i,   0rn4℃ a

4 0 ? i 00rmn  离心 1  i,倒净培养液 ,以 1  L01 0mn 0m  .  
m lL1 o?一 新配制的预冷于冰上的无菌 C C 溶液悬浮细  a1 : 胞 , ℃,0 0rmn 4 40  - i  离心 1  i, 0m n 弃上清 , 0   L 以 .m   4 上述 C C  a 1溶液悬浮细胞 ,分两管液氮速冻后一 0 保  8 ̄ C
存。 ,    

取 以上制 备好 的感 受态 细胞 0   L . m ,加 5 L 2     p 2 ( p R 2质粒 , H 2或 H 2) 冰浴 3  i, 0mn 液氮 中冻 2m n   i,  
3 7℃使 之 融化 , 8 0 LL (rO , i 5 ,8℃低 速  加 0     B s l0 r2 )2 t f

摇 动 3 6h 涂 布于 L (rO ,i 5cl 0平 板上 ,8  ̄  , Bs l0 r2 ,hl ) t f 0 2 

图 5 pR 2   H 2 
F g 5 h e sr c u e f HR2   i.  T   t tr  o  p u 2

℃倒置培养 , 挑单菌落鉴定转化子(C P R鉴定)  。

1 . 农杆菌质粒的提取 参见文献【 ] .5 2 1。 2  1 . 转化体 系的建 立  .6 2 1 . 1 农杆菌培养及其培养基 Y B .6 2. E 培养基: 蛋白胨 5 ?     【; g 『 酵母浸膏 1 -  牛肉浸膏 5g ; gO ?   L; g  ? M S       7 2 0 9 ?-抗生素: HO . 3 L ; 4 g   利福平(f 5 5  gL ; n) —0 ?   2 m 『链霉素(t l0 gL ; s )O   -- 氯霉素( 1 0  gL ;H .   r m   c ) 0m ?-p 7 h1   O。 从平板上挑取单菌落 , 接种到 2  L 0 的上述培养基, m 在恒温摇床上,7℃, 0 2 0 - i 2  ̄6 ( D o   2 2 ~ 1  m n 83  O  ̄ 为 0 r ~, h

0 —. 。取上述菌液 , 1 2%的比例 , .0 ) 6 8 按 %一 转入无抗生素的 Y B培养基 , E 在恒温摇床上,7℃,0 -4    2 20 20r ?
mi- 6h   n1   。 ,

1 .2 材料 的预培养 1  苗龄 . .6 2. 2 d 切取下胚轴 , 接种到 M + A2   gL +A  . m -- S B  .m ?   A0   gL 培养基上 34 。 0 『I 2    ̄ d  1 .3 侵染 将预培养过的培养物在菌液中侵染 5 1  i 后 。 .6 2. —0m n 用无菌滤纸吸去附着的菌液。对 照除不  用农杆菌侵染外其它步骤相同。   1 .4 共培养 将上述侵染过的培养物接种到 M + A2   gL +A  . m -一的培养基上 ,7 2   .6 2. S B  . m ?  IA0   gL 0 2 2 —8℃
暗培 3d   。

1 .5 愈伤组织的分化 将上述共培养过的培养物接种到 M + A2   g L- A  . m ?  羧卞 30 .6 2. S B  . m ?- IA 0   gL + 0 + 2 0  m ? 的培养基上进行芽器官的分化。 gL   1 .6 阳性苗的筛选 将上述分化的芽接种到 M + A O 5m ? 卡那霉素 2  g  培养 基进行抗  .6 2. S I  .   g L A 0 5m ? 性植株的筛选。  

4  

上 海 交 通 大 学 学 报 ( 业科 学 版) 农  

第 2 4卷 

1 . 转化番茄总 D A的快速提取 .7 2 N

取少量蒲茄叶片或愈伤 , 加石英砂 , 室温研棒研磨 1 S加 4 0 L 5 , 0     

提取缓冲液 (0  m l —TiH 1p  . 20m o? N C 2  m l  E T ;. S S , 20m o- r.C  H 7 ;5  m ]L aI;5m o? L s 5 L D A 0 % D )室温混  5 匀 5rn 1, 0rrn   i,3 0 ? i a 0 a  离心 5 i,   n 吸取 30t a r 0  L上清液, 30I x 加 0  L异丙醇室温沉淀 5rn 1, 0rrn   x   i,3 0 ? i a 0 a 一 离心 1 m n7 0 i,0%乙醇洗涤沉淀并干燥。5  LT   0  E溶解沉淀, 4℃保存。可做为 P R模板。 C   1 . P R体 系及 鉴定 参 见文献 [ ] .8 C 2  1  3

1 . 转化植株 的 P RSu e 检测 .9 2 C . tr ohn

P R产物 电泳后 . C 割胶 , 0   o?- a H转膜 1  ,8 以 .t l   O 4o L N 0h6 ℃预杂 

交液(xS , . S S 5 封闭母液 。.% N 月桂酸) 5SC 0 5% D , x 0 5 . 中预杂交 1 后加入热变性 (   h 煮沸 1  i后于冰上  0rn a 迅速冷冻 5ri) 的 DG标 记探针 ,8℃杂交 1  xS , S S室温 洗 膜 1  i 次 :x S 1% S S    n a I 6 2h2S C1% D 0rn两 a lS C, D、 0IS C 1 S ,5 . S, % D    ̄ S 5℃各洗膜 1 r n 5 i   。在洗涤液( a 3%T en马来酸缓冲液) we, 中漂洗 5 i将尼龙膜转入封    n a r 闭缓冲液(× 1封闭母液 , 马来酸缓冲液) 封闭 3  i 后加入抗体, 0rn a 结合 3  i, 0rn 洗涤液洗涤 1 rn a 5a 两次,  i 以检  测液平衡 5 i 后将尼龙膜转入加 N T的检测液中 .   n a r B 暗培养 5 i   n以上, a r 直到适当显色 , 5  L以上的重  以 0 m 蒸水停 L反应 ,   暗处保存。  

2 试 验 结 果 
21 转 化植 株 的筛选  .

共培养后的番茄下胚轴愈伤组织在 M + A 2   g【  A  . m ? + S B   . m ? + A 0   gL 羧卞 30m --的培养基上  0 『I 2 0   gLt 培养 2  0 d后, 分化出不定芽。接着将不定芽接种于 M +A  .   gL  卡那霉素 2  g 上进行抗卡  S IA O 5 ?-十 0m 5 - m  

那霉素植株的筛选 , 共得到 2 4株抗性植株。其中 l 株为 p R 2 0 H 2 转化 ,4 l 株为 p 2 转化。 H2  
2 转化植株检菌  . 2 将筛选 5 次的卡那霉素抗性植株切碎 。 Y B培养基中 2 ~ 8℃振荡培养 2d培养基 中未见农杆菌  在 E 72  , 生长 , 将上述液体培养物涂在 Y B固体培养基上 ,7 2 ℃培养 2d 未见农杆菌生长 , E 2  8  , 说明所检测的植株 
农杆 菌污 染 。  

2  转化植株的 P R S uh r 检测  . 3 C .o ten 对 2 株抗性植株进行 P RSu e 检测结果表 明。1 4 C. tr ohn 1 株为阳性 ,3株为阴性。阳性植株中 5 为 1 株   pR2 H 2 转化, 株为 p 2 转化。阳性植株均有 5 5 p的扩增条带 , 6 H2 l  b 对照则没有( 6 。 图 )  

-  ≯

参  
l  2 l  3 l  4 l  5 l  6 l  ‘ 7 l  8 l  9 2   O 2  l 2   2 2  3 2   4

图 6 转化植株 的 P R Su e 检测结果  C — ot r hn
F g6 CR S uh r   f mn f m,d p a t i . P - o t e n o   so e   ln s t  


Ne aieC + P st eCK; ̄ 4T s d pa t g t   K: oiv   v i 1 2   et  lns e  

2 转基因植株的耐盐性鉴定  . 4 将具 3 叶的转基因植株不定芽扦插于附加了 N C 25m o? 的 M 培养基中 8d 阳性不定芽  a 1 2  m l   L S   时, 的长根率则可达 10%, 0 而阴性对照完全不能长根。研究表明,1 1 株转基因植株均表现 出一定的耐盐性。    

第 1划 

陈火英 , H A1 等:V 基  转化番茄及转基因番茄耐盐性 的初步鉴定 

5  

3 讨 论 
培育耐盐作物品种是利用盐碱地的一条经济而有效的途径。利用传统方法至今 尚未培育出真正的耐  盐品种。植物耐盐分子机制的研究和生物技术的不断完善, 为培育高效耐盐植物迎来了曙光。植物的耐 
盐性 的表 现 比较 复 杂 . 要包 括三大类 : 主 对渗 透胁迫 的 忍耐能 力 ; 对盐 分 总浓度 的 忍耐 能力 ; 专 一离 子导  对

致毒性的抵抗能力。其中, 以对渗透胁迫的忍耐能力为最主要  。   近几年来 。 植物抗渗透胁迫基因工程进展十分迅速。新的基因不断涌现 , 转基 因植物对渗透胁迫 的抵  抗能力不断增强。目前 , 通过基因工程手段, 使细胞内积累甜菜碱、 山梨醇、 甘露醇 、 海藻糖等可溶性溶质,   能够不同程度地提高转基因植株的耐盐性 6 l 。   农杆菌作为一种天然的植物基因转化系统 , 具有转化的外源 D A结构完整 , N 转化机理清楚, 整合位点  较稳定。 拷贝数低 , 整合后的外源基因结构变异较小等优点, 因而倍受重视 埘 。尽管如此 , 随着转基 因技  术在各个应用领域的深入和发展 , 转基因沉默现象也 已引起越来越多的关注 。转基因沉默的分子机理 , 很  可 能存在一种 以上的作用方式。比较肯定的是 , 多数转基因沉默与重复拷贝有关[z 】3 9)  ̄ 。细胞核基质支架  附着区( a i a ah etei , A ) m tc t cm n r o M R 构建策略是近几年来发展的一项旨在利用染色质高级结构的特 点 r  t  gn   以改进转基 因稳定性和提高表达效率的一种方法。本试验利用含有 M R元件 R 7的双元载体 p R 2 A B H 2  和不含 R 7 p 2 B 的 H 2分别进行番茄转基因. 研究 R 7对转基 因表达情况的影响。 B   本研究结果表明, 利用农杆菌直接侵染番茄下胚轴能够获得转基 因植株 , 转基因植株的耐盐性明显高  于其阴性对照。p R 2转化植株的表达率(O 高于 p 2 转化植株(2 5 , H2 5 %) H2 4 . %)可以初步推测 R 7 8 B 对转  基因的表达率有一定的影响. 但还有待进一步研究证实。  

参考文献:  
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( )6 2 6 . 2 : 5— 0 3 6   [0 D pnx Xaln . x r s no  l ee bygns  b n at rtngn, A ,rm br  o f stea c    a r 1] eig, i ad E pe i  f   t m roeeiau d n po i ee HV 1 f  al cne   lr et w t   o so aa   s   e o y r o n o e d f iadsls esi t ng n  c J Pat hs l19 ,  : 4 .5 . e c n a t s    asei r e[. ln P yi ,  6 1  2 9 7 it t r nr ci J   o 9 1 0 2  

[1【 J 1J美J萨姆布鲁克, 分子克隆实     . 等. 验指南( 第二版) ]北京: [. M 科学出版社, 9. — . 1 95 6 9 55  [】 1 王关林, 2 方宏筠. 植物基因工程原理与技术[】北京: M. 科学出版社 , 9. 758 1 8 1.1. 9 5  
[3 陈火英, 1】 张建华, 天明, D vl ig e  em l m  f yoes o su nu   r a  l a c ypl ntb  庄 等. ee pn   wgr pa so  epr enee l tmf   lt e n eb ol   e o n s L i e o s to r e u m to[ . ehd ]西北植物 学报 , 0 42 ( ) 1.6 J 2 0 ,4 1 :21.  

( 下转 第 1 2页)  

l  2

f海 交 通 大 学 学 报 ( 业 科 学 版 )   农  

第 2 4卷 

[ 郝林华, 7 】 陈 磊, 陈靠山, 牛蒡寡糖的分离纯化及结构研究[. 等. J 高等学校化学学报, 052(: 4 — 4 . ] 20, 6 )221 7 71 2  
[ 郝林华, 8 】 陈靠山, 李光友 . 牛蒡寡糖对黄瓜幼苗诱导抗病性的研 究f. 技 术通讯, 04 1( : — . J高 ] 20,4 )3 8 94 4  
【]  eqn, hnK oh n H o iha Id c o f o teOg n   o p nnsnL ae   o a Cp rcnecf tm 1 9 He iig C e  asa, a  n u .n utno  l i   ̄ i C m o eti e vs f m t o e i   “ a“   P L i V al ac   oT o( so s e  

b  udc  l oac aie [. c   o nc ii ,0 5 (  rs . yB rokO i sch r s3 A t B t i Snc 2 0 ,i pes  g d 3 a a a a n )

[】 1 郝林华, 0 陈靠山, 李光友. 牛磺酸对黄瓜幼苗生长和生理特性的影响田. 上海交通大学学报( 农业科学版) 052(: — . , 0,3 )0 4 2 11 1  
[1 刘 宁, 1] 高玉葆, 贾彩霞, 渗透胁迫下多花黑麦草叶内过氧化物酶活性和脯氨酸含量以及质膜相对透性的变化 . 物生  等. 植

理学通讯,003(: . . 20,6 )1 4 11 1   
[2 赵世杰, 长成, 1] 许 邹 琦, 植物组织 中丙二 醛测定方法的改进 [. 等. J 植物生理 学通讯, 9 4 3 ( : 720  ] 1 9 , 03 2 —1. )0
[3 张殿 忠, 1] 汪沛洪, 赵会 贤. 小麦叶 片中游离脯氨酸的测定方法[ . J 植物生理学通讯 , 9 0 ( :26 , . ] 1 9 ,4 6 —53   ) 2

[] 1 冯乃杰, 4 周学公, 郑殿峰, 不同种衣剂对大豆幼苗抗低温胁迫能力的影响L. 等. 刀黑龙江八一农垦大学学{ 03 1(: . . 艮20,5 )8 0 22 3   【] 1 陈振德, 5 傅以彬, 琦, 二甲亚砜和丙酮混合法测定叶绿素含量[. 邹 等. J 山东农业大学学报, 99( : — . 1 18,23 3   )1 5 [】 1 张志良. 6 植物生理学实验指导f]北京: M. 高等教育出版社,9 6 0. 2 19. 5 1. 3 3  
[7 C ac  , el A C Me os f ny o g, o I [ ]N wY r:cd mcPes 15 .6 . 1】 hn eB Mahy   . t d    zm l y V lI M . e   ok a e i rs,  57 4   h oE o   A   9  

[] 1 曾韶 西, 以柔, 8 王 刘鸿先. 低温光照下与黄瓜子叶叶绿素 降低有 关的酶促反应[. J 植物 生理 学报, 91 1( : 712 ] 19, 7 )7.8. 21  
[9 S vsaaA S asr  , o id ̄. ieet l f c  f i e y ezq ioeaddclrbnounn n h r hl 1】 f at   , t s   JG v j Df rni  eto  m t l no unn n i o e zq ioeo   l o yl i v r eR n ae s d h b h o cop  
l rsec  as tns nc  l o s[.  y ce  h t il :i 19 , 1 : 31 9 f oecnet nin i  iahty k i J J h t h m P y bo BBo, 9 5 3 () 6 -6 . u r e  p ha d ] P o o   l 31  

【] 2 何晓明, 0 林毓娥, 陈清华, 高 等. 温对黄瓜幼苗生长、 脯氨酸含量及 S D酶活性的影响叨 上海交 O . 通大学学报( 农业科学版) ,  
2 0 ,013 -3 0 2 2 (:0 . ) 3 

【1 费 伟, 2】 陈火英,  忠, 盐胁迫对番茄幼苗生理特性的影响叨. 曹 等. 上海交通大学学 农业科学版) 052(:I 3 . 报( , 0,3 ) 9 0 2 15 ,   [] 2 刘建辉, 2 崔鸿文. 电导法鉴定黄瓜抗寒性的 研究[. J 西北农林科技大学学报( 然科学版)19, 3 )4 7 ] 自 ,95 2(: — . 47 7   [】 2 张恩平, 3 张淑红, 司龙亭, N C 胁迫对黄瓜幼苗子叶膜脂过氧化的影响 沈阳农业大学学报, 0 13(: 648 等. a1   20 ,2 )4 — . 64  

( 上接 第 5页)  
[4 T l , hn o    . ato rnei t   i   lte fh u i t   ma :ep ne f yoe cnee l tm. . 1】 a M S a nnM C Sltea c    ewl r avs   ec lv e t t rsoss   cp ̄i  sae u L    l nh de i ot ta d o o oL o n  
c es a i L prvau , oau  e nli n 1h bisohg a ntJ A sa. . at h s l18 , 0 1917  h em ni . euin m Sln m pn e iadF y r    i sl i [. ut 1J ln P yi 。 9 3 1 : 0 .1 . , l  dt h i y] r P   o   【5 T l H ii  D h n .ato rn ente i   lie    ecl rdt aorsoss f a u sus f yo es o  1] a M, ekn   H, ea  Sltl a c      l r a vs fh  t e  m t:ep ne    l s i e    cp r cn K  e i h w d e t ot u u o o c l ts o L i

ec l tm adS l u  enlio i   l i [. . a zn hs l17 , 6 2 1 4 . sa nu  n o n mp nel   g s i tJ Zp nep yi, 9 8 8 :3 . 0 e a ith h a n y] f l o 2  

[] 1 刘风华 , 岩 , 6 郭 谷冬梅. 转甜菜碱醛脱 氢酶基 因植物的耐 盐性研究[. J遗传学报 ,972() 45. ] 19 ,41: .   5 8

[] 1 李子银, 7 胡会庆农 杆菌介导的植物遗传转化进展【. J生物工程进展,981()2— . ] 19 , 1: 2 6 8 2  【] 1 贺晨霞, 8 夏光敏. 农杆菌介导单子叶植物基因转化研究进展[. J植物学通报,99 1()57 7 . ] 19 ,65:6. 3 5  
[】 1 杨金水 , 清. 9 王光 植物转基因的失活 与沉默[. J生物工程 进展 ,95 1()4. . ] 19 , 3: 1 5 5 4 
[0 Byy e D pc eA C a c rai oa lnsa o ac h e tei ia N rg ethtomazsrngn e pes n 2 ] ren  ei r . hr t i t n f patcf l t cm nr o n D Af m ntanr l et see x rsi   k aez o d a gn   a i a o
itbcO .lnC l。9 244 3 7 . n oac 3 Pat e 19 ,:6 4 1     l  

[ ]   昕, 荣昭, 民华. R与植 物转基 因沉默的消除  生物 工程进展 ,98 1()5. . 2 刘 1 傅 蔡 S A 19 ,84: 3 7 5 
[2 A l    , p e . g-ee t ngn xrsi    ln cH e eto H t n  a o  t cme teinf m tbco . 2 】 l nGC S i r Hi l lr seeepes ni pat e : fcs f   r gs f l at h n  go '   ac[   e k S h v  a o n   f   so c d a r i o o  ̄
P a t l 1 9 , : 9 -1 . l n  1 9 6 8 8 9 9     Ce . 3

[3 P u A L FdR J H ge  d r ho ai s utrs nm i  n  a ios [. l t e . 9 8 1: 3 916 , 2 】 al  , e     i r re  rm t  t cue    az adAr dp iJ Pa   U 19 , 0 14  3 0     h o c n r i e b s] nC  


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