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微生物发酵改善菜籽粕品质的研究


24 油料蛋白

CHINA OILS AND FATS

2011 Vol. 36 No. 7

微生物发酵改善菜籽粕品质的研究

1, 2 2 刚 , 蔡国林 , 陆



1, 2

( 1. 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室

, 江苏 无锡 214122; 2. 江南大学 生物工程学院, 江苏 无锡 214122)

摘要: 采用实验室筛选的菌种混合固态发酵菜籽粕, 比较菜籽粕发酵前后硫甙、 粗蛋白质、 菜籽肽、 乳酸含量以及蛋白质体外消化率的变化。 结果表明, 菜籽粕中的硫甙降解率为 53. 4% , 粗蛋白质 含量从 39. 99% 提高到 45. 84% , 菜籽肽含量由 2. 48% 提高到 10. 58% , 氨基酸的组成和含量也有 一定的变化和提高, 蛋白质的快速体外消化率提高了 1. 94% , 有益代谢产物乳酸的含量由 1. 03% 提高到 2. 53% 。 关键词: 菜籽粕; 微生物发酵; 硫甙; 菜籽肽; 体外消化 中图分类号: TS229; S816 文献标志码: A 文章编号: 1003 - 7969( 2011) 07 - 0024 - 05

Improving the quality of rapeseed meal by microbial fermentation 2 2 WANG Gang1, , Guolin2 , Jian1, CAI LU
( 1. Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China; 2. School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China) Abstract: Rapeseed meal was fermented by laboratory screening stains under solid state. The changes of glucosinolates, crude protein, rapeseed peptide, lactic acid of rapeseed meal and the in vitro digestibility of protein were studied. The results showed that the degradation rate of glucosinolates was 53. 4% , conthe tents of crude protein and rapeseed peptide increased from 39. 99% to 45. 84% , and from 2. 48% to 10. 58% , respectively. The composition of amino acid had a certain change and its content increased. The rapid in vitro digestibility of protein increased by 1. 94% , the content of benefical metabolite lacand tic acid increased from 1. 03% to 2. 53% . Key words: rapeseed meal; microbial fermentation; glucosinolates; rapeseed peptide; in vitro digestibility

菜籽粕粗蛋白质含量为 35% ~ 45% , 氨基酸组 成合理, 一 种 较 为 优 良 而 廉 价 的 蛋 白 质 饲 料 资 是 源
[1 ]

育工作起步较晚, 且育成的双低品种表现出生长势 [4 ] 弱, 抗病性差等特点 。 另外, 在生产上我国普通 油菜和双低油菜混种、 混收、 混加现象严重, 无法保 证双低油菜的品质。同时, 低硫甙的菜籽粕和鱼粉、 豆粕等高品质的蛋白饲料相比, 其营养价值仍有较 [2 ] 大的不足 。因此, 要想充分利用菜籽粕中蛋白质 资源, 必须开发菜籽粕中硫甙的脱毒方法, 微生物发 [5 - 7 ] 。 酵就是一种行之有效的解决方法 本文利用酵母、 枯草芽孢杆菌和乳酸菌对菜籽 粕进行混合发酵, 使菜籽粕中主要的有害物质硫甙 得到高效降解, 蛋白质发生一定程度的降解, 积累有 益的代谢产物小肽和乳酸, 达到综合改善菜籽粕品 质的目的。 1 材料与方法 1. 1 试验材料 菜 籽 粕 购 自 无 锡 市 农 贸 市 场; 胃 蛋 白 酶

。然而, 因其含有硫甙、 植酸、 单宁等有害物质

和抗营养因子, 直接作为饲料利用会引起营养物质 利用率下降及畜禽中毒等副作用, 从而限制了菜籽 粕在饲料行业的利用。 目前, 饲料行业基本上认可双低菜籽粕, 较为成 Tower、 Regent、 Candle 和 功的 双 低 品 种 有 Canola、 Altex等[2]。然而, 由于这些欧美等地的品种具有稳 定的地理生态类型, 与我国长江下游的生态差异较 大, 不适合直接引种
[3 ]

, 而我国的油菜新品种的培

收稿日期: 2010 - 11 - 11 作者简介: 王 通信作者: 陆 刚( 1987) , 硕士研究生, 男, 主要从事发酵工 健, 教授, 博士生导师。 mail) hiwanggang@ 163. com。 程方面的研究与开发工作( E-

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( 1∶ 10 000) 、 胰蛋白酶 ( 1 ∶ 250 ) 和丙烯基硫甙购自 Sigma 公司; Sep - PakC18 Cartridge 购自美国 Waters 公 司; RCDC 蛋白定量试剂盒购自 BIO - RAD 公司; 其 他试剂均购自中国医药集团上海试剂公司。卡氏酵 母、 枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌来源于实验室筛选。 1. 2 发酵工艺 采用卡氏酵母、 枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌进 行菜籽粕的混合固态发酵。 菜籽粕 ( 100 g) 和自来 水按 1∶ 0. 7 比例混合, 接种 10 mL 的枯草芽孢杆菌, 于 37 ℃ 发酵 12 h 后, 再接入 10 mL 卡氏酵母和 10 mL 植物乳杆菌, ℃ 发酵 36 h 后, 60 ℃ 烘干, 37 于 粉 碎后得到发酵菜籽粕。 1. 3 硫甙含量的测定 以丙烯基硫甙作为硫甙的标准品, 绘制硫甙的 标准曲线, 利用分光光度法测定硫甙含量 1. 4 蛋白质含量及氨基酸组成的测定
[8 ]

抽滤, 分别用 15 mL 乙醇和 15 mL 丙酮洗涤残渣, 抽 滤结束后, 将滤纸及残渣放入 105 ℃ 烘箱烘 3 h, 称 量, 然后利用凯氏定氮仪测定蛋白质含量。 由公式 ( 1) 计算蛋白质的体外消化率。 将菜籽粕经过胃蛋 白酶消化 1 h, 胰蛋白酶消化 3 h 的体外消化率定义 为菜籽粕蛋白质的快速体外消化率。 体外消化率 = ( m1 - m0 ) / m0 × 100% — mg; 式中: m0 ——样品中粗蛋白质质量, m1 ——酶解后残渣中的粗蛋白质质量, — mg。 1. 8 1. 8. 1 乳酸含量的测定 样品的预处理 称取 5 g 样 品, 入 超 纯 水 50 mL, 拌 提 取 加 搅 5 min, 20 mL 匀浆液在 4 000 × g 离心 15 min, 取 取 上清液 10 mL 于 13 000 × g 离心 10 min。上清液用 0. 22 μm 的膜过滤, 再用 Sep - PakC18 Cartridge 过滤 处理后备用, 采用 HPLC 测定乳酸含量 1. 8. 2 色谱条件
[13 ]

( 1)





粗蛋白质含量和氨基酸组成分别采用凯氏定氮 [9 ] 仪和氨基酸自动分析仪测定 。 1. 5 1. 5. 1 菜籽粕蛋白的 SDS - PAGE 分析 样品制备 称取粉碎菜籽粕( 60 目) 1. 000 0 g, 0. 03 mol / L 用 Tris - HCl 缓冲液( pH 8. 0) 10. 00 mL 浸提 2 h, 然后于 3 000 × g、 ℃ 离心 10 min, 4 取上清液, 再于 10 000 × g、 ℃ 离心 10 min, 4 取上清液测定蛋白质质量浓度, 4 稀释至 1 mg / mL, ℃ 保存备用。 1. 5. 2 SDS - PAGE 测定[10] SDS - PAGE 电泳的分离胶质量分数 12. 5% , 浓缩胶质量分数 5% , 电泳时, 20 μL 的样品加入 取 5 μL 的上样缓冲液, 混匀后在沸水中水浴 5 min, 再 于 10 000 × g 离心 30 s。上样量 15 μL, 样品在浓缩 胶时电压 60 V, 进入分离胶后上升至 80 V, 当溴酚 蓝距离下缘 0. 5 ~ 1. 0 cm 时结束电泳。胶片用考马 斯亮蓝 R250 染色。 1. 6 菜籽肽含量的测定 参考大豆肽粉的测定方法测定菜籽肽的含量, 酸溶蛋白的含量减去游离氨基酸的含量即为菜籽肽 [11 ] 的含量 。 1. 7 蛋白质体外消化率的测定
[12 ]

HPLC: Agilent 1100; 四 元 流 动 泵; 检 测 器: UV 210 nm; 色 谱 柱: ECOSIL HPLC COLUMN C18 , 6 4. mm × 250 mm; 柱温: 30 ℃; 流动相: V( 甲醇) ∶ V( 水) ∶ V( H3 PO4 ) = 5∶ 95∶ 0. 05; 流速: 0. 8 mL / min; 进样量: 5 μL。 2 2. 1 结果与讨论 微生物发酵对菜籽粕中硫甙含量的影响 经 测 定, 酵 前 菜 籽 粕 中 硫 甙 含 量 为 42. 98 发 μmol / g, 发酵后菜籽粕中硫甙含量为 20. 01 μmol / g, 经微生物 发 酵, 甙 的 降 解 率 达 到 了 53. 4% 。 比 硫 Vig 等[5]采用少孢根霉菌固态发酵菜籽粕, 硫甙的 降解率为 43. 15% 略高。 而国内研究中硫甙的降解 率则相对较高, 李延海等 等
[7 ] [6 ]

使用白地霉菌配合硫酸

铵发 酵 处 理 菜 籽 粕, 甙 降 解 率 达 到 85% ; 孙 林 硫 以植物乳杆菌、 枯草芽孢杆菌、 蜡状芽孢杆菌、 酪酸梭状芽孢杆菌发酵结合湿热处理菜籽粕, 硫甙 的降解率达到 85. 19% , 但菜籽粕在剧烈加热条件 下会破坏 蛋 白 质 的 品 质, 利 于 非 反 刍 动 物 的 吸 不 收
[14 ] [15 ] 。在低硫甙菜籽粕的使用上, 于炎湖等 的

研究表明, 在生长猪肥育前期日粮中, 双低菜籽粕 ( 硫甙含量 37 μmol / g) 的用量比例为 16% , 后期日 粮中添加 18% 菜籽粕, 猪的正常生长不受影响。 卿 中全等
[16 ]

根据王潍波等 的测定方法略作修改。 称取 样品 4 份, 每份 0. 500 0 g, 各加入 50 mg / mL 的胃蛋 85 2、 6 白酶 1 mL, 37 ℃ 、 r / min 下分别消化 1、 3、 h 于 后, 调节 pH 至 7. 5, 然后各加入 340 mg / mL 胰蛋白 6、 18 消化结 酶溶液 1 mL, 39 ℃ 继续消化 3、 9、 h, 于 束后, 加入 5 mL 20% 的磺基水杨酸溶液, 室温放置 30 min, 沉淀蛋白质。 随后用烘至绝干的定性滤纸

的研究表明, 在肥育猪种猪和种猪的日粮

Canola 菜籽粕 ( 硫甙含量 < 30 μmol / g) 可 100% 中, 代替大豆粕。因此, 通过微生物发酵将菜籽粕中硫 甙含量降解至国际公认的双低菜籽粕的标准值 ( 30 μmol / g) 以下, 就可以提高其在动物饲料中的添加

26 量, 提高菜籽粕的利用率。 2. 2

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子质 量 在 5 kDa 以 内 的 肽 含 量 由 2. 48% 上 升 到 10. 58% , 3 种发酵菌株产生的蛋白酶的共同作用 在 下, 菜籽粕中的粗蛋白降解为小肽和氨基酸。 与大 分子蛋白质相比, 小肽具有更好的营养价值, 如小肽 可以直接被动物肠道吸收, 对氨基酸和矿物质元素 的吸收和利用以及动物蛋白质的合成与沉淀具有促 进作用, 同时还具有免疫活性、 神经活性、 抗氧化活 性等作用 2. 5
% 发酵后 2. 24 1. 69 1. 94 1. 82 0. 9 0. 35 2. 07 1. 62 34. 87
[17 ]

微生物发酵对菜籽粕中粗蛋白质含量和氨基 经过微生物发酵后, 菜籽粕中粗蛋白质含量由

酸组成变化的影响 原来的 39. 99% 提高到 45. 84% , 这主要是因为微生 损失掉一部分样品, 使蛋白质 物在代谢过程中产气, 得到了一定程度的浓缩。通过对比发酵前后菜籽粕 中各种氨基酸组成可知, 发酵后菜籽粕中各种氨基 酸的成分比发酵前均有所提高, 且氨基酸总量由发 酵前的 31. 02% 提高到 34. 87% ( 见表 1) 。
表1 组成 赖氨酸 蛋氨酸 天冬氨酸 谷氨酸 丝氨酸 组氨酸 亮氨酸 脯氨酸 异亮氨酸 菜籽粕发酵前后氨基酸组成的变化 发酵后 1. 76 0. 69 2. 58 7. 41 1. 69 1. 06 2. 75 2. 83 1. 50 组成 甘氨酸 苏氨酸 精氨酸 丙氨酸 酪氨酸 半胱氨酸 缬氨酸 苯丙氨酸 总计 发酵前 1. 95 1. 51 1. 86 1. 61 0. 77 0. 30 1. 88 1. 39 31. 02 发酵前 1. 71 0. 61 2. 08 6. 49 1. 53 0. 93 2. 37 2. 42 1. 35

。小肽含量高的饲料特别适合于消化

系统尚不完善的刚断奶的仔猪食用。 微生物发酵对蛋白质体外消化率的影响 小肽和氨基酸含量的提高, 以及大分子蛋白质 结构的变化都会影响到蛋白质的体外消化率
[18 ]

, 采

用胃蛋白酶 - 胰蛋白酶两步法测定蛋白质的体外消 化率, 结果如图 2 所示。从图 2 中可以看出, 经过胃 蛋白酶作用 1 h 胰蛋白酶作用 3 h 后, 发酵后的菜籽 粕蛋白的快速体外消化率比发酵前提高了 1. 94% 。 3、 9、 经过胃蛋白酶作用 2、 6 h 和胰蛋白酶作用 6、 18 h 后, 发酵后菜籽粕蛋白的体外消化率比发酵前分 0. 0. 别提高了 0. 86% 、 57% 、 065% 。 随着体外消化 时间的延长, 发酵前后菜籽粕蛋白的体外消化率已 非常接近。综合以上分析可知, 经过微生物发酵后, 菜籽粕蛋白的快速体外消化率明显高于发酵前, 而 发 酵前后菜籽粕最终蛋白质的体外消化率基本 持平。

2. 3

微生物发酵对菜籽粕蛋白降解的影响 为了考察发酵 前 后 菜 籽 粕 蛋 白 的 组 成 结 构 ,

评价微生物发酵对 菜 籽 粕 蛋 白 的 降 解 情 况 , 行 进 了蛋白 质 的 SDS - PAGE 试 验 , 验 结 果 如 图 1 试 所示 。

2、 4 2、 6 注: 组别 1、 3、 分别表示胃蛋白酶作用 1、 3、 h, 6、 18 胰蛋白酶作用 3、 9、 h。 注: M. 蛋白质标准; 1. 发酵前菜籽粕; 2. 发酵后菜籽粕。 图1 菜籽粕蛋白的 SDS - PAGE 图谱 图2 不同的体外消化时间对蛋白质体外消化率的影响

2. 6

微生物发酵对乳酸含量的影响 将发酵前后的菜籽粕经过蒸馏水 ( 1 ∶ 10) 提取

12S 菜籽粕蛋白主要是 12S 球蛋白, 球蛋白由 6 个亚基对组成, 6 个亚基对则由 2 条相对分子质 这 量在 20 ~ 30 kDa 之间的多肽链( α 链和 β 链 ) 构成。 从图 1 可以看出, 经过微生物发酵后, 菜籽粕蛋白中 12S 球蛋白组分明显的降解为小分子蛋白、 肽及氨 基酸, 降解后的蛋白质相对分子质量主要集中在 19 kDa 以下。 2. 4 微生物发酵对菜籽肽含量的影响 研究发现, 经过微生物发酵后, 菜籽粕中相对分

后离心, 通过测定上清液 pH, 发现发酵后菜籽粕的 pH 从 5. 54 下降到 4. 35, 为了进一步考察发酵后菜 籽粕中有机酸乳酸含量的变化, 采用 HPLC 测定菜 籽粕中乳酸的含量, 结果见图 3。 从图 3 中可以看 出, 过 发 酵 后, 籽 粕 中 乳 酸 含 量 由 原 来 的 经 菜 1. 03% 提高到 2. 53% 。李鹏等[19]的研究表明, 与不 添加酸化 剂 的 基 础 日 粮 相 比, 基 础 饲 粮 中 添 加 在 0. 3% 乳酸型酸化剂, 仔猪的日采食量提高 4. 46% ,

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料重比降低 25. 13% , 腹泻率降低 35. 96% 。 饲料中 乳酸含量的增加能降低饲料的 pH, 改善菜籽粕的适 口性, 提高动物的采食量。 同时也能激活胃蛋白酶

酶原, 促进胰液、 胆汁分泌及胆囊收缩, 促进对营养 物质的消化吸收, 还具有抑制有害微生物生长, 改善 胃肠道环境等作用。

图3

发酵前后乳酸含量测定的 HPLC 谱图 [ 李培武, 4] 丁小霞. 我国双低油菜全程质量控制标准体系 J] 2008( 2) : 9 - 11. 的研制[ . 农业质量标准, [ VIG A P, 5] WALIA A. Beneficial effects of Rhizopus oligosfibre and porus fermentation on reduction of glucosinolates, phytic acid in rapeseed ( Brassica napus) meal[ . BioreJ] source Technology, 2001, 3) : 309 - 312. 78( [ 李延海, 6] 耿二强, 张山林, 用微生物发酵脱毒菜籽粕 等. [ . 中国饲料, J] 1997( 17) : 35 - 36. [ 孙林, 7] 李吕木, 张邦辉, 多菌种固态发酵菜籽粕的研 等. J] 2009, 1) : 85 - 89. 24( 究[ . 中国粮油学报, [ 刘绚霞, 8] 杨莉. 分光光度法测定油菜籽中硫代葡萄糖甙 [ . 陕西农业科学, J] 2002( 6) : 5 - 7. [ GB / T 5009. 5—1985, 9] S] 食品中蛋白质的测定方法[ . [ 10] 陆健. 蛋白质纯化技术及应用[M] 北京: 化学工业 . 2005. 出版社, [ 11] GB / T 22492—2008, S] 大豆肽粉[ . [ 12]王潍波, 赵国琦, 韩庆广, 胃蛋白酶 - 胰蛋白酶体外消 等. J] 2009( 2) : 41 - 43. 化豆粕适宜条件的研究[ . 中国饲料, [ 13] SOUTH J. Changes in organic acid levels during malting [ . Journal of the Institute of Brewing, J] 1996, ( 3) : 102 161 - 166. [ 14] NEWKIRK R W, CLASSEN H L, SCOTT T A, al. The et digestibility and content of amino acids in toasted and non - toasted canola meals [ . Canadian Journal of AniJ]

3





利用卡氏酵母菌、 枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌 对菜籽粕进行混合固态发酵, 使菜籽粕中主要的有 害物质硫甙的含量由 42. 98 μmol / g 下降到 20. 01 μmol / g, 降解率为 53. 4% , 粗蛋白质含量由 39. 99% 提 高 到 45. 84% , 基 酸 含 量 由 31. 02% 提 高 到 氨 34. 87% 。且菜籽粕蛋白的降解作用明显, 发酵后的 蛋白质相对分子质量主要集中在 19 kDa 以下, 小于 5 kDa 的 菜 籽 肽 含 量 由 原 来 的 2. 48% 提 高 到 10. 58% , 胃蛋白酶 - 胰蛋白酶两步法测定的蛋白质 快速体外消化率也提高了 1. 94% , 同时有益的代谢 产物 乳 酸 也 得 到 了 积 累, 量 由 1. 03% 提 高 到 含 2. 53% 。经过微生物发酵后, 菜籽粕品质得到了综 合改善。 参考文献:
[ 操丽丽, 1] C]/ / 姜绍通. 菜籽粕的深度开发与利用研究[ 中国粮油学会油脂分会第十八届学术年会暨产品展示 2009: 会论文选集. 江苏 无锡: 中国粮油学会油脂分会, 248 - 250. [ 周明. 饲料学[ . 合肥: 安徽科学技术出版社, 2] M] 2007. [ 傅寿仲, 3] 戚存扣, 浦惠明, 江苏油菜种质资源研究进 等. J] 2001, 1) : 69 - 73. 23( 展[ . 中国油料作物学报,

28 油脂化学

CHINA OILS AND FATS

2011 Vol. 36 No. 7

含山嵛酸低热量油脂的理化特性与功能性质表征
刘如灿, 单 良, 金青哲, 王兴国
( 江南大学 食品学院, 食品科学与技术国家重点实验室, 江苏 无锡 214122)

摘要: 对含山嵛酸低热量油脂的脂肪酸组成、 甘油三酯组成、 固体脂肪含量 ( SFC) 、 熔点、 结晶速率、 晶型及晶体形态进行研究, 结果表明含山嵛酸低热量油脂具有较好的功能特性, 不含反式脂肪酸, 可作为人造奶油 / 起酥油的基料油, 也可作为烹调油、 糖果脂及煎炸油等使用。 关键词: 含山嵛酸低热量油脂; 理化特性; 功能性质表征 中图分类号: TS225. 6; TQ646 文献标志码: A 文章编号: 1003 - 7969( 2011) 07 - 0028 - 05

Physicochemical properties and functional characterizations of reduced - calorie fats containing behenic acid LIU Rucan,SHAN Liang,JIN Qingzhe,WANG Xingguo
( State Key Laboratory of Food Science and Technology,School of Food Science and Technology, Jiangnan University,Wuxi 214122,Jiangsu,China) Abstract: The fatty acid composition, triglyceride composition,solid fat content, melting point,crystallization rate,crystal form and crystal habit of reduced - calorie fats containing behenic acid were studied. The results showed that reduced - calorie fats containing behenic acid had better functional characteristic, and it did not contain trans - fatty acid,and could be used as based oil of margarine / shortening,cooking oil,frying oil and so on. Key words: reduced - calorie fats containing behenic acid; physicochemical properties; functional characterizations

目前, 低热量油脂种类很多, 其质构和风味与天 然油脂相似, 但是通常不含必需脂肪酸, 而且理化特 性、 功能特性与天然油脂也不完全一致
[1 ]

需脂肪酸等优点

[2 ]

。 普通植物油与含山嵛酸等不

易被人体吸收的脂肪酸甘油酯酯交换可大幅降低油 脂的热量。本文对不同质量比的葵花籽油与三山嵛 酸甘油酯通过酶法酯交换获得的低热量油脂 ( 酯交 换油) 的理化特性与功能性质进行了研究, 为这类 低热量油脂的工业化应用提供参考。 1 1. 1 材料与方法 实验原料 固定 化 脂 肪 酶 Lipozyme RM IM, 性 301. 09 活 INU, 诺维信( 中国) 生物技术有限公司; 福临门葵花
[ 18]TAYLOR J, TAYLOR J R N. Alleviation of the adverse effect of cooking on sorghum protein digestibility through fermentation in traditional African porridges [ . International JourJ] nal of Food Science and Technology, 2002, 129 - 137. 37: [ 19] 李鹏, 武书庚, 张海军, 复合酸化剂对断奶仔猪生 等. . 长性能、 胃肠道酸度及消化酶活性的影响[J] 养猪, 2009( 1) : 5 - 8.

。 酯交换

技术是一种重要的油脂改性技术, 与氢化技术相比 具有产品风味好, 不产生反式脂肪酸, 不改变人体必
收稿日期: 2010 - 10 - 14 基金项目: 国家 863 重点项目( 2010AA101506) 作者简介: 刘如灿( 1986) , 在读硕士, 男, 主要从事低热量油 脂的研究与开发工作。 mail) wxg1013@ 126. com。 通信作者: 王兴国, 教授( E-

櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂櫂
mal Science, 2003, 1) : 131 - 139. 83( [ 15]于炎湖, 齐德生, 刘耘, 双低菜籽粕在生长肥育猪日粮 等. J] 2000( 12) : 22 - 26. 中的应用研究[ . 粮食与饲料工业, [ 16] 卿中全. Canola 菜籽粕在猪日粮中的应用[ . 国外畜 J] 2000, 4) : 12 - 14. 27( 牧科技, [ 17] 姚志勇, . 刘志友, 和希格. 小肽营养的研究进展[J] 2010, 1) : 41 - 42. 31( 畜牧与饲料科学,


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