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实验三 蛋白质的两性解离和等电点测定


实验三

蛋白质的两性解离 和等电点测定

一、实验目的

了解蛋白质的两性解离性质。 学习测定蛋白质等电点的一种方 法。

2、实验原理
蛋白质由许多氨基酸组成,虽然绝大多数氨基与羧基成肽 键结合,但是总有一定数量自由氨基与羧基,以及酚基、 巯基、胍基、咪唑基等酸碱基团,因此蛋白质和氨

基酸一 样是两性电解质。 调节溶液的酸碱度达到一定的氢离子浓度时,蛋白质分子 所带的正电荷和负电荷相等,以兼性离子状态存在,在电 场内该蛋白质分子既不向阴极移动,也不向阳极移动,这 时溶液的pH值,称为该蛋白质的等电点(pI)。当溶液 时溶液的pH值,称为该蛋白质的等电点(pI)。当溶液 pH低于蛋白质等电点时,即在H+较多的条件下,蛋白质 pH低于蛋白质等电点时,即在H 分子带正电荷成为阳离子;当溶液pH大于等电点时,即在 分子带正电荷成为阳离子;当溶液pH大于等电点时,即在 OH—较多的条件下,蛋白质分子带负电荷,成为阴离子。

蛋白质溶液的pH在等电点时,蛋白质的溶解度、粘 蛋白质溶液的pH在等电点时,蛋白质的溶解度、粘 度、渗透压、膨胀性及导电能力均最小,胶体溶液 呈最不稳定状态。 凡碱性氨基酸含量较多的蛋白质,等电点往往偏碱, 如组蛋白和精蛋白。反之,含酸性氨基酸较多的蛋 白质如酪蛋白、胃蛋白酶等,其等电点往往偏酸。 不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时,蛋 白质的理化性质都有变化,可利用此种性质的变化 测定各种蛋白质等电点。最常用的方法是测其溶解 度最低时的溶液pH值。 度最低时的溶液pH值。

本实验借观察在不同pH溶液中的溶解度 本实验借观察在不同pH溶液中的溶解度 以测定酪蛋白的等电点。 用醋酸与醋酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白 溶液中)配制成各种不同pH值的缓冲液,向 溶液中)配制成各种不同pH值的缓冲液,向 诸缓冲溶液中加入酪蛋白,沉淀出现最多的缓 冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。 冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。

3、实验材料
水浴锅、温度计、200mL锥形瓶、100mL 水浴锅、温度计、200mL锥形瓶、100mL 容量瓶、乳钵(准备实验用具) 容量瓶、乳钵(准备实验用具) 吸管、试管、试管架 0.4%酪蛋白醋酸钠溶液 0.4%酪蛋白醋酸钠溶液 1.0mol/L醋酸 1.0mol/L醋酸 0.1mol/L醋酸 0.1mol/L醋酸 0.01mol/L醋酸溶液 0.01mol/L醋酸溶液

4、操作步骤
(1)取同样规格的试管4支,按下表顺序分别精确地 )取同样规格的试管4 加入各试剂,然后混匀。(要求各试剂的浓度和加 入量相当准确)
试管号 1 2 3 4 蒸馏水 0.01mol/L醋酸 0.1mol/L醋酸 1.0mol/L醋酸 (ml) (ml) (ml) (ml) 8.4 8.7 8.0 7.4 0.6 — — — — 0.3 1.0 — — — — 1.6

(2)向以上各试管中加酪蛋白醋酸钠溶液 1mL,加一管,摇匀一管,此时1 1mL,加一管,摇匀一管,此时1、2、3、 4管的pH值依次为5.9、5.3、4.7、3.5,观 管的pH值依次为5.9、5.3、4.7、3.5,观 察其混浊度。

5、实验结果
静置10min后,再观察其混浊度,最混浊的 静置10min后,再观察其混浊度,最混浊的 一管的pH即为酪蛋白的等电点。 一管的pH即为酪蛋白的等电点。


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