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致病杆菌论文:致病杆菌 抗菌肽 分离纯化 抗菌活性


致病杆菌论文: NMC致病杆菌论文:致病杆菌 NMC-10 新抗菌肽的纯化及性质研 究

【中文摘要】抗菌肽广泛存在于动物、植物和微生物中,具有抗 菌活性的小分子肽,其具有抗菌谱广,热稳定、 对靶标不易产生抗性等 优点而受到广泛关注。 昆虫病原线虫共生菌致病杆菌是与斯氏线虫互 惠共生的一类特异生境的肠杆菌科细菌,在昆虫病原线虫侵染宿主昆 虫过程中能分泌多种活性物质以协助线虫成功侵染,具有对昆虫致病 和与线虫互惠共生的双重特性。 该类共生菌存在于昆虫病原线虫肠道 内,生境特异,其产生的多种特异结构抗菌物质在农业和医药业已经 显示了广阔的利用前景。为了挖掘新的抗菌肽资源,本论文以昆虫致 病杆菌 NMC-10 菌株为研究材料,从其培养液中分离纯化出 GP-19 和 EP-20 两种新抗菌肽,两个新抗菌肽对多种细菌和植物病原真菌均具 有良好抑制作用。 本研究为培育农作物抗病新品种提供了宝贵的抗菌 基因资源,也为新型生物农药的研发奠定了基础。主要研究结果如 下:1、筛选获得一株高活性生防菌株。从致病杆菌和发光杆菌 15 个 菌株中筛选到一株活性物质产量较高的菌株 NMC-10,研究了该菌株的 生长代谢特性,确定其代谢产物抑菌活性在震荡培养 48h 趋于稳定。 2、通过分子生物学鉴定,确定了 NMC-10 菌株的分类地位。扩增了 NMC-10 菌株的 16sRNA,构建了... 【英文摘要】Antimicrobial peptides (AMP) are small peptides with antibacterial, antifungal and other

bioactivities and exist in all classes of organisms. These peptides are demonstrated to be potential and broad spectrum antibiotics and do not cause target microorganism resistances. Gram negative bacteria belonging to the genera Xenorhabdus play a dual role in the process of nematode infecting susceptible host insect larvae, where they are mutually symbiotic with nematode and pathogenic to the insect. Novel antibacteri... 【关键词】致病杆菌 抗菌肽 分离纯化 抗菌活性 【英文关键词】Xenorhabdus budapestensis antimicrobial peptide isolation and purification antimicrobial activity

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【目录】致病杆菌 NMC-10 新抗菌肽的纯化及性质研究 6-7 Abstract 7 第一章 绪论 12-21

摘要

1.1 共生细

菌抗菌代谢物的研究概况 12-16 的生物学特征 12-13 质 13-14 14-15

1.1.1 致病杆菌和发光杆菌

1.1.2 致病杆菌属共生菌产生的抗菌物

1.1.3 发光杆菌属共生菌产生的抗菌物质 1.1.4 抗菌物质的编码基因 15-16 1.1.5 共生

菌抗菌物质的作用机制 16 16-20

1.2 抗菌肽的研究进展 1.2.2 抗菌肽的结 1.2.3 抗菌肽的作用方 1.4 本研究技术路

1.2.1 抗菌肽的分类 17-18

构特点及其对抗菌活性的影响 18-19 式 19-20

1.3 本研究目的和意义 20

线

20-21

第二章 高活性菌株的筛选、鉴定及抗菌代谢物理化 2.1 材料与方法 21-26 2.1.1 供试菌株

性质 21-35 21 22 26-34 26-29

2.1.2 培养基配方 21-22 2.1.4 实验方法 22-26

2.1.3 实验仪器与耗材 2.2 结果与分析

2.2.1 筛选获得高活性抗菌代谢物产生菌 2.2.2 系统发育树的构建及分类地位 29 2.2.3

NMC-10 菌株的代谢曲线 29-30 立 30-31

2.2.4 抗菌活性检测方法的确 2.2.6 植物病

2.2.5 抗菌代谢物粗提技术 31 31-32

原真菌指示菌的确定 性质 32-34

2.2.7 抗菌粗提组分的部分理化 第三章 抗菌肽的分

2.3 小结与讨论 34-35 35-55

离、纯化及质谱鉴定 35-41 35

3.1 材料与方法 3.1.2 实验仪器与耗材 3.1.4 非变性和变性

3.1.1 供试指示菌 35 3.1.3 抑菌活性监测方法 35 35-36

聚丙烯酰胺凝胶电泳 泳 36

3.1.5 Tricine-SDS-PAGE 凝胶电 3.1.7 液相色谱层析 3.1.9

3.1.6 薄层层析分离 36-37

分离 37-41 质谱鉴定 41 离与纯化 41-42

3.1.8 液相色谱检测抗菌肽纯度 41 3.2 结果与分析 41-53

3.2.1 薄层层析分 3.2.3

3.2.2 离子交换层析纯化 42-44 3.2.4 凝胶过滤层析(分子筛)纯化

疏水层析纯化 44-46 46-47

3.2.5 反相层析纯化 47-50

3.2.6 液相检测抗 3.2.8

菌组分纯度 50-51 序列比对 53

3.2.7 质谱鉴定抗菌肽 51-53

3.3 小结与讨论 53-55

第四章 抗菌肽的

生物信息学分析 55-62 肽序列 55 分析 55-61 抗菌肽信号肽分析 58-59

4.1 材料与方法 55

4.1.1 抗菌 4.2 结果与 4.2.2

4.1.2 生物信息学分析方法 55

4.2.1 抗菌肽理化性质的分析 55-56 56-58 4.2.3 抗菌肽跨膜结构分析

4.2.4 抗菌肽的亲水性/疏水性分析 59 59-60

4.2.5

抗菌肽二级结构预测 60-61

4.2.6 三级结构预测和同源建模 第五章 抗菌肽的合成及 5.1.1 供试菌

4.3 小结与讨论 61-62

生物活性 62-70 株 62 62

5.1 材料与方法 62-64

5.1.2 供试培养基 62 5.1.4 抗菌肽的合成 62-63

5.1.3 实验仪器和耗材 5.1.5 液质联用鉴定和

纯度检测 63 63 64-69

5.1.6 EP-20 和 GP-19 的生物活性测定 5.2 结果与分析 5.2.2 合

5.1.7 部分理化性质测定 63-64

5.2.1 合成抗菌肽的质谱鉴定 64-65

成肽的纯度检测 65-66 性比较 66-68 小结与讨论 69-70 71-79 致谢

5.2.3 合成多肽与天然多肽的抑制活 5.3

5.2.4 合成肽的部分理化性质 68-69 第六章 全文结论 70-71 79-80 作者简历 80

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