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井冈霉素高产菌株原生质体诱变筛选研究


井冈霉素高产菌株原生质体诱变筛选研究 摘要以吸水链霉菌井冈变种 k-121-5 为出发菌株制备原生质体,并对其进行 紫外诱变,通过筛选得到 5 株较为高产的菌株,经连续传代、摇瓶发酵,井冈霉素 A 产率比出发菌株提高 14%~26%。 关键词井冈霉素;吸水链霉菌井冈变种;原生质体;诱变;筛选 ResearchonScreeningofJinggangmycinstrainwithHigh-yieldbyProtoplastMutatio n QIN jing-yu 1LI shi-jie 1LIU Hua-mei 2 (1 College of Biological Engineering,Hubei University of Technology,Wuhan Hubei 430068; 2 Wuhan Kernel Bio-tech Co.Ltd) AbstractStreptomyces hygroscopicus var. jinggangensis Yen K-121-5was accomplished protoplasts preparation. The protoplasts were treated with ultraviolet irradiation,screened on culture plate and obtained 5 high high-yield strains. Jinggangmycin A yields of the mutation strains was 14%~26% higher than the original strain by shaking flask fermentation after series transfer culturing. Key wordsJinggangmycin;Streptomyces Yen;protoplast;mutation;screening hygroscopicus var.jinggangensis 井冈霉素属氨基糖苷类农用抗生素 , 由吸水链霉菌井冈变种 (Streptomyces hygroscopicus var. jinggangsis Yen)发酵产生,能有效防治水稻纹枯病,生产成本低, 高效、安全,是目前使用最广泛的农用抗生素[1-2]。井冈霉素在中国生产使用 30 多年,菌株的单位产量仍较低。该文以原生质体诱变的方法获得突变菌株,并从中 筛选出多株单位产量较高的井冈菌株供生产使用。 1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 菌株。 以湖北省工业微生物重点实验室诱变筛选所得的菌株 k-121-5 为 出发菌株。 1.1.2 培 养 基 。 ① 菌 丝 体 培 养 基 : 葡 萄 糖 1.0%, 酵 母 膏 0.4%, 蛋 白 胨 0.4%,MgSO4· 7H2O 0.05%,KH2PO4 0.2%,K2HPO4 0.4%,甘氨酸 0.7%。②发酵培 养基:大米粉,豆粕粉,酵母粉以及各种微量元素。 ③再生培养基:蔗糖 20.5%,K2SO4 0.025%, 酪 蛋 白 氨 基 酸 0.01%,L- 脯 氨 酸 0.01%, 微 量 元 素 溶 液 0.2%, 琼 脂 2.5%,KH2PO4 0.005%(分开灭菌),CaCl2· 2H2O 0.368%(分开灭菌)[3]。 1.1.3 缓冲液。蔗糖 10.3%, 微量元素 0.2%,K2SO4 0.025%,MgCl2· 6H2O 0.203%,KH2PO4 0.00

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