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江苏农业科学   2004 年第 5 期 文章编号 : 100221302 ( 2004) 0520043203

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GJ 23 生防菌剂防治南方根结线虫研究
付   , 李红梅 , 丁国春 , 郭坚华 鹏
( 南京农业大学植物保护学院 ,江苏南京 210095)

>   摘要 : 用不同浓度的 G 23 生防菌剂菌悬液和发酵上清液原液 ,对南方根结线虫的二龄幼虫和卵进行处理 , J

评价 G 23 生防菌对南方根结线虫的生物防治效果 。结果显示 , G 23 生防菌剂的菌悬液和上清液原液的不同稀 J J 释倍数均可抑制根结线虫二龄幼虫的活性 ,但可促进其卵的孵化 。温室盆钵试验结果表明 ,2 倍稀释的 G 23 菌 J 液对南方根结线虫的产卵能力和根结的形成有显著的抑制作用 ,对番茄生长有促进作用 。    关键词 : 南方根结线虫 ; 生防菌剂 ; 防治    中图分类号 : S48215 + 1    文献标识码 : A

   根结线虫 ( Meloi dogy ne spp . Chitwood) 是植物 根系定居性内寄生物 , 是当前我国主要的农作物病 原线虫之一 。在全国绝大部分省区均有分布 , 可侵 染数百种作物 , 其中蔬菜果树受害最为严重 。近年 来由于大棚蔬菜栽培的普遍推广 , 南方根结线虫 ( Meloi dogy ne i ncognit a ) 病害的发生有显著的上升 和加剧 ,发病田的寄主常年减产 15 %~ 20 % , 严重 时达到 70 %以上 [ 1 ] 。而防治根结线虫的化学药剂 常带来环境污染和人身安全等问题 , 这在很大程度 上限制了其使用 。生物防治作为最有前途的防治手 段 ,已逐渐受到世人的关注 。 利用植物根围促生细菌 ( P GPR) 防治植物病害 成为近年来研究的热点 , 而在国内利用根围促生细 菌防治根结线虫的研究才刚刚开始 。南京农业大学 植物保护学院细菌实验室自 1991 年以来已经筛选 出了 100 余株 P GPR 菌 , 并制成一系列的菌剂成功 地用于蔬菜青枯病等土传病害的防治 [ 2 ] 。本研究 通过使用 3 菌混合的生防菌剂 G 23 对南方根结线 J 虫二龄幼虫和卵进行处理以及温室盆钵试验 , 来评 价其对根结线虫病的防治效果 。
收稿日期 :2004203226

1  材料与方法 1. 1   根结线虫二龄幼虫悬浮液的制备

从番茄根部挑取南方根结线虫新鲜卵块 , 置于 贝曼漏斗中孵化 ,24 h 后开始收集幼虫 ,每天收集 1 次 ,共 收 集 7 d 。线 虫 液 稀 释 为 含 二 龄 幼 虫 100 条/ ml ,4 ℃ 保存 、 。 备用 1. 2   卵悬浮液的制备 将有根结的番茄根剪碎后放入三角瓶中 , 加
0. 5 % NaClO 液 100 ml , 用力摇 1 ~ 2 min 后 , 快速

倒入 200~500 目筛组中并用自来水冲洗 10 min ,收 集 500 目 筛 网 中 的 卵 [ 3 ] , 稀 释 成 浓 度 为 3 000 粒/ ml 的卵悬浮液 。 1. 3  G 23 菌制剂 J 发酵后的菌液经离心得上清液原液和菌体 , 将 菌体按 1∶ 配成含有 10 9 CFU/ ml 的菌悬液 。 40 1. 4   室内离体测定 平均室温在 20 ℃ 左右时 ,分别将 G 23 的菌悬 J 液和上清液原液稀释成 2 倍液 、 倍液和 10 倍液 , 5 各吸取 2 ml ,加入直径为 7. 5 cm 的灭菌培养皿中 , 然后分设 2 种试验 : ① 在培养皿中再加入 2 ml 二龄 幼虫的悬浮液 , 以清水和 5 倍 、 倍稀释的培养液 10 作对照 ,重复 3 次 ,分别在 12 h 、 h 和 36 h 观察线 24 虫的活力 ; ② 在培养皿中再加入 2 ml 根结线虫卵悬 浮液 ,以清水和 2 倍 、 倍 、 倍稀释的培养液作对 5 10 照 ,重复 3 次 ,分别在 4 d 、 d 、 d 和 10 d 观察卵的 6 8 孵化情况 。

基金项目 : 国家 863” “ 计划资助项目 ( 编号 :2002AA244041) 。

作者简介 : 付  鹏 (1965 - ) , 女 , 江苏徐州人 , 硕士 , 农艺师 , 主要从
fupeng @njau. edu. cn 。

事植物 线 虫 病 害 的 防 治 研 究 。 Tel : ( 025 ) 84395240 ; E2mail :

? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.

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江苏农业科学   2004 年第 5 期

1. 5   温室盆钵试验

2. 2  G 23 对南方根结线虫卵孵化的抑制作用 J

将供试番茄品种播种于灭菌土中 ,出苗 42 d 后 选取长势一致的植株移栽于装有灭菌土 ( 沙土和黏 土等体积混匀) 、 直径为 21. 5 cm 的塑料盆钵中 。移 栽 2 d 后 , 分别浇稀释 2 倍 、 倍 、 倍的菌悬液 10 100
100 ml , 2 d 后 以 每 株 3 000 粒 卵 的 接 种 量 将 按 1. 1. 2法制得的卵悬浮液分别滴注到盆栽番茄的根

从表 2 可以看出 , 菌悬液的 2 倍和 5 倍稀释液 在处理后 4 d 和 6 d 的卵孵化率低于清水对照组 ,表 明低稀释倍数的菌悬液在处理短期内可以明显抑制 卵的孵化 。而稀释 10 倍的菌悬液在处理后 6 d 、 d 8 和 10 d 的 孵 化 率 分 别 比 清 水 对 照 高 20. 6 % 、 39. 6 % 、 3 % ,表明高稀释倍数的菌悬液对线虫卵 9. 的孵化有一定的刺激作用 。上清原液 2 倍 、 倍和 5 10 倍稀释液处理南方根结线虫卵 6 d 、 d 和 10 d 8 后 ,卵的孵化率显著高于 2 倍和 5 倍稀释培养液对 照 ,表明上清原液的 2 倍 、 倍和 10 倍稀释液都对 5 南方根结线虫卵的孵化有促进作用 。
表 2  G 23 处理后南方根结线虫卵的孵化率 J 菌液 种类 菌悬液 处    理
4d G 2322 J G 2325 J 7. 9b 14. 1b 24. 9a 23. 3a 10. 9c 18. 2b 37. 9a 4. 7c 7. 4c 17. 4b

部 ,各处理重复 4 次 。 接种后的盆钵随机排列于温 室内的平台上 ,20~28 ℃ 培养 56 d 后缓慢取出各接 种植株 ,在水中洗净根系 ,分别称根重和冠重 。将根 系置于解剖镜下 ,记录根结数 、 卵块数 ( 用 0. 05 %薯 [4 ] 红溶液染色 3 ~ 4 min) 和每卵块平均卵量 ( 以随 机取 10 块卵块的平均卵量计 , 将 10 块卵块溶于 1 ml 的 0. 5 % NaClO 溶液中 ,震荡 1 min 后吸取 50 μ l 记数 ,重复 3 次) 。按 Duncan 氏新复极差法测验各 处理间的差异显著性 ( P < 0. 01) 。
2  结果与分析 2. 1  G 23 对南方根结线虫二龄幼虫的抑制作用 J

卵孵化率 ( %)
6d 18. 3c 37. 8b 52. 6a 43. 6b 26. 4b 50. 8a 59. 5a 12. 5b 20. 3b 52. 4a 8d 49. 7c 59. 2b 67. 0a 48. 0c 50. 4b 58. 1a 60. 0a 34. 0c 41. 2b 69. 9a 10 d 69. 0a 66. 0a 70. 0a 64. 0a 58. 2b 70. 3a 71. 7a 44. 1b 56. 4b 71. 2a

CK( 清水对照)

上清液

从表 1 可以看出 ,处理后 12 h ,菌悬液稀释 5 倍 和 10 倍对幼虫的抑制作用略高于清水对照组 ,但无 显著差异 。处理后 24 h 、 h 和 48 h , 两处理组对 36 南方根结线虫二龄幼虫 (J 2 ) 的抑制作用逐渐增强 , 与对照差异显著 ,在处理后 48 h ,菌悬液稀释 5 倍液 可以使 90. 9 %的 J 2 处于僵直状态 。与对照相比 , 上清液的 5 倍和 10 倍稀释液在处理后 12 h ,非常显 著地抑制 J 2 的活性 , 使 95 %以上的幼虫处于僵直 状态 。而 培 养 液 5 倍 和 10 倍 稀 释 液 对 照 只 有 16. 3 %和 5. 1 %的幼虫处于僵直状态 。但处理后 48 h ,5 倍和 10 倍稀释液对 J 2 活性的抑制作用逐渐减 弱 ,分别使 9. 6 %和 21 %的 J 2 处于僵直状态 。上清 液 2 倍稀释液对 J 2 的抑制作用表现比较平稳 。
表 1  G 23 对南方根结线虫二龄幼虫活力的抑制作用 J 菌液种类 菌悬液 处  理
G 2325 J G 23210 J CK( 清水对照) S2 G 2322 J S2 G 2325 J S2 G 23210 J CK25 CK210 12 h 12. 3a 6. 7a 4. 5a 63. 1b 95. 9c 99. 3c 16. 3a 5. 1a

抑制率 ( %)
24 h 38. 6a 12. 6b 4. 1b 64. 0b 37. 6c 69. 7b 8. 81a 7. 73a 36 h 68. 6a 37. 6a 6. 9b 84. 9a 13. 6b 30. 9b 6. 3c 8. 1c 48 h 90. 9a 42. 5b 4. 1c 65. 2a 21. 0b 9. 6b 20. 7b 12. 2b

上清液

分别为培养液 5 倍和 10 倍稀释对照 。

   : G 2325 为 G 23 菌悬液的 5 倍稀释液 ,余类推 。CK25 、 210 注 J J CK

? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.

5 、 210 为培养液 2 倍 、 倍 、 倍稀释液对照 。 CK 5 10

2. 3   温室盆钵试验

从表 3 可以看出 , G 23 菌悬液 2 倍稀释液处理 J 番茄植株 56 d 后 , 植株的冠和根分别比对照增加 10. 3 g/ 株和 2. 2 g/ 株 ,各增长了 39. 8 %和 22. 9 % , 对番茄的生长有明显的促进作用 , 同时根系上的根 结数目比对照组明显减少 。 G 23 菌悬液 2 倍稀释 J 液除对南方根结线虫二龄幼虫的侵入有明显的抑制 作用外 ,还对雌虫的产卵能力有抑制作用 ,平均每卵 块 卵量显著少于对照组 。 菌悬液 10 倍稀释液处理
表 3  G 23 菌液对番茄南方根结线虫病害 J 防治的温室盆钵试验结果 冠重 卵块数
113b 257a 304a 263a (g/ 株) 36. 2a ( 块/ 株)

100 :100 倍菌液处理组 。

   : G 2322 为 G 23 菌悬液的 2 倍稀释液 ,其余类推 。CK22 、 2 注 J J CK 处理 根重 根结数
143b 293a 332a 294a

CK( 对照)

   : G 2322 : 2 倍菌液处理组 ; G 23210 : 10 倍菌液处理组 ; G 232 注 J J J

G 232100 J

G 23210 J

G 2322 J

CK22 CK25

CK210

S2 G 2322 J S2 G 2325 J 8. 4a 9. 0a 9. 6a

S2 G 23210 J (g/ 株) 11. 8a

G 23210 J

卵数
233c

( 个/ 株)

( 粒/ 块) 384ab 467a 367b

31. 2ab 30. 4ab 25. 9b

付  鹏等 : G 23 生防菌剂防治南方根结线虫研究 J

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对南方根结线虫二龄幼虫的侵入和雌虫产卵能力无 明显作用 ; 而 100 倍稀释液对南方根结线虫二龄幼 虫的侵入和雌虫的产卵有促进作用 。
3  讨论

在处理初期 , G 23 的 5 倍 、 倍稀释上清液原 J 10 液对 J 2 的活性有强烈的抑制作用 ,而 5 倍 、 倍稀 10 释菌液和 2 倍稀释上清液原液对 J 2 的抑制作用是 逐渐增强的 。类似的作用仍未见报道 , 有待进一步 研究 。 本次温室试验仅研究了在灭菌土条件下 , 经菌 液处理的番茄苗再接种根结线虫卵悬液的情况 , 因 而有必要研究自然土中有其他微生物存在下的互作 情况 。另外 ,还将对菌抑制根结线虫的侵入的机制 做仔细的研究 [ 7 ] 。 本试验中先采用 0. 5 %的 NaClO 溶解卵块 , 再 吸取少量记数求得平均每块卵卵数的方法 , 较逐一 挑取卵块记数求得平均数的方法更简单 , 可在类似 试验中应用 。
参考文献 :
[ 1 ] 徐建华 ,等 . 南方根结线虫群体间致病性变异的生物测定 [J ] . 南

根结线虫的生防因子有真菌 、 、 细菌 病毒和原生 动物 等 , 有 产 生 几 丁 质 酶 的 , 如 淡 紫 拟 青 霉 ( Pacilom yces lil aci n us ) [ 5 ] , 可寄生根结线虫的卵 ; 有产生蛋白水解 酶 的 , 如 哈 兹 木 霉 ( T richoderm a
harz ian u m )
[6 ]

,可优先占领根结线虫幼虫的侵入位

点等 ; 还有专化性地寄生根结线虫幼虫的穿刺巴氏 菌 ( Pasteu ria penet rans ) [ 7 ] 。寻找效能稳定并能大 规模生产开发的生防因子来防治根结线虫病害 , 一 直是国内外研究人员关注的问题 。生防菌剂 G 23 J 是由土壤中分离出的根围促生细菌 ( P GPR) 研制而 成的 ,本研究进行了 G 23 对南方根结线虫二龄幼 J 虫的活性和卵孵化的室内测定 , 并进行了温室盆钵 试验 ,探讨了 G 23 的生防机制并评价其生防效果 , J 从而为今后开展大规模的田间生防试验提供理论 依据 。
G 23 菌悬液及上清液原液对 J 2 的活性有明显 J

京农业大学学报 , 1999 ,22 (3) :33~36.
[2 ] Guo J H , et al . Biocontrol efficiency of t hree P GPR strains admix2 ture to pepper bacterial wilt [J ] . Bacterial Wilt Newsletter ,2002 ,17 : 3. [ 3 ] MeClure MA , et al . A met hod for obtaining quantities of clean
Meloi dogy ne eggs[J ] . Journal of Nematology ,1973 ,5 :230.

的抑制作用 ,对 M . i ncognit a 的卵孵化有显著的促 进作用 ,这与几丁质酶的作用很相似 [ 6 ] 。但该菌是 否产生几丁质酶有待进一步研究 。 G 23 的 2 倍稀释菌液对 J 2 的侵入及对 M . J
i ncognit a 的繁殖力有抑制作用 , 处理组的卵块量 、

[ 4 ] Hussey RS , et al . A comparison of met hods of collecting inocula of port , 1973 , 57 :1025~1028.

[ 5 ] 肖炎农 ,等 . 淡紫拟青霉几丁质酶对南方根结线虫的影响 [J ] . 中

国生物防治 , 1997 , 13 (1) : 29~31.

卵块形成率 、 每卵块平均卵量均少于对照组 。寄生 性生防菌如 Pesteu ria penet rans 等 [ 4 ] 能抑制 J 2 的活 性和根结线虫的繁殖力 。但 G 23 能否寄生根结线 J 虫仍有待研究 。

[ 6 ] 汪来发 ,等 . 寄生真菌对线虫致病力的评价 [J ] . 林业科学 ,1999 , 35 (3) : 41~47.

[ 7 ] 潘沧桑 ,等 . 穿刺芽孢杆菌防治根结线虫的盆栽试验 [J ] . 厦门大

学学报 ( 自然科学版) , 1998 , 37 (5) :747~753.

( 上接第 32 页) 3. 4   开农 9686

4  小结

荚果 产 量 201. 1 kg/ 667m2 , 籽 仁 产 量 143. 2
kg/ 667m ,分别比对照减产 15. 4 %和 18. 6 % , 产量
2

最低 。该品种出苗整齐 ,苗期生长旺盛 ,中后期生长 相对较差 。株高中等 ( 株高 54. 1 cm ) 。荚果葫芦 形 ,籽仁近圆形 ,皮色深紫 , 百果重 159. 4 g , 百仁重 63. 8 g ,荚果饱满度差 ,出仁率低 ( 71. 2 %) 。籽仁休 眠性弱 , 抗病性中等 , 抗涝性中 , 倒伏重 。可考虑作 为特殊品种进行种植 。

适合于江苏淮北地区种植 。邢台花皮和开农 9686 产量低 ,抗逆性差 ,但它们外观性状好 ,品种特殊 ,可 继续对其进行品种改良 。
参考文献 :

[ 1 ] 黄秀泉 . 黑花生的特征特性及其高产栽培 [J ] . 江西农业科技 , 2003 , (5) :11~12.

? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.

Meloi dogy ne spp . ,including a new technique[J ] . Plant Disease Re2

试验结果表明 , 山东黑花生产量高 , 抗逆性强 ,


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