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第五章 食用菌菌种生产


第五章 食用菌菌种生产 一、母种制作
1、配方:马铃薯 200 克,葡萄糖 20 克,琼脂 18~20 克,水 1000 毫升。 2、制作:马铃薯挖去芽眼,去皮洗净,切成薄片后加水,在铝锅中煮沸 25~30 分钟,用 4 层纱布过滤, 取滤液放入铝锅中,加入琼脂,小火加热并不断搅拌,待琼脂溶化后加入葡萄糖,加开水补足 1000 毫升, 搅匀,趁热装入盐水瓶中,每瓶装 8~10 毫升,塞上棉塞 棉塞要求干燥、松紧、长度合适 ,再用牛皮纸 包住棉塞及瓶口部分,用胶圈扎紧瓶口。 3、灭菌 采用高压灭菌,若没有专用高压锅,可用家用高压锅进行灭菌。方法是:将装好培养基的菌种瓶放置在 高压锅中,瓶间留有空隙,不可堆放过紧,以利蒸汽循环,灭菌彻底。当压力表指针指到 0.05 时,打开 放气阀,集中排出冷空气,使压力降到零时,关闭排气阀进行升压灭菌,自动放气后保持 30 分钟 家用普 通高压锅灭菌 1.5 小时 ,让其自然冷却,取出放置在接种箱中备用。 4、菌种分离 主要采用组织分离法。通常是从食用菌子实体内部分离纯菌种,操作时,从子实体内切取一小块组织, 放在培养基中培养可长出纯菌种,且菌丝萌发快,遗传性状稳定,后代不易发生变异。 1.种菇消毒:种菇采下后,切去菌柄,放入洗净的盘内,在装有紫外灯的接种箱内照射 20~30 分钟。 2.接种块切取:在已消毒的接种箱内,撕开子实体,用经酒精灯火焰杀菌冷却的小刀,在菌柄与菌盖 交接处内部切取黄豆大小组织块,放入菌种瓶内培养基上培养。 3.接种块选择部位:接种块选择部位因食用菌种类不同而异,菇体肥厚的种菇,在菌盖外缘菌盖皮和 菌褶交接处切取组织块进行分离。菌体小、盖薄、柄空的菌类 如金针菇 ,应快速击掉菌盖,用接种针钩 取菌柄顶端生长点组织进行分离。 菌肉极薄菌柄中空孢子不易萌发的伞菌类,可采用子实层分离法,选取 半破膜的子实体,移入培养基上,丝萌发后即转入新的培养基上。对子实体较大、质地结实的多孔菌类, 应取子实体外缘菌肉组织块。 含水量低的子实体切取 5 平方厘米的小块,在酒精灯火焰上烘烤 5~10 秒 钟,使子实体表现微焦,然后用无菌刀切取菌肉组织一小块,移入培养基上。 5、培养及管理 将放入组织块的菌种瓶竖放在室内架上或平台上, 室内温度控制在 20~28℃, 经过 1~2 天组织块萌发。 菌丝生长期间注意观察。发现污染及时挑出,经过 10 天左右菌丝长满瓶,母种制作成功。 二、原种制作

(一) 、材料准备 1?选取 1~2 年生、粗 10 毫米的阔叶树枝条,最好是进入休眠期的枝条。 砍下后,将枝条破成两瓣,然后把它砍成一头尖一头平、长 3~4 厘米的短条,晒干或烘干。 2?选一根废弃的自行车内胎,用较为锋利的刀子切成宽 4 毫米的橡皮圈,供封扎瓶口用。 此外,准备 12 厘米×12 厘米的聚丙烯封口膜和相同规格的报纸,供封口用。 (二) 、制作方法 1?配方:枝条 10 公斤、米糠 25 公斤、石膏 100 克、蔗糖 100 克、磷 酸二氢钾 10 克、硫酸镁 10 克,料∶水=1∶1.8。 2?制作方法:(1)先将量好的水倒入大锅 内,再将蔗糖、磷酸二氢钾、硫酸镁溶解于水中,配制营养液。(2)将枝条倒入大锅内,加 热煮沸 30~40 分钟,随机从锅内抽取数根枝条,用刀纵切检查枝条吸收营养液的情况。如 果水吸透至 2/3 时,便倒入拌匀的石膏、米糠,与枝条混合均匀。(3)将枝条尖端朝瓶底整整 齐齐直立装入 500 毫升的罐头瓶内,在枝条面上放些碎的培养料,以填充枝条的空隙。一般 一瓶可装 110~120 根。(4)用清水洗净瓶身、瓶口及瓶口内壁,报纸在内、薄膜在外放在瓶 口上,套上一根橡皮圈扎好。(5)在 15 公斤/厘米 2 蒸汽压下灭菌 1?5 小时。冷却后按常规 接种、培养。 (三) 、应用 1?由于枝条培养基的通透性好,在 23~25℃下培养,菌丝生长迅速,20 天 左右便长满瓶,培养时间比常规原种缩短 10 天左右,从而缩短了菌龄,十分适合于赶制木 腐菌菌种。2?枝条表面积大,菌丝除了生长在枝条表面外,还可长入枝条内,携带的菌丝

量大,在转接栽培种时无疑就是增大了接种量。在转接木屑、谷壳类栽培种时,只需用无菌 镊子夹起一根枝条插入培养基中间即可接种操作方便简单, 有利于减轻污染, 增加接种成功 率。 接种后,菌种从上、中、下多点萌发, 菌丝从里向外蔓延, 满瓶满袋时间一般可提早 5~ 7 天。此外,一瓶原种可接 110~120 袋(瓶)的栽培种,接种袋(瓶)数多节约原种,较为经济。 三、栽培种制作 栽培种制作等同于原种,只是所用的菌种袋不同 四、菌种保藏与复壮 (一) 、菌种保藏方法 菌种保藏方法很多,常用的有低温保藏法、液体石蜡保藏法、麦粒保藏法、盐水保藏法 等多种保藏方法,菇农可根据自身条件加以选择。有条件的地方,同一菌株最好用几种方法 同时保藏。菌种保藏要由专人负责,做好菌种档案,详细记录菌种来源、移植经过、保藏情 况以及在生产中的使用情况等,定期检查菌种污染情况。对保藏的菌株,在使用前需先将菌 种置于适温下让其活化,然后转管,更新选育,每年要做一次出菇实验,对表现优良的菌种 方可用于生产。下面介绍几种常用的菌种保藏方法。 1、斜面低温保藏法:是菌种保藏最常用的方法。即将菌种在适宜的斜面培养基上培养成 熟后,放入 4—6℃冰箱中保存,一般 3—5 个月移植一次。为使菌丝体在培养基上不干、不 死,以延长保藏时间,应做到以下几点。 (1)要使用营养丰富的天然培养基,使菌丝体发育健壮。因为,生长健壮的菌种耐受低温 保藏,生长不良的菌种(如菌丝体纤弱、稀疏等)处于长期低温环境下,菌丝体往往会发生倒 伏,甚至自溶而失去生活力。 (2)琼脂具有保水的功能,在配制保藏用培养基时,琼脂量可从一般用量的 2.5%加大到 2%,以减少水分的蒸发。 (3)菌种培养成熟后,为减少培养基水分的散失,最好将试管棉塞齐管口处剪平,用矿 蜡封严,再包扎一层塑料薄膜,以延长保藏时间。 (4)加大试管内琼脂培养基的用量,使每管不少于 12 毫升,适当摆长斜面,以延缓水分 的损耗。事实证明,只要培养基不干,菌种也就不会死亡,也无损菌种的质量。 (5)为防止菌种在保藏过程中产生的酸分积累过多,在配制保藏培养基时还需加入少量 缓冲剂,一般加入 0.2—0.3%的磷酸氢二钾或磷酸二氢钾。 (6)保持冰箱内温度的稳定,不要随意或过多地打开冰箱,在条件允许下,设置一个永 久性的保藏冰箱,与经常需取用菌种的冰箱分开使用。 (7)在菌种培养基干缩到一定程度时,再取出转接试管,一般应每隔一定时期调换一次 培养基配方,以补充营养、水分,消除菌丝体代谢产物的影响,保持菌种正常的生活能力。 2、石蜡保藏法(即矿物油保藏法):在菌种斜面上注入一层无菌的液体石蜡,使菌丝体与 空气隔绝,以降低代谢活性,从而达到保藏的目的。此法一般可保藏 2—3 年,但最好 1—2 年移植一次。 加了石蜡的菌种, 置于室温下保藏比放在冰箱中保存更好。 液体石蜡在使用前, 经高压灭菌 2—3 小时后,再在 40℃烘箱中烤干水分。液体石蜡的装入量以淹过斜面尖端 1 厘米为宜,然后塞上棉塞(最好将棉塞齐管口剪平,用矿蜡密封),放于清洁避光、4—15℃ 常温下保存。在保存期间应定期检查,发现培养基露出液面,应及时补充灭菌液体石蜡。据 试验,在 5—28℃之间保存 6 年出菇率正常。使用时,可用接种铲直接挑取少许菌丝,接种 于另一斜面培养基上。刚从液体石蜡菌种中移出的菌丝体,常沾有较多的石蜡,生长较弱, 需再转管 1 次,方能恢复正常。 3、盐水保藏法:这是利用担子菌在液体振荡培养时,形成菌丝体球形颗粒的特性,用液 体培养法培养食用菌菌丝球, 然后进行保藏的一种方法。 将液体培养 1 周左右, 挑出菌丝体, 加入盛有生理盐水(0.85 克食盐溶于 100 毫升水中, 高温高压灭菌后即成生理盐水)的试管中,

封存后可在常温下存放 2 年,不影响菌种的存活和形成子实体。其方法是:用 300 毫升的三 角瓶,装入 50—60 毫升培养液(培养液采用马铃薯培养基,但不加琼脂),接入新鲜菌种 1 块(无菌操作),在 28℃、180 转/分的摇床中振荡培养 5—7 天。然后用无菌吸管从摇瓶中 取出 5—6 个菌丝球,置于生理盐水试管中(普通小试管可装 5 毫升生理盐水),用棉花塞紧 管口,以蜡密封,放在 4℃以下或常温下保藏。使用时开启管口,挑出菌丝体,放在斜面培 养基上培养。 4、自然基质保藏法 (1)麸皮保藏法:水与新鲜麸皮按 1:0.8 的比例混合拌匀,装入试管,占管深的 2/5, 洗净管壁,加棉塞,121℃灭菌 40 分钟,接入白灵菇菌种,24—28℃培养 6—8 天,菌丝在 培养基表面延伸即可。用真空泵抽干试管内水分,棉塞上滴加无菌凡士林,置干燥器内常温 下保存,2—3 年转接 1 次。 (2)木屑保藏法:按配方(阔叶树木屑 78%,麸皮 20%,蔗糖 1%,石膏 1%,料水比 1: 0.8)配制培养基,装入试管中,占管深 3/4,121℃灭菌 1 小时,接入白灵菇菌丝,24—28℃ 培养,当菌丝长到管深的 1/2 时,用接种钩挑去老接种块,石蜡溶封管口,包上塑料薄膜, 冰箱中或常温下保存,1—2 年转接 1 次。启用时,先将菌种活化培养 12—24 小时,再挑取 木屑内菌丝使用。 (3)麦粒保藏法:取健壮麦粒,淘洗后浸水 5 小时(水温 20℃),捞出稍加晾干,装入试 管,装量以 1/4 到 1/3 为宜,然后灭菌,灭菌后趁热摇散,放置冷却,向每支试管内接菌 丝悬浮液 1 滴,摇匀,在 24—26℃下培养,当大多数麦粒出现稀疏的菌丝体时,终止培养, 保藏在冷凉、干燥处(麦粒含水量下超过 25%) 。 5、担孢子滤纸保藏法:在孢子弹射装置内放数张小条黑色滤纸,整个装置高温灭菌。采 收菌幕将开、八九成熟的白灵菇子实体,先将菇体浸在 0.1%升汞液中杀菌 1—2 分钟,用无 菌水冲洗掉升汞溶液,再用无菌纱布揩干菇体,将菇体插在孢子弹射装置内的支架上,在 22℃下培养 2 天, 孢子即可弹射到滤纸条上, 然后将滤纸条卷起, 置无菌小试管内塞上棉塞, 用两层以上牛皮纸包好试管口,置无菌干燥器中 1—2 天,除去滤纸条上过剩的水分,放在 冰箱中保存。使用时,剪取一小段滤纸条,刮取上面的担孢子,让孢子萌发成菌丝体,通过 出菇实验筛选菌种,用于生产。用此法可保藏 3 年以上。 (二) 、菌种的退化与复壮 菌种长期保藏或长期施用以及转管次数过多,都会导致生活力降低,生产上使用的菌种 要经常进行复壮,目的在于确保菌种优良性状和纯度,防止退化。复壮方法有: 1、分离提纯:也就是重新选育菌种。在原有优良菌株中,通过栽培出菇,然后对不同系 的菌株进行对照,挑选性状稳定,没有变异,比其他品种强的,再次分离,使之继代。 2、活化移植:菌种在保藏期间,通常每隔 3—4 个月要重新移植 1 次,并放在适宜的温 度下培养 1 周左右,待菌丝基本布满斜面后,再用低温保藏。但应在培养基中添加磷酸二氢 钾等盐类,起缓冲作用,使培养基酸碱度变化不大。 3、更换养分:各种菌类对培养基的营养成分往往有喜新厌旧的现象,连续使用同一培养 基或同一树种木屑培养基, 会引起菌种退化。 因此, 注意变换不同树种和配方比例的培养基, 可增强新的生活力,促进良种复壮。 4、创造环境:一个品质优良的菌种,如传代次数过多,或受外界环境的影响,也常造成 衰退。因此,在育种过程中,应创造适宜的温度条件,并注意通风换气,保持室内干燥,使 其在适宜的生态条件下,稳定性状,健康生长。 (三) 、菌种检验方法 经过保藏和复壮的菌种,在生产使用前要对菌种质量进行鉴定,然后应用于生产,常用 的检验方法有六种。

1、直接观察:引进的菌种,首先用肉眼观察包装是否合乎要求;棉塞有无松动,试管、 玻璃瓶或塑料有无破损;棉塞和管、瓶或袋中有无杂菌和病虫侵染;菌丝色泽是否正常,有 无发生老化。然后在瓶塞边作深吸气,闻其是否具该菌种特有的香味。原种和栽培种其菌丝 粗壮整齐,分枝浓密,色洁白呈绒毛状,说明生长旺盛,打开棉塞有芳香气味。培养料相连 结不松散,呈白色,手捏有水印出现,说明菌种质量好;反之,瓶壁出现水珠,菌丝萎缩与 瓶壁脱离,表面菌被变色,培养料干涸松散,或出现酱红色斑点,原基纽结,则说明菌种老 化,以及有明显杂菌的,则为劣种,应淘汰。 2、显微镜检查:要准备好显微镜、载玻片、盖玻片、吸管、镊子、接种针、蒸馏水等物 品。在载玻片上放 1 滴蒸馏水,然后挑取少许菌丝置水滴上,盖好盖玻片,再置显微镜下观 察。也可通过普通染色后进行镜检。若菌丝透明,呈分枝状,有横隔,锁状联合明显,再加 上具有不同品种固有的特征,则可认为是合格菌种。 3、观测菌丝长速:供测的菌种接入新配制的试管斜面培养基上,置于最适宜的温、湿度 下培养。如果菌丝生长迅速,整齐浓密,健壮有力,则表明属优良菌种;若菌丝生长缓慢, 或长速特快,稀疏无力,参差不齐,易于衰老,则表明是劣质菌种。 4、耐高温测试:对一般中低温型的菌种,可先将母种试管数支置于最适温下培养,1 周 后取出部分试管,置 30℃下培养 24 小时后,再取出放于适温下培养,经过这样偏高温度的 处理,如果菌丝仍健壮、旺盛生长,则表明该菌种具有较耐高温的优良特性;反之,菌丝生 长缓慢,且出现倒伏发黄、萎缩无力,则可认为是不良菌种。 5、吃料能力鉴定:将菌种接入最佳配方的原种培养料中,置适宜的温、湿度条件下培养, 1 周后观察菌丝的生长情况,如果菌种块能很快萌发,并迅速向四周和培养料中生长伸展, 则说明该菌种的吃料能力强;反之,菌块萌发后生长缓慢,迟迟不向四周和料层深处伸展, 则表明该菌种对培养料的适应能力差。对菌种吃料的测定,不仅用于考核菌种本身,同时还 可以作为培养料选择的一种手段。 6、出菇试验:经以上几方面考核后的母种,认为是优良菌种,则可进行扩大转管。首先 取出一部分母种用于出菇试验,以鉴定菌种的实际生产能力。这是一项至关重要的工作,每 个菌种生产经营者必须切实做到。


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