当前位置:首页 >> 能源/化工 >>

对氨基酸的分离及其显色的研究


第’期 ’""’ 年 ’ 月

中 国 调 味 品
!"#$%&%!’$(#)%$*

F:M ’ N4?M ’""’

文章编号: (’""’) !""" # $$%& "’ # &q

uot;""( # "%

对氨基酸的分离及其显色的研究
黎景丽!, 文一彪’
(!) 原广州市致美斋食品有限公司, 广东 广州 广东 广州 ’) 广东省有线广播电视台 播出部, *!""%"; *!""(()

摘要: 研究酸解植物蛋白液中酸性氨基酸, 碱性氨基酸、 中性氨基酸、 芳香族氨基酸的分离方法及蛋 白质、 多肽、 氨基酸的纸上显色法, 以便鉴定氨基酸的种类。 关键词: 氨基酸; 分离; 显色 中图分类号: +,’"!)’文献标识码; . !"#$%&’$: +/01 23245 1678048 6/4 946/:8 :; 14235360<= 390<: 3>08, ?310> 390<: 3>08, <47653@ 390<: 3>08, 35:A 9360> 390<: 3>08 ;5:9 3>08 /B85:@BC48 D4=463?@4 25:640< 1431:<0<= 3<8 6/4 23245 >/5:936:=532/B :; 25:640<, 2:@B2426084, 390<: 3>08 0< :5845 6: 322530148 6/4 E0<8 :; 390<: 3>08) ()* +,%-#: 390<: 3>08; 14235364; >:@:5 84D4@:294<6

酱油、 蚝油、 鱼露、 鲜虾抽、 老抽内均含有 多种氨基酸, 酸碱法水解动植物蛋白液中也 含有多种氨基酸。但有什么氨基酸, 如何鉴 定是哪种氨基酸, 就酸水解植物蛋白液的研 究结果如下。

!)!

活性炭吸附芳香族氨基酸 用人造树脂分离氨基酸的方法如下:

将 不 含 FH& 的 蛋 白 质 水 解 液 调 节 2H %)"。通过装有交换阳离子的人造树脂, ( 含磺基的酚 琥珀酸树脂 !J # ! 或 !J # !"" 甲醛人造树脂) 的层析柱, 也可以用磺化煤, 此时吸附在柱上的是碱性氨基酸。未吸附的 氨基酸就被水冲洗下来。其次就是进行个别 氨基酸 的 洗 脱, 赖 氨 酸 !)*K L ’)*K H’ ,I洗脱; 此时一部份精氨酸和组氨酸也会进入 滤液中, 组氨酸可用 !K FH&?H’ I 洗脱, 铵离 留在柱上 子则由 !K HG@ 溶液洗柱时而移去; 的是精氨酸, 可用 %K HG@ 或 *K H’ ,I- 提取。 将分离出碱性氨基酸后的水解液通过装 有阴离子交换的树脂层析柱, 然后用水洗柱。 保留在柱上的谷氨酸与天门冬氨酸先用 *K 再 用 ’ K F3’ GI& 洗 脱 , HG@ 或 - K H’ ,I- 洗 ,

!

氨基酸的分离
将氨基酸分离成酸性氨基酸, 碱性氨基

酸, 中性氨基酸和芳香族氨基酸。 取酸水解氨基酸液适量通过阳离子交换 的层析柱, 碱性氨基酸就保留在层析柱上; 而 中性氨基酸和酸性氨基酸的混合液则进入滤 液中。再将滤液通过阴离子交换的层析柱, 一切酸性氨基酸就保留在层析柱上; 而中性 氨基酸就进入滤液中。吸附在阳离子交换层 吸附 析柱上的氨基酸, 用 ’F GH& GIIH洗脱; 在 阴 离 子 交 换 层 析 柱 上 的 氨 基 酸,用 ")*F F3IH洗脱。
收稿日期: ’""!—!"—"$

万方数据

第$期

专论与综述

对氨基酸的分离及其显色的研究

@

用 !"# 或 !$ %&’ 溶液通过层析柱, 直到洗液 的 (! ) * 为止。然后 用 +,$ "&- 溶液通过层 析柱, 至所得的滤液 (!!./$ 为止。 氨基酸水解液通过交换阴离子的吸附柱 后, 所得到的滤液只含中性氨基酸。 */$ 碱性氨基酸的分离 将氨基酸水解液过滤通过装有含氢或含 铵离子交换吸附剂的层析柱, 等到碱性氨基 酸已进入滤 液为止。用这种方法可使精氨 酸、 组氨酸、 赖氨酸集在柱层上, 不过当氨基 酸水解液通过柱层并用水冲洗后; 也有中性 氨基酸吸附在阳离子交换的树脂上, 此外还 应该注意到用水洗柱达到平衡时溶液的 (! 具有突然的改变, 从 (!$ 0 - 到 (!1 0 2, 此时 应该预期到有某些氨基酸。如酪氨酸、 胱氨 酸和亮氨酸就会沉粘在柱层上。吸附在阳离 子交 换 柱 上 的 氨 基 酸, 可 用 34 !$ %&’ 、 24 ( ’4 ! +!- ) 的溶 !"#、 $54 !"# 或 +!-?!$ & 液, 以及其他碱或盐的溶液洗脱; 若用吡啶的 水溶液或其他弱碱来处理, 首先被洗脱的是 单氨基酸, 而后的是全部组氨酸。在组氨酸 除去后, 再用 5/’4 +!-?!$ & 使赖氨酸洗脱, 而 34 !$ %&’ */34 !$ %&’ 主要使赖氨酸洗脱; 使精氨酸洗脱。 将 355 67 阳离子交换树脂装玻璃管内, 使 +!’ 8 离 子 饱 和, 然 后 小 心 地 洗 柱 层, 待 +!’ 8 完全除去为止。将 $5 69 氨基酸水解 液 (含氮 $5 67, , 以 5/3 0 * 69 (!*/3 0 $/3) 的速度通过柱层, 然后用水洗柱, 用 $55 69 以洗脱酪氨酸 *4 水含甜茶碱的溶液通柱层, 和其他单氨基酸, 柱层再用水洗。组氨酸则 用 *4 吡啶水溶液洗脱, 继续用水冲洗直到 滤液不再含氨基酸为止。以后用 -5 69 水洗 柱, 再 用 *54 +!-?!$ & 洗 脱 赖 氨 酸 和 精 氨 酸。 */酸性氨基酸的分离 万方数据 用氧化铝分离, 用 *+!"# 处理氧化铝,

再用蒸馏水冲洗至不呈酸性为止。将氧化铝 在水中的悬液装入吸附管内, 当尚有少量水 分掩盖着吸附剂表面时, 将准备分析的溶液 倒入层析柱。当分析溶液通过后, 层析柱先 再用普通蒸馏水 用 !$ % 饱和的蒸镏水冲洗, 冲洗, 操作时应小心观察, 吸附剂表面一直有 溶液覆盖着。此时所有的中性氨基酸以及由 都通 于 !$ % 作用于胱氨酸而形成半胱氨酸, 过层析柱, 而吸附在柱上的氨基酸先用 -+ 然后用 5/53+ :&! 洗脱。 :&!, 在255 < 用 -5 7 ;#$ &- 和 $3 7;#"#- 混合, 灼热 $’ = 活力最高, 把氨基酸溶液引入交换 阴离子的氧化铅, 用 35 69 饱和的硫化氢蒸 镏水溶液及 35 69 纯粹的蒸镏水洗涤柱层, 谷氨酸可被 33 69 5/3+ "!- "&&! 和 $5 69 蒸镏水洗脱下来, 天门冬氨酸则被 3 69 -+ :&! 和 ’5 69 5/53 + :&! 洗脱。 用离子交换树脂分离: 将含有双羧基氨 , 通过装有琥珀树脂 *> 基酸的溶液 ( (!- 0 ’) 双羧基氨基酸 ? ’ 的交换阴离子的层析柱, 谷氨酸在 被 吸 附, 用 *+ !"# 溶 液 洗 脱, 随后是天门冬氨 (! $/3时首先被洗脱下来, 酸。假如原来的溶液含有半胱氨酸, 那末在 双羧基氨酸洗脱之后也可能被 *+ !"# 溶液 洗脱下来。 */’ 中性氨基酸的分离 芳香 族 氨 基 酸 的 分 离: 取乌发特树脂 先用 5/$+ "!- "&&! 处理, 然后将芳香 . 7, 族和脂肪族的中性氨基酸混合液引入柱内, 再用水洗涤, 色氨酸就滞留在柱层柱, 它可以 用吡啶水溶液或酒精水溶液洗脱下来。 酪氨酸和苯丙氨酸可在动物炭的层析柱 上吸附, 取 5/3 7 动物炭先用 *4 !"+ 处理, 将溶液加在柱上, 并且用 *55 69 水冲洗, 酪 氨酸和苯丙氨酸可用吡啶和 "!- "&&! 的混 合液洗脱下来。 */’/* 用氧化铝从中性氨基酸中分出胱氨酸

!"

中 国 调 味 品

总第 )-6 期

将 含 有 !" # 氧 化 铝 的 层 析 柱 用 !$ 用 )"" *+ 水与乙醇 (!: %&’%((& 预先处理后, 混合液 ,& -." 冲洗柱层, 在柱上吸附的只有 !) 胱氨酸, 它可以用 !)/ *+ "."/ $0(& 洗脱下来。 甘氨酸、 丙氨酸、 缬氨酸、 白 !.1.) 脯氨酸、 氨酸的分离 将氨基酸 用装有 ’" # 碎陶土的层析柱, 混合液 (令每种各 /*#) 过滤, 用经 %&’ %((& 化的 ,&/./ 的 %&’ %&) (& 水溶液洗柱, 脯氨 酸、 甘 氨 酸 及 丙 氨 酸 就 吸 附 在 柱 上, 可用 !"" *+洗脱。 !.1.’ 脯氨酸与丙氨酸的分离 将含有 /" # 23) (’ 层析柱用 !$%&’ %((& 处理, 在氨基酸混合液滤过柱后, 用 ! 4 ! 的水

与 %&’ %&) (& 溶液 ( ,&-.") 冲洗柱层, 吸附在 柱上的丙氨酸可用水洗脱。 !.1.1 白氨酸与缬氨酸的分离 用 !5 将含有 1 # 的动物炭的层析柱, 吸附在柱上的缬氨酸, 可用’"" *+ &%$ 处理, 磷酸盐缓冲液 ( ,& /.") 洗脱。 将含有 1 # 动物炭的层析柱用 !5 &%$ 处理, 再用 1"" *+ 水将甲硫氨基酸洗脱, 白 (!" 4 氨酸可用吡啶、 %&’ %((& 和水的混合液 洗脱。 "./ 4 !"" 体积比)

)
).!

蛋白质、 多肽、 氨基酸纸上显色法
茚三酮法 茚三酮是氨基酸和多肽显色的重要试

剂, 其作用机制如下:

用毛细管吸取已知与未知样品分别点在 两张或一张层析滤纸上, 点与点之间有一定 距离, 并写上编号, 将点有样品的滤纸充分除 尽溶液剂。用 "./5 茚三酮的无水丙酮溶液 浸过或以 %&’ %&) (& 溶液喷在纸上。试剂内 不可以含水, 否则会把样品冲散, 以致图谱模 温 糊。充分吹干后, 置 6/7 烘箱中约 ’" *89, 度不得太高, 烘箱中不得有氨, 否则容易使纸 谱的背景泛红色。显色完毕即可取出, 将色 层谱上紫色的氨基酸斑点用 6: 铅笔依次圈 出。此法对于多肽也能显色, 但肽越大其灵 万方数据 敏度也越差。

茚三酮除按上述方法与氨基酸作用后显 紫色外, 按不同方法处理又可得到不同颜色。 ).!.! 以 ".1 # 茚三酮, !" # 酚, ;" # 正丁醇 的混合液显色时, 各种氨基酸所显出的颜色 有所不同。 ).!.) 以 ".)5 %<%3) (或 %=>(1 )的 ".15 茚三酮异丙醇溶液显色时,氨基酸斑点呈红 色,也可以在茚三酮显色后喷以含 %<、 %=、 %? 等无机离子的异丙醇溶液,斑点自蓝紫 色转变成红色,上述这些无机离子有稳色作 用。 ).!.’ 以 ".!5 茚三酮溶液显色完毕后, 再

第%期

专论与综述

对氨基酸的分离及其显色的研究

!!

在盐酸蒸气中熏 ! "#$, 氨基酸各显不同颜 色。 %&!&’ 若用相同方法处理与已知氨基酸色 斑比较, 以相同者为该种氨基酸。 %&% 吲哚醌法 的结构式如下: 吲哚醌 ( ()*+#$)

%&’

显色方法 层析或电泳完毕以后的滤纸烘干后,仔

细喷上或涂上显色剂,避免过量的显色剂自 纸上流下,把样品冲散,最好用喷雾极细的 喷雾器,使滤纸上始终没有过量试剂存在。 显色喷上后,颜色不会立刻出现,需用吹风 机迅速吹干,待醋酸气味不太刺鼻时即移置 !// ; 烘箱中,烘 < 9 !< "#$,直到显色完全 为止。注意观察所显出的颜色,然后均匀地 涂上底色褪色剂,纸的背景即由黄色 !红! 浅,待黄色背景几乎褪尽时,迅速用吹风机

不同的氨基酸与吲哚醌试剂能显出不同 的颜色, 由于吲哚醌试剂的配制方法不同, 对 同一种氨基酸所显的颜色往往也有差异。因 此这些试剂的配制方法与标准颜色应该一起 考虑而不要轻易改变。吲哚醌试剂非但可以 显色, 而且从其颜色的区别可以帮助辨氨基 酸, 除了氨基酸之外, 一些氨基酸的衍生物 如: ) , 苄基半胱氨 !, 对甲苯磺酸赖氨酸, 酸, 以及一些小肽如甘氨酰苯丙氨酸等均可 显色。因此, 此试剂一般仅作氨基酸、 氨基酸 衍生物或小肽显色。 %&%&-&! 吲哚醌试剂配制方法 显色剂

吹干,并观察颜色变化。例如苏氨酸在褪色 前为浅红带褐色,褪色后则呈橙黄色或黄 色;脯氨酸在褪色前为普蓝色,褪色后吸干 时很快褪成无色。室温较低时,底色褪色很 快,此时可先将褪色剂加温至 -/ 9 ’/; 再 行褪色。

-

=2 指示剂显色法

在溶 剂 已 除 尽 的 滤 纸 上 喷 上 =2 指 示 剂, 则蛋白质、 多肽或氨基酸即显色, 以下是 一些较常用的 =2 指示剂的配制方法。 -&! ’/ ". 溴 酚 蓝 溶 于 !/ "0 的 !/5 后加 %//". 柠檬酸, 显 12- 12% 32 水溶液中, 色时黄的背景上呈蓝色。 -&% ’/ ". 溴酚蓝溶于 </ "0 12- 12% 32 及 </ "0 苯中,显色后背景呈浅蓝色,肽或氨 基酸则自黄色至深蓝色,往往视 =2 而定, 酸则黄,碱则蓝,不溶于水的肽最后可用水 小心将底色冲去,肽的颜色就格外显得清 楚。

! . 吲 哚 醌 溶 于 !// "0 12- 12% 32 及 若冰醋酸用量减少则灵敏度 !/ "4冰醋酸中, 稍低。 %&-&% 底色褪色剂 在 !// "0%/5 6*% 13- 溶液中加入 7/ . 硅酸钠 ( 6*)#3-?82% 3) 在水浴 ( 7/ 9 :/; ) 上 加热搅拌直到完全溶解, 待溶液变得比较清 澈为止。在溶解过程中, 有时硅酸钠会结成 凝胶, 这时, 只要耐心搅拌即可溶解, 配试剂 时若硅酸钠用量过多则褪色较快, 但背景容 虽褪色较慢, 易变黄, 硅酸钠用得少 (用 ’/ .) 但背景较为洁白。 万方数据



个别氨基酸的特殊显色法
个别氨基酸与某些试剂具有特殊的显色

作用, 因此常借这些显色剂来区别个别氨基 酸, 而且对于多肽和蛋白质的显色也有很大 帮助。

#$

中 国 调 味 品

总第 $FI 期

!"#

氨基酸的呈色反应

!"#"# 含硫氨基酸 胱氨酸与半胱氨酸的呈色: 先在纸上喷 射稀 $% & !% ’(), 然后再喷射 *% 新鲜制 备的亚硝基铁氰化钠水溶液, 如含硫氨基酸 就出现红色斑点。 !"#"#"# 试剂的配制 试 剂 甲:#"+ , 亚 硝 酰 铁 氰 化 钠 ( -./" 0123.435661/7, 分 子 式: ( () ) )8$ 97 + ):? $;$ : )溶 于 + <= 的 $);$ -:! 中,加 入 这种溶液 >+<=(;* :;。这时会有沉淀产生, 可保存一个月以上。使用时在上述溶液中 若还有沉淀 #?? <= 加入#? <=$@% );*?;$ :, 存在, 可以过滤除去沉淀物, 清液仅保持 # & $ /。 然后加入 试剂乙: )8() 溶于 + <= 水中, 若有沉淀, 使用时只需把沉淀 >+ <= (;* :;, 摇匀倒出即可。 !"#"#"$ 呈色方法 点样: 将酸水解氨基酸液约 $? ! < 的溶 液, 用定量毛细管点样于相当华脱门 ( AB82C 在点样处用 <80) # 号杭州新华定性滤纸上, 铅笔 作 一 个 记 录, 点样小的扩散直径约 电热吹干。 ?"+D<, 在纸上涂上或喷上试剂甲的清液, + <10 后, 半胱氨酸就显红色。若是胱氨酸则先将 纸片浸入试剂乙, 迅速取出, 稍待片刻再以试 剂甲的清液喷上, 胱氨酸显红色。 + <10 后, 亦可把试剂甲与试剂乙在显色前混和, 再行 喷上滤纸。 此法只对半胱氨酸中的 E -; 基有效, 它 的衍生物如 - E 苄基半胱氨酸就不起呈色反 应。 !"#"$ 精氨酸 试 剂 甲: 溶 解 + , 尿 素 于 #?? <= 的 使用前, ?"?#% $ E 萘酚 (;* (;$ :; 溶液中, 万方数据 (此时含 每 #??<= 上述溶液中加入 + 粒 ’:;

。 ’:; 浓度为 +% ) 试 剂 乙: ?"F <= 的 )8:(G 浓 溶 液 或 (#I@J 使 $ , 溴溶于 +? <= 的 +% )8:H3溶液 。 )8:; 溶液中) 呈色: 在滤纸上喷试剂甲后, 片刻再喷以 试剂乙, 如含精氨酸显红色。 酪氨酸呈色反应 !"#"* 组氨酸、 ( -5G4B801G1D 试剂甲: !"+ , 对氨基苯磺酸 与 !+ <= #$) ;(G 共热溶解, 以水稀释 8D1/) 至 +?? <=, 在 ?J , 将此溶液与等体积的 +% )8):$ 水溶液相混合。 试剂乙: #?% )8$ (:* 。 呈色方法: 纸上先喷试剂甲, 片刻后再喷 以试剂乙。组氨酸呈桔红色; 酪氨酸呈浅红 色。 !"#"! 色氨酸呈色反应 用 $% 磷 二 甲 基 苯 甲 醛 的 #?% & #+% 在 纸 上 喷 射, 在 #?? J 下 加 热 ;(G 溶 液, 如含色氨酸呈紫色斑点。 ! & + <10, !"#"+ 脯氨酸呈色反应 试剂甲: # , 吲哚醌与 #"+ , 醋酸锌, # <= 醋酸, 再加入 >+ <= 的异丙 + <= 水相混和, 醇即可应用。 呈色方法: 将层析完毕后的纸谱除尽层 析溶液, 以吲哚醌试剂喷之, 在 @? & @+J 烘 箱中 放 置 *? <10。脯 氨 酸 显 蓝 色, 再以约 此时纸的背景 *? J 的温水洗净多余的试剂, 为白色或浅黄色, 剪下蓝色斑点的脯氨酸, 放 于干净试管中, 加入 + <= 以水饱和的酚, 在 然后于 黑 暗 中 洗 脱 并 间 歇 振 摇 #+ <10, I#?< !测定其光密度。从已知标准曲线即可 知道该样品内脯氨酸的含量。一般脯氨酸含 量约在 + & $? 微克为宜。 !"$ 莫奈氏试剂与各氨基酸的呈色反应 蒸镏水 !"$"# 莫奈氏试剂: !?% ;(;: #<=, !+<=, ;$ -:!++<=。 !"$"$ 呈色反应见表 #

第.期 表! 颜色 棕黑 棕红 淡棕 无色 绿色

专论与综述 莫奈氏试剂与各氨基酸呈色反应 颜色 棕色 黄色 淡黄 氨基酸

对氨基酸的分离及其显色的研究

!2

氨基酸 色氨酸 脯氨酸 组氨酸 蛋氨酸 酪氨酸

待背景变 !$6 醋酸甲醇溶液洗涤约 " 0 , 次, 成浅蓝色即止, 干燥后, 若欲进行洗脱, 则可 用 26 0 "6 酚溶于 !$6 醋酸的溶液分别洗 脱, 比色测定。 "#. 脂蛋白的显色法 ( )<=8( ;>8?@) "#.#! 苏丹黑 将苏丹黑溶于煮沸的 4$6A-2A-.*- 溶液 中, 制成饱和溶液, 冷却后, 过滤二次, 待用。 染色时将纸条浸于上述溶液中, 2 5 后取 出, 以 "$6 A-2 A-. *-, 溶液洗涤三次, 每次 !" %3(。 ( *3>BC=) "#.#. 油红— * 约 !4 5, 将染料浸入 4$6 A-2 A-. *- 中, 待其在室温下达到饱和为止, 滤去多余的染 料, 澄清的饱和溶液, 即可作染色用, 将电泳 层析后的纸条浸入染色饱和溶液过夜, 次晨 取出, 以水冲洗, 使背景变浅, 在空气中干燥。 "#2 醣蛋白的显色法 试剂甲—过碘酸: !#. & 过碘酸溶于2$ %/ 蒸镏 水 中, 加 !" %/ $#. D 醋 酸 钠 溶 液, 及 保存于有色小瓶, 可用数日。 !$$ %/ A-2A-.*-, 试剂乙—还原剂: " & 碘化钾, " & 硫代硫酸 钠 溶 于 !$$ %/ 蒸 镏 水 中, 再 加 入 !"$ %/ 现配现用。 A-2A-.*- 和 .#" %/ .7-A>, 试剂丙—品红硫酸盐: . & 碱性品红溶于 冷却至 "$ 1 过滤。在滤液中 +$$ %/ 沸水中, 加 !$ %/ .7-A> 和 + & 偏亚硫酸钾 ( E. ). *" ) , 将瓶塞紧置于冰箱过夜, 再加 ! & 活性炭, 过 滤, 再逐渐加 .7 -A>, 直到这溶液在玻片上 干后不变红色为止, 保存于棕色小瓶, 放冰箱 待用, 若溶液变红, 不宜使用。 试剂丁—洗涤剂: 在 !$$ %/ 水中加! %/ 浓 -. )*+ , $#+ & E. ). *" 。 显色步骤: 将纸条浸于 A-2 A-. *- 中, 片 刻 吹 干;在 试 剂 甲 中 浸 " %3(;以 ,$6 A-2 A-. *- 洗 涤 一 次;在 试 剂 乙 中 洗 以 ,$6 A-2 A-. *- 洗一次; 在试剂 " 0 F %3(;

胱氨酸、 亮氨酸、 异亮氨 酸 精氨酸、 缬氨酸、 丙氨酸、 谷氨酸、 天门冬氨酸 赖氨酸、 苏氨酸、 丝氨酸

微黄 苯丙氨酸

"
"#!

蛋白质的特殊显色法
蛋白质的显色法 溴酚蓝显色法。 !$$ %& 溴 酚 蓝 与 "$ &

? 以水稀释 ,-. * 溶于 "$ %/ 冰醋酸中, ’()*+ 至 ! /。经 电 泳 或 层 析 后 的 滤 纸 置 !!$ 0 然后平放于显色槽中, 显色 !.$1 烘 2$ %3(, 显色完毕, 用 .6 醋酸洗涤 2 0 + 次, 每 !4 5, 次 !$ %3( 左右, 最后用醋酸钠和 !$6 醋酸混 和物洗涤 . %3(, 取出后, 吹去多余的溶液, 置 !.$1 烘箱中烘 !$ %3(。 假使要在纸上测定各组分的相对含量, 可将显色的滤纸直接在光密度计每隔一定距 离读数一次, 或者为了增加透光度起见, 将滤 纸浸于石蜡油置真空干燥器内, 抽去纸隙中 的空气, 悬挂片刻, 使多余的石蜡 . 5 后取出, 油流掉, 再用滤纸吸去纸面上多余的油。如 此处理后的纸用玻璃片夹好, 在光密度计中 读数, 每移动 ! %/ 或数 %/ 读数一次, 将光 密度读数为纵座标, 距离为横座标, 即得峰形 图, 每一个峰占总面积之百分率即该相应组 分之 百 分 含 量; 也 可 将 色 带 分 别 剪 下, 以 在 "9$ % $#$! 778*- 洗脱, ! 波长下测定其 光密度。这一步操作必须在 ! 5 内完成, 否 则溴酚蓝颜色将褪去。 注意在显色槽内不可有氯化汞和乙醇存 在, 否则显色大大降低, 峰的差别不太显著。 将纸浸入氨基黑 : !$ ; 的饱和甲醇溶 万方数据 液 (含 !$6 醋 酸) , 染 色 !$ %3(, 染 色 后, 用

/"

中 国 调 味 品

总第 !.0 期

丙中 浸 !" # "$%&’; 以 试 剂 丁 洗 三 次; 以 放在玻璃板上吹干。 ()* ()! +) 脱水后, 显色结果: 在黑灰色的底板上呈现紫红 色的条纹。 焦谷 氨基酸水解液尚含有柠檬酸 ,-*., 乳 酸 , - ,/$ , 草 酸 , - ,/0 , 蚁酸 氨 酸 , - ,"$ ,
表! 名 称 酸水解脱脂豆粕液中氨基酸 的组成 ( 1 2 /,, %3) 含量 名 称 含量 名 称 含量 备 考 甘 氨 酸 异亮氨酸 苯丙氨酸 天门冬氨酸 精 氨 酸 ,-*, 色氨酸 , 脯氨酸 ,-*4 色氨酸分解 ,-** 胱氨酸 ,-!, 苏氨酸 ,-!* ,-*4 丙氨酸 ,-/. 亮氨酸 ,-$* ,-.* 缬氨酸 ,-*4 酪氨酸 ,-!/

0

结果讨论

0-/ 此实验在中山大学生物学曾淑云,陈 俊民恩师指导下进行,并提供标准纯氨基酸 与试剂,在此让我们永远怀念恩师的厚爱。 0-! 氨基酸的分离应严格执行正规的操作 规程, 细心进行, 否则难以重复实验结果。 肽、 蛋白质、 脂蛋白、 醣蛋白的 0-* 氨基酸, 呈色反应, 必须准确细心配准试剂, 迅速准时 细心对比色斑。
参考文献: [/] 有机分析点滴试验 (英译) [ 9] 燃料化学 - 北京: 工业出版社, /5.![!] 实用生物化学上、 下册 [ 9] - 人民卫生出版社, 北京: /50$[*] 潘家秀 - 蛋白质化学研究技术 [ 9] - 科学出版 社, /50!-

,-*5 丝氨酸 ,-** 蛋氨酸 ,-,. (盐酸盐) 谷氨酸 /-/" 赖氨酸 ,-$! 组氨酸 (盐酸盐) ,-/4 (盐酸盐)

醋 酸 ,-"0,6! +$,-!",7! + ,-",(8+ ,-!., 91+ ,-,4。 ,-,0,

万方数据


相关文章:
实验七 氨基酸的分离鉴定
实验七 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 一、目的 通过氨基酸的分离,学习纸层析法...对氨基酸的分离及其显色的研究 [J]. 中国调味品. 2002,(2):8-12 3、 翁...
氨基酸的分离与鉴定
实验一 氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法 氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法 ...应该注意的是,使用茚三酮显色法,在整个层析操作中,避免用手接触层析纸,因手...
氨基酸的分离鉴定—纸层析法
氨基酸的分离鉴定—纸层析法_生物学_自然科学_专业资料。化学与生物工程学院生物...(6) 显色:用喷雾器在通风厨中向滤纸上均匀喷上 0.1%茚三酮正丁醇溶液,...
纸层析法—氨基酸的分离与鉴定
纸层析法——氨基酸的分离与鉴定 一、 实验目的 1...,PH 值,温度,滤纸的性 质等等,本实验不予探究。...原点到溶剂前沿的距离 Y 4、 显色原理:茚三酮在...
实验11 氨基酸的薄层层析分离和鉴定
实验11 氨基酸的薄层层析分离和鉴定一 实验目的 1.理解薄层层析原理, 2.掌握...25ml (3)展开剂:水:乙醇:乙酸 = 1:6:0.5 500ml (4)显色剂:0.5%茚...
实验三 氨基酸的分离鉴定
流动相流经支持物时固定相之间连续抽提 ,使物质在两相之间不断分配而得到分离。 ※氨基酸层析图谱常用茚三酮作显色剂 。氨基酸分离后 ,在层析图谱上的位置用...
实验三 氨基酸的分离鉴定
实验目的 通过对氨基酸的分离, 学习运用纸层析法分离混合物的基本原理, 掌握纸...分钟即可 7.显色:用喷雾器均匀喷上 0.5%茚三酮正丁醇溶液,然后置 100℃...
纸层析法分离氨基酸实验报告
纸层析法分离氨基酸实验报告_生物学_自然科学_专业资料。前言纸层析法 纸层析法...(5)Rf 值的计算 用尺测量显色斑点中心原点 (点样中心) 之间距离和...
氨基酸的薄层层析实验报告
(即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行,而将样品各组分分离开 来) 1.1.2. 氨基酸与茚三酮的显色反应茚三酮水化后生成的水合茚三酮在加热时被还原,...
氨基酸的薄层层析
医药卫生、化 学工业、农业生产和食品等领域,对天然化合物的分离和鉴定也已广泛...氨基酸的显色反应:茚三酮水化后生成水化茚三酮,它与氨基酸发生羧基反应生成...
更多相关标签:
氨基酸显色剂 | 氨基酸显色 | 氨基酸的显色反应 | 氨基酸显色反应 | 纸层析法分离氨基酸 | 纸层析分离氨基酸 | 纸色谱法分离氨基酸 | 氨基酸的分离鉴定 |